本文關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞肝癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測與預(yù)后關(guān)系的初步研究

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【摘要】：研究背景和目的惡性腫瘤是目前導(dǎo)致人類死亡的主要因素之一；各種惡性腫瘤既嚴(yán)重危害了患者的身心健康。同時,也給患者的家庭和社會帶來無比沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,我國城市地區(qū)肝癌發(fā)病率約占惡性腫瘤總發(fā)病率的25%左右。目前,臨床治療肝細(xì)胞肝癌多采用肝移植、手術(shù)切除、介入治療、射頻消融、分子靶向(索拉非尼)及基因治療等治療手段,首選治療方式為肝移植及手術(shù)切除。據(jù)各種對肝細(xì)胞肝癌治療方法的相關(guān)文獻(xiàn)顯示：肝移植5年生存率為60%～80%,小肝癌切除5年生存率為50%～60%,大肝癌切除5年生存率為30%～40%,小肝癌消融療法5年生存率為30%～40%。研究發(fā)現(xiàn),無論哪種治療方法的最終瓶頸均為術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。由于肝臟血供豐富,血行轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞肝癌治療后的主要轉(zhuǎn)移方式,有一大部分的肝癌患者,即使腫瘤體積很小,在手術(shù)之前就可能已經(jīng)出現(xiàn)微血管的浸潤或微小轉(zhuǎn)移：即使在原發(fā)性肝癌腫瘤剛剛形成的生長早期,腫瘤細(xì)胞也可以從原發(fā)腫瘤脫落而進(jìn)入到血液循環(huán)中,并在遠(yuǎn)處播散、種植,在特定的條件下,形成轉(zhuǎn)移灶。當(dāng)癌細(xì)胞侵入門靜脈形成癌栓,癌栓在肝內(nèi)脫落后則可以造成多發(fā)性轉(zhuǎn)移病灶；同時,也可以經(jīng)門靜脈系統(tǒng)進(jìn)入體循環(huán),進(jìn)而導(dǎo)致肝外轉(zhuǎn)移。因此,肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)已經(jīng)成為影響肝癌患者預(yù)后的一個重要因素。如何監(jiān)測、預(yù)防肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā),成為目前國內(nèi)外學(xué)者研究的主要方向。目前臨床上主要通過血清標(biāo)志物、臨床影像學(xué)檢查等手段來對腫瘤進(jìn)行檢測、診斷、治療和監(jiān)測,但效果均不理想。臨床上迫切需要找到一種能夠有效監(jiān)測肝癌轉(zhuǎn)移的檢測手段。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells CTCs)的研究已成為腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移領(lǐng)域研究的熱點(diǎn),國內(nèi)外大量的臨床試驗(yàn)證明,CTCs具有無創(chuàng)實(shí)時監(jiān)測腫瘤的功能,能有效預(yù)測無進(jìn)展生存期和總生存期,更利于對腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測以及預(yù)后評估。因此,CTCs可以應(yīng)用于原發(fā)腫瘤的臨床治療、監(jiān)測以及個體化治療之中。CTCs是指自發(fā)或因診療操作由腫瘤原發(fā)病灶或者轉(zhuǎn)移性病灶進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞,以單個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)的形式存在于循環(huán)系統(tǒng)中。早在1896年,澳大利亞學(xué)者Ashworth從一例轉(zhuǎn)移性腫瘤患者血液中發(fā)現(xiàn)有一種血細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞極為相似,并率先提出CTCs的概念。隨后,CTCs逐步進(jìn)入到了更多學(xué)者的視野。由于,CTCs多存在于各種腫瘤患者的外周循環(huán)之中,且在健康人群或其他非腫瘤疾病患者的外周循環(huán)之中幾乎檢測不到。從客觀而言,CTCs的存在卻并不一定提示機(jī)體內(nèi)有轉(zhuǎn)移性癌灶的形成,因?yàn)檫M(jìn)入外周循環(huán)系統(tǒng)的絕大多數(shù)CTCs,會在機(jī)體的免疫作用下逐漸凋亡,僅有少數(shù)CTCs可以存活下來,并在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性、機(jī)體免疫狀況、宿主器官微環(huán)境等共同作用下,方能形成轉(zhuǎn)移灶。由于CTCs具有與原發(fā)灶相似,甚至是相同性質(zhì)的特征,故一些學(xué)者認(rèn)為,可以將CTCs作為一種代表原發(fā)腫瘤的“液態(tài)活檢標(biāo)本”或“標(biāo)記物”。隨著近年來學(xué)界對CTCs在腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)程中作用進(jìn)行了系統(tǒng)而深入的研究后發(fā)現(xiàn),若能采取有效方式對惡性腫瘤患者進(jìn)行精準(zhǔn)的外周血中的CTCs檢測,則可以在進(jìn)行有助于惡性腫瘤的早期診斷、治療、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等的監(jiān)測工作的同時,還可以對預(yù)后進(jìn)行有效的預(yù)測;進(jìn)一步更有助于治療手段的科學(xué)選擇與優(yōu)化。通常,每毫升外周血含有1×107個左右的白細(xì)胞和5×109個左右的紅細(xì)胞,相對于血細(xì)胞來說,存在于外周血中的腫瘤細(xì)胞數(shù)則非常少。