本文關(guān)鍵詞：抗PD-L1單克隆抗體聯(lián)合5-氮雜胞苷對(duì)食管癌細(xì)胞株KYSE450治療的研究

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【摘要】：目的:表觀治療藥物5-氮雜胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)聯(lián)合抗PD-L1(programmed death ligand 1)單抗對(duì)食管癌細(xì)胞株KYSE450進(jìn)行免疫和表觀治療,探討表觀治療藥物5-Aza對(duì)食管癌細(xì)胞KYSE450的PD-L1蛋白表達(dá)變化,以及聯(lián)合單克隆抗體治療對(duì)食管癌細(xì)胞株KYSE450基因、蛋白表達(dá)和生長(zhǎng)狀態(tài)之間的關(guān)系。檢測(cè)PD-L1(programmed death ligand 1)和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)的表達(dá)在食管癌細(xì)胞株KYSE450生長(zhǎng)狀態(tài)改變情況。方法:1.采用5-Aza治療食管癌細(xì)胞株KYSE450,蛋白印記雜交技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中PD-L1蛋白表達(dá),觀察5-Aza藥物治療后對(duì)腫瘤細(xì)胞中PD-L1蛋白表達(dá)變化。2.建立體外誘導(dǎo)腫瘤特異性淋巴細(xì)胞與KYSE450食管癌細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng),觀察模擬體外免疫系統(tǒng)5-Aza藥物與抗PD-L1單抗聯(lián)合的作用進(jìn)行分析。3.應(yīng)用甲基化特異性PCR檢測(cè)DNMT1基因和PD-L1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)改變情況。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)用藥治療后DNMT1基因和PD-L1基因mRNA的表達(dá)改變。5.應(yīng)用Western blot檢測(cè)用藥后各組DNMT1基因和PD-L1基因蛋白表達(dá)改變。6.應(yīng)用ELISA檢測(cè)細(xì)胞外分泌的PD-L1蛋白變化。7.細(xì)胞劃痕試驗(yàn)鑒定KYSE450食管癌細(xì)胞株的細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果:1.5-Aza治療KYSE450食管癌細(xì)胞72h后,PD-L1蛋白表達(dá)增加;2.成熟的DC細(xì)胞與KYSE450食管癌細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)可見(jiàn)二者相互結(jié)合3.治療組的DNMT1、PD-L1基因蛋白、甲基化表達(dá)比對(duì)照組低,DNMT1呈現(xiàn)遞減的趨勢(shì)。4.QRT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),治療組5-Aza處理后的PD-L1的m RNA表達(dá)比對(duì)照組高,抗體組與混合組均比對(duì)照組表達(dá)低;5.Western blot結(jié)果顯示,藥物治療組的DNMT1蛋白表達(dá)比對(duì)照組低,5-Aza治療組的PD-L1蛋白比對(duì)照組明顯增高,抗體組與混合組均比對(duì)照組表達(dá)低。6.比較各組細(xì)胞上清中的PD-L1水平,各治療組的濃度明顯低于對(duì)照組(P0.05)。7.細(xì)胞劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示聯(lián)合用藥治療后對(duì)食管癌細(xì)胞株KYSE450的細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力有明顯下降作用。結(jié)論:1.5-Aza治療KYSE450細(xì)胞可使PD-1/PD-L1信號(hào)通路增強(qiáng)。2.表觀藥物5-Aza聯(lián)合抗PD-L1單抗治療時(shí),在腫瘤特異性CTL的作用下對(duì)食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲較單一治療明顯抑制。3.抗PD-L1抗體聯(lián)合甲基化抑制劑對(duì)體外誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞與KYSE450抗原負(fù)載作用下的PD-L1蛋白表達(dá)、mRNA轉(zhuǎn)錄水平、PD-L1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響及細(xì)胞分泌蛋白、侵襲、轉(zhuǎn)移能力有著密切的相關(guān)。4.抗PD-L1單抗進(jìn)行免疫治療有效的同時(shí)可能會(huì)引起非DNA序列改變,使細(xì)胞株呈現(xiàn)低甲基化狀態(tài),使細(xì)胞基因重編程序或者提升T細(xì)胞的活化和功能發(fā)揮。5.抗體治療聯(lián)合5-Aza進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DNA甲基化在T淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)中起著調(diào)控作用,可使外周血T細(xì)胞DNA失去一定程度的甲基化,促使多種分子的表達(dá)分泌。
【關(guān)鍵詞】：食管癌 PD-L1 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶 表觀遺傳 5-氮雜胞苷
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英漢縮略詞對(duì)照表8-9
• 前言9-11
• 1 材料與方法11-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器11-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)的方法13-14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組14-23
• 2 結(jié)果23-31
• 2.1 PD-L1蛋白表達(dá)水平23
• 2.2 DC細(xì)胞與腫瘤特異性CTL的制備23-25
• 2.3 抗PD-L1單抗對(duì)KYSE450細(xì)胞生長(zhǎng)情況25
• 2.4 DNMT1、PD-L1甲基化水平25-26
• 2.5 DNMT1、PD-L1基因m RNA表達(dá)26-27
• 2.6 DNMT1、PD-L1蛋白表達(dá)水平27-28
• 2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)28-30
• 2.8 ELISA檢測(cè)治療后細(xì)胞上清中的PD-L1表達(dá)30-31
• 3 討論31-34
• 4 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄48-49
• 致謝49-50

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8 施畢e，

本文編號(hào)：1131040