本文關鍵詞：骨肉瘤多藥耐藥細胞系的建立及其分子機制研究

  更多相關文章： 骨肉瘤 長春新堿 多藥耐藥 腫瘤異質(zhì)性 LIMK1

【摘要】：骨肉瘤是最常見、惡性程度最高的骨腫瘤,多藥耐藥現(xiàn)象常有發(fā)生。鑒于目前關于骨肉瘤多藥耐藥的研究欠缺,因此需要模擬臨床用藥,建立骨肉瘤耐藥細胞系來研究其生物學特性及耐藥機制的改變。由于實體腫瘤常常由不同的細胞亞群的亞克隆構(gòu)成,具有腫瘤異質(zhì)性,在細胞水平上不同的耐藥機制可能參與其中。因此我們通過將人骨肉瘤細胞系MG63培養(yǎng)在含長春新堿(VCR)濃度梯度增高的培養(yǎng)液中,建立了四株耐藥指數(shù)逐漸增高的骨肉瘤MG63/VCR耐藥亞系,分別命名為MG63/VCR1,MG63/VCR2,MG63/VCR3,MG63/VCR4。通過CCK8實驗測定了他們的耐藥指數(shù),耐藥衍生系相比于親本MG63對長春新堿的耐藥指數(shù)分別達163,476,1247,2707倍。并且對DOX,THP,PTX交叉耐藥。隨著耐藥指數(shù)的增加,細胞的某些生物學特性表現(xiàn)出漸進性的變化。應用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)差異,發(fā)現(xiàn)耐藥細胞亞系有著長梭形的形態(tài),細胞兩極的突起明顯增長。細胞的增殖能力檢測實驗發(fā)現(xiàn)耐藥細胞的增殖能力與耐藥指數(shù)呈負相關,這反映在CCK8增殖實驗,也反映在平板克隆實驗形成的克隆體積上,以及細胞周期檢測結(jié)果中。但是細胞的遷移能力及某些耐藥相關基因的表達卻不是隨著耐藥程度的增加而線性變化:我們用RT-PCR,實時定量PCR檢測了五種細胞中MDR1,MRP1,Topo-II,LIMK1,GST-π等在基因表達上的差異。MDR1和MRP1的表達在耐藥細胞中顯著高于親本MG63。但高度耐藥的MG63/VCR3及MG63/VCR4細胞中,MRP1的表達量反而低于中度耐藥的MG63/VCR2,這個趨勢與TOPO-II,LIMK1一致,后者被認為與細胞的運動能力、遷移等密切相關。此外GST-π的表達沒有差異。通過檢測胞內(nèi)多柔比星(DOX)的聚積評價耐藥細胞的外排功能,結(jié)果顯示:隨耐藥程度增加,胞內(nèi)熒光強度逐漸降低,但加入鈣離子通道阻滯劑維拉帕米后,胞內(nèi)DOX又都有顯著增強。上述結(jié)果提示,腫瘤細胞耐藥程度不同,其耐藥機制可能也在發(fā)生變化。綜合細胞的形態(tài)等變化,我們認為瘤內(nèi)克隆和表型的異質(zhì)性改變是其根本原因。綜上所述,MG63/VCR差異耐藥細胞系的建立是評估人骨肉瘤耐藥的生物學特性改變及機制、篩選新的耐藥相關基因的非常重要的工具。同時為臨床上攻克腫瘤多藥耐藥提供了更加全面、完善的實驗依據(jù)。
【關鍵詞】：骨肉瘤 長春新堿 多藥耐藥 腫瘤異質(zhì)性 LIMK1
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞表9-11
• 第1章 腫瘤多藥耐藥的分子機制研究進展11-17
• 1.1 ABC跨膜轉(zhuǎn)運蛋白超家族與藥物外排12-13
• 1.2 DNA損傷的修復13
• 1.3 旁路途徑的激活13-14
• 1.4 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換14-15
• 1.5 腫瘤微環(huán)境的改變15-16
• 1.6 總結(jié)16-17
• 第2章 骨肉瘤多藥耐藥細胞系的建立及生物學特性分析17-34
• 2.1 前言17
• 2.2 實驗材料17-19
• 2.3 實驗方法19-25
• 2.4 實驗結(jié)果25-32
• 2.5 討論32-34
• 第3章 人骨肉瘤MG63/VCR多藥耐藥細胞系的耐藥機制研究34-48
• 3.1 前言34
• 3.2 實驗材料34
• 3.3 實驗方法34-40
• 3.4 實驗結(jié)果40-46
• 3.5 討論46-48
• 第4章 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-57
• 作者簡介及在學期間取得的科研成果57-58
• 致謝58

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9 朱U，

本文編號：1132505