如何富集和鑒定外周血中的腫瘤細(xì)胞成為CTCs檢測最大的技術(shù)障礙。實(shí)際臨床檢測時發(fā)現(xiàn),外周血中的CTCs存有量極少,且對其的精確分離也存在著一定的困難,因此也進(jìn)一步限制了CTCs的應(yīng)用及推廣。直至20世紀(jì)90年代后期,隨著現(xiàn)代生物科技的進(jìn)一步發(fā)展以及學(xué)界對腫瘤研究的不斷深入,CTCs的檢測也得到了全面的發(fā)展。另外,由于原發(fā)腫瘤經(jīng)臨床治療后可能存在的一些微小殘留病變無法有效通過高分辨影像學(xué)檢測技術(shù)進(jìn)行檢測,卻可以通過高靈敏度和特異性的相關(guān)技術(shù)在患者的淋巴結(jié)、骨骼、血循環(huán)中檢測出來；而外周血CTCs檢測則可以無創(chuàng)下進(jìn)行多次、重復(fù)性檢查,這也為臨床提供有效的腫瘤患者預(yù)后檢測與管理。隨著腫瘤的治療已步入個體化治療時代,很多腫瘤科醫(yī)生需要依靠腫瘤分子或基因表型決定腫瘤的治療,而CTCs檢測技術(shù)的不斷發(fā)展、進(jìn)步,更多的學(xué)者開始充分利用其無創(chuàng)的“液態(tài)活組織”檢查優(yōu)勢,進(jìn)行轉(zhuǎn)移癌的預(yù)后檢測。方法本研究首次采用廣州益善生物技術(shù)股份有限公司開發(fā)的CanPatrolTM TCs檢測技術(shù),選取2013年7月至2015年1月間南方醫(yī)院肝膽外科收治的296例肝細(xì)胞肝癌患者為研究對象,并選擇39例非腫瘤或良性腫瘤患者為對照組。所有受檢者入院后第2天空腹采集外周血10m1；應(yīng)用全血濾過富集技術(shù)檢測患者外周血中的CTCs,分析其與患者性別、年齡、AFP水平、肝硬化、乙肝表面抗原、腫瘤數(shù)目、腫瘤大小、BCLC分期、TMN分期、分化程度、有無血管癌栓、有無肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移及有無復(fù)發(fā)等臨床病理的關(guān)系；以進(jìn)一步探討CTCs檢測在原發(fā)性肝癌臨床診治中的應(yīng)用價值。該方法是運(yùn)用RNA原位雜交和納米過濾技術(shù)有機(jī)結(jié)合的原理,不需依賴特異生物標(biāo)志物,據(jù)我們所知,這是目前唯一能同步實(shí)現(xiàn)CTCs形態(tài)分型、細(xì)胞分型和分子分型的先進(jìn)檢測技術(shù)。只需采集被檢者5-10ml外周血,可在腫瘤治療的任何階段進(jìn)行,能比其他常規(guī)檢查手段更早、更準(zhǔn)確地反映出腫瘤狀態(tài),且不會對被檢者造成任何副作用。結(jié)果(1)肝細(xì)胞肝癌患者治療術(shù)CTCs陽性病例數(shù)及CTCs計(jì)數(shù)分析。296例肝細(xì)胞肝癌患者CTCs陽性為211例,陽性率71.43%(211/296),CTCs數(shù)量分布于0-47個/5ml之間,中位值為14個/5ml,平均值為7.549±11.508個。對照組39例CTCs陽性為0例,陽性率為0%(0/39)。(2)127例手術(shù)患者檢出CTCs陽性者89例,陽性率為70.07%,對檢出的CTCs細(xì)胞進(jìn)行分型檢測,其中上皮型CTCs有52例,間質(zhì)型CTCs有73例,上皮/間質(zhì)混合型CTCs有70例。(3)CTCs數(shù)量與患者血清AFP水平、腫瘤BCLC分期、TMN分期、門靜脈癌栓、微血管癌栓、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)(p0.05);但與患者性別、年齡、有無肝硬化、乙肝表面抗原、腫瘤數(shù)目、腫瘤大小、腫瘤分化程度無關(guān)(P0.05)。(4)手術(shù)患者術(shù)前CTCs檢測結(jié)果陽性組(CTC≥3/5mL)術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于CTCs陰性(總CTC3)組,CTCs陽性組無瘤生存期較CTCs陰性組顯著縮短(χ2=5.034,P=0.025)。結(jié)論(1)CanPatrolTM系統(tǒng)在肝細(xì)胞肝癌患者CTCs的檢測中具有較高的敏感性和特異性。(2)CTCs數(shù)量與肝細(xì)胞肝癌患者AFP、BCLC分期、TNM分期、門靜脈癌栓、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、微血管癌栓和復(fù)發(fā)呈正相關(guān)。(3)手術(shù)前CTCs陽性的患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度較CTCs陰性的患者顯著升高,無瘤生存時間較CTCs陰性的患者顯著縮短。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性肝癌 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 檢測方法 轉(zhuǎn)移 復(fù)發(fā)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• ABSTRACT7-14
• 前言14-16
• 材料和方法16-24
• 1. 材料16-18
• 2. 方法18-23
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 結(jié)果24-35
• 討論35-39
• 全文總結(jié)39-40
• 英文縮寫詞表40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2011年10期

2 Hirokazu Kawai;Minoru Nomoto;Takeshi Suda;Kenya Kamimura;Atsunori Tsuchiya;Yasushi Tamura;Masahiko Yano;Masaaki Takamura;Masato Igarashi;Toshifumi Wakai;Satoshi Yamagiwa;Yasunobu Matsuda;Shogo Ohkoