本文關(guān)鍵詞：抗PD-L1單克隆抗體聯(lián)合5-氮雜胞苷對食管癌細胞株KYSE450治療的研究

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【摘要】：目的:表觀治療藥物5-氮雜胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)聯(lián)合抗PD-L1(programmed death ligand 1)單抗對食管癌細胞株KYSE450進行免疫和表觀治療,探討表觀治療藥物5-Aza對食管癌細胞KYSE450的PD-L1蛋白表達變化,以及聯(lián)合單克隆抗體治療對食管癌細胞株KYSE450基因、蛋白表達和生長狀態(tài)之間的關(guān)系。檢測PD-L1(programmed death ligand 1)和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)的表達在食管癌細胞株KYSE450生長狀態(tài)改變情況。方法:1.采用5-Aza治療食管癌細胞株KYSE450,蛋白印記雜交技術(shù)檢測細胞中PD-L1蛋白表達,觀察5-Aza藥物治療后對腫瘤細胞中PD-L1蛋白表達變化。2.建立體外誘導腫瘤特異性淋巴細胞與KYSE450食管癌細胞進行混合培養(yǎng),觀察模擬體外免疫系統(tǒng)5-Aza藥物與抗PD-L1單抗聯(lián)合的作用進行分析。3.應用甲基化特異性PCR檢測DNMT1基因和PD-L1基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)改變情況。4.應用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測用藥治療后DNMT1基因和PD-L1基因mRNA的表達改變。5.應用Western blot檢測用藥后各組DNMT1基因和PD-L1基因蛋白表達改變。6.應用ELISA檢測細胞外分泌的PD-L1蛋白變化。7.細胞劃痕試驗鑒定KYSE450食管癌細胞株的細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果:1.5-Aza治療KYSE450食管癌細胞72h后,PD-L1蛋白表達增加;2.成熟的DC細胞與KYSE450食管癌細胞混合培養(yǎng)時可見二者相互結(jié)合3.治療組的DNMT1、PD-L1基因蛋白、甲基化表達比對照組低,DNMT1呈現(xiàn)遞減的趨勢。4.QRT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),治療組5-Aza處理后的PD-L1的m RNA表達比對照組高,抗體組與混合組均比對照組表達低;5.Western blot結(jié)果顯示,藥物治療組的DNMT1蛋白表達比對照組低,5-Aza治療組的PD-L1蛋白比對照組明顯增高,抗體組與混合組均比對照組表達低。6.比較各組細胞上清中的PD-L1水平,各治療組的濃度明顯低于對照組(P0.05)。7.細胞劃痕試驗結(jié)果顯示聯(lián)合用藥治療后對食管癌細胞株KYSE450的細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力有明顯下降作用。結(jié)論:1.5-Aza治療KYSE450細胞可使PD-1/PD-L1信號通路增強。2.表觀藥物5-Aza聯(lián)合抗PD-L1單抗治療時,在腫瘤特異性CTL的作用下對食管癌細胞的增殖、侵襲較單一治療明顯抑制。3.抗PD-L1抗體聯(lián)合甲基化抑制劑對體外誘導細胞毒性T淋巴細胞與KYSE450抗原負載作用下的PD-L1蛋白表達、mRNA轉(zhuǎn)錄水平、PD-L1啟動子甲基化狀態(tài)的影響及細胞分泌蛋白、侵襲、轉(zhuǎn)移能力有著密切的相關(guān)。4.抗PD-L1單抗進行免疫治療有效的同時可能會引起非DNA序列改變,使細胞株呈現(xiàn)低甲基化狀態(tài),使細胞基因重編程序或者提升T細胞的活化和功能發(fā)揮。5.抗體治療聯(lián)合5-Aza進行檢測發(fā)現(xiàn)DNA甲基化在T淋巴細胞的基因表達中起著調(diào)控作用,可使外周血T細胞DNA失去一定程度的甲基化,促使多種分子的表達分泌。
【關(guān)鍵詞】：食管癌 PD-L1 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶 表觀遺傳 5-氮雜胞苷
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英漢縮略詞對照表8-9
• 前言9-11
• 1 材料與方法11-23
• 1.1 實驗材料與儀器11-13
• 1.2 實驗的方法13-14
• 1.3 實驗分組14-23
• 2 結(jié)果23-31
• 2.1 PD-L1蛋白表達水平23
• 2.2 DC細胞與腫瘤特異性CTL的制備23-25
• 2.3 抗PD-L1單抗對KYSE450細胞生長情況25
• 2.4 DNMT1、PD-L1甲基化水平25-26
• 2.5 DNMT1、PD-L1基因m RNA表達26-27
• 2.6 DNMT1、PD-L1蛋白表達水平27-28
• 2.7 細胞劃痕實驗28-30
• 2.8 ELISA檢測治療后細胞上清中的PD-L1表達30-31
• 3 討論31-34
• 4 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-39
• 綜述39-48
• 參考文獻43-48
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄48-49
• 致謝49-50

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1 周瑩;陳永井;白利雄;朱耿超;王雪峰;張學光;;鼠抗人PD-L1功能性單克隆抗體的研制及其生物學特性的鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年11期

2 古彥錚;薛群;王泳;於葛華;沈宇;王明元;張學光;;人胎盤源與人骨髓源間充質(zhì)干細胞的生物學特性的比較及負性協(xié)同刺激分子PD-L1的表達[J];中國免疫學雜志;2009年05期

3 王春燕;張連生;柴曄;宋飛雪;劉瑛;曾鵬云;吳重陽;岳玲玲;李莉娟;;PD-L1阻斷對慢性粒細胞白血病源性樹突狀細胞功能影響的實驗研究[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年S1期

4 吳昌平,朱一蓓,趙潔敏,季枚,徐寬楓,張光波,張學光;胃癌組織中PD-L1的表達及其與預后的關(guān)系[J];現(xiàn)代免疫學;2005年04期

5 劉們;劉映峰;徐琳;繆緋;李公信;趙歡;張紫微;;辛伐他汀對內(nèi)皮細胞PD-L1表達的影響[J];山東醫(yī)藥;2009年36期

6 于曉偉;李春紅;張松靈;張曉霞;何津;張麗宏;崔滿華;;卵巢癌患者PD-L1的表達研究[J];中國實驗診斷學;2010年11期

7 呂自明;劉映峰;繆緋;龍日;劉們;劉磊;;TNF-α對人臍靜脈內(nèi)皮細胞活性及PD-L1蛋白表達的影響[J];熱帶醫(yī)學雜志;2013年06期

8 施畢e，

本文編號：1131040