本文關(guān)鍵詞：RUNX3抑制小鼠惡性黑色素瘤細(xì)胞B16F10遷移并上調(diào)WGEF表達(dá)的研究

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【摘要】：眾所周知,癌癥是影響到我們?nèi)祟惤】档闹饕膊≈?直接威脅到了我們很多人的生命安全。而癌癥臨床治愈率低的主要原因是由于惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移特性。而到目前為止,由于腫瘤轉(zhuǎn)移的高度復(fù)雜性,我們還是沒有完全深入地理解腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制。腫瘤的成功轉(zhuǎn)移,首先依靠于腫瘤細(xì)胞自身的遷移能力,然后順利的侵入周圍組織,最后成功穿過血管或者淋巴管,在新的部位形成轉(zhuǎn)移灶。也可以說(shuō),腫瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移的范圍主要依賴于腫瘤細(xì)胞的遷移能力。而腫瘤細(xì)胞的遷移需要很多步驟的協(xié)同調(diào)控,其中包括,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)方向的前端突起,胞體向前移動(dòng)以及尾部收縮等幾個(gè)階段。得益于以上幾個(gè)步驟的不斷重復(fù),細(xì)胞才能連續(xù)不斷地向前遷移運(yùn)動(dòng)。在這些步驟中,肌動(dòng)蛋白骨架的重排為細(xì)胞前端形成突起及胞體的向前移動(dòng)提供動(dòng)力。最近幾年的研究表明,在很多的腫瘤中,RUNX3基因作為一種腫瘤抑制基因,其異常的表達(dá)在多種腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展中起著重要的作用,但是目前其抑癌機(jī)制尚不完全清楚。在本文中,通過劃痕實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn),RUNX3能夠抑制小鼠惡性黑色素瘤B16F10細(xì)胞的遷移,并且影響了細(xì)胞的形態(tài)和偽足。細(xì)胞計(jì)數(shù)及倒置顯微鏡觀察顯示,RUNX3沒有影響細(xì)胞的增殖和鋪展。鬼筆環(huán)肽標(biāo)記結(jié)果顯示RUNX3能夠增強(qiáng)細(xì)胞中應(yīng)力纖維的形成,而使用RhoA的抑制劑可以打斷RUNX3對(duì)應(yīng)力纖維的調(diào)控。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),RUNX3可以上調(diào)鳥嘌呤核苷酸交換因子WGEF (Arhgefl9)的表達(dá)。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們推斷,RUNX3可能是通過上調(diào)WGEF調(diào)控應(yīng)力纖維的重排而抑制小鼠惡性黑色素瘤細(xì)胞B16F10的遷移。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤細(xì)胞遷移 應(yīng)力纖維 RUNX3 WGEF
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 第一章 前言8-19
• 1.1 腫瘤轉(zhuǎn)移及腫瘤細(xì)胞遷移8-10
• 1.1.1 腫瘤轉(zhuǎn)移概述8-9
• 1.1.2 腫瘤細(xì)胞遷移概述9-10
• 1.2 肌動(dòng)蛋白骨架概述10-14
• 1.2.1 細(xì)胞中的應(yīng)力纖維10-14
• 1.3 RUNX3基因14-17
• 1.3.1 RUNX3基因結(jié)構(gòu)14
• 1.3.2 RUNX3基因的腫瘤抑制機(jī)制14-15
• 1.3.3 RUNX3基因與各種腫瘤的關(guān)系15-17
• 1.4 WGEF基因17-18
• 1.4.1 WGEF基因結(jié)構(gòu)17-18
• 1.4.2 WGEF基因生物學(xué)功能18
• 1.5 論文的研究目的和意義18-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法19-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2.1.1 細(xì)胞和質(zhì)粒19
• 2.1.2 抗體、試劑和酶19
• 2.1.3 培養(yǎng)基及主要溶液19
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 2.2.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)20
• 2.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)20
• 2.2.3 免疫熒光標(biāo)記(Immunofluorescence,IF)20-21
• 2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系21
• 2.2.5 反式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)21-23
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析討論23-29
• 3.1 RUNX3影響B(tài)16F10細(xì)胞的遷移和形態(tài)23-24
• 3.1.1 RUNX3抑制B16F10細(xì)胞的遷移23
• 3.1.2 RUNX3改變B16F10細(xì)胞的形態(tài)23-24
• 3.2 RUNX3不影響B(tài)16F10細(xì)胞的增殖和鋪展24-25
• 3.2.1 RUNX3不影響B(tài)16F10細(xì)胞的增殖24
• 3.2.2 RUNX3不影響B(tài)16F10細(xì)胞的鋪展24-25
• 3.3 RUNX3調(diào)控B16F10細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的重排25-26
• 3.3.1 RUNX3對(duì)B16F10細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的影響25-26
• 3.3.2 RhoA抑制劑可以打斷RUNX3對(duì)B16F10細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的影響26
• 3.4 RUNX3可以上調(diào)WGEF的表達(dá)26-27
• 3.5 WGEF的表達(dá)影響B(tài)16F10細(xì)胞的形態(tài)27-29
• 3.5.1 確立獲得表達(dá)WGEF的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞27
• 3.5.2 WGEF影響B(tài)16F10細(xì)胞的形態(tài)27-29
• 第四章 討論29-31
• 4.1 RUNX3抑制B16F10細(xì)胞的遷移,影響其細(xì)胞形態(tài)29
• 4.2 RUNX3不是通過調(diào)控細(xì)胞的增殖和鋪展抑制其遷移29
• 4.3 RUNX3調(diào)控B16F10細(xì)胞的遷移和形態(tài)是由應(yīng)力纖維的重排介導(dǎo)的29
• 4.4 RUNX3可能通過上調(diào)WGEF調(diào)控應(yīng)力纖維的重排29-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 英文縮寫34-35
• 致謝35

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3 梅，

本文編號(hào)：1132670