本文關(guān)鍵詞：骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞系的建立及其分子機制研究

  更多相關(guān)文章： 骨肉瘤 長春新堿 多藥耐藥 腫瘤異質(zhì)性 LIMK1

【摘要】：骨肉瘤是最常見、惡性程度最高的骨腫瘤,多藥耐藥現(xiàn)象常有發(fā)生。鑒于目前關(guān)于骨肉瘤多藥耐藥的研究欠缺,因此需要模擬臨床用藥,建立骨肉瘤耐藥細(xì)胞系來研究其生物學(xué)特性及耐藥機制的改變。由于實體腫瘤常常由不同的細(xì)胞亞群的亞克隆構(gòu)成,具有腫瘤異質(zhì)性,在細(xì)胞水平上不同的耐藥機制可能參與其中。因此我們通過將人骨肉瘤細(xì)胞系MG63培養(yǎng)在含長春新堿(VCR)濃度梯度增高的培養(yǎng)液中,建立了四株耐藥指數(shù)逐漸增高的骨肉瘤MG63/VCR耐藥亞系,分別命名為MG63/VCR1,MG63/VCR2,MG63/VCR3,MG63/VCR4。通過CCK8實驗測定了他們的耐藥指數(shù),耐藥衍生系相比于親本MG63對長春新堿的耐藥指數(shù)分別達(dá)163,476,1247,2707倍。并且對DOX,THP,PTX交叉耐藥。隨著耐藥指數(shù)的增加,細(xì)胞的某些生物學(xué)特性表現(xiàn)出漸進(jìn)性的變化。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)差異,發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞亞系有著長梭形的形態(tài),細(xì)胞兩極的突起明顯增長。細(xì)胞的增殖能力檢測實驗發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞的增殖能力與耐藥指數(shù)呈負(fù)相關(guān),這反映在CCK8增殖實驗,也反映在平板克隆實驗形成的克隆體積上,以及細(xì)胞周期檢測結(jié)果中。但是細(xì)胞的遷移能力及某些耐藥相關(guān)基因的表達(dá)卻不是隨著耐藥程度的增加而線性變化:我們用RT-PCR,實時定量PCR檢測了五種細(xì)胞中MDR1,MRP1,Topo-II,LIMK1,GST-π等在基因表達(dá)上的差異。MDR1和MRP1的表達(dá)在耐藥細(xì)胞中顯著高于親本MG63。但高度耐藥的MG63/VCR3及MG63/VCR4細(xì)胞中,MRP1的表達(dá)量反而低于中度耐藥的MG63/VCR2,這個趨勢與TOPO-II,LIMK1一致,后者被認(rèn)為與細(xì)胞的運動能力、遷移等密切相關(guān)。此外GST-π的表達(dá)沒有差異。通過檢測胞內(nèi)多柔比星(DOX)的聚積評價耐藥細(xì)胞的外排功能,結(jié)果顯示:隨耐藥程度增加,胞內(nèi)熒光強度逐漸降低,但加入鈣離子通道阻滯劑維拉帕米后,胞內(nèi)DOX又都有顯著增強。上述結(jié)果提示,腫瘤細(xì)胞耐藥程度不同,其耐藥機制可能也在發(fā)生變化。綜合細(xì)胞的形態(tài)等變化,我們認(rèn)為瘤內(nèi)克隆和表型的異質(zhì)性改變是其根本原因。綜上所述,MG63/VCR差異耐藥細(xì)胞系的建立是評估人骨肉瘤耐藥的生物學(xué)特性改變及機制、篩選新的耐藥相關(guān)基因的非常重要的工具。同時為臨床上攻克腫瘤多藥耐藥提供了更加全面、完善的實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 長春新堿 多藥耐藥 腫瘤異質(zhì)性 LIMK1
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞表9-11
• 第1章 腫瘤多藥耐藥的分子機制研究進(jìn)展11-17
• 1.1 ABC跨膜轉(zhuǎn)運蛋白超家族與藥物外排12-13
• 1.2 DNA損傷的修復(fù)13
• 1.3 旁路途徑的激活13-14
• 1.4 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換14-15
• 1.5 腫瘤微環(huán)境的改變15-16
• 1.6 總結(jié)16-17
• 第2章 骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性分析17-34
• 2.1 前言17
• 2.2 實驗材料17-19
• 2.3 實驗方法19-25
• 2.4 實驗結(jié)果25-32
• 2.5 討論32-34
• 第3章 人骨肉瘤MG63/VCR多藥耐藥細(xì)胞系的耐藥機制研究34-48
• 3.1 前言34
• 3.2 實驗材料34
• 3.3 實驗方法34-40
• 3.4 實驗結(jié)果40-46
• 3.5 討論46-48
• 第4章 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 作者簡介及在學(xué)期間取得的科研成果57-58
• 致謝58

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9 朱U，

本文編號：1132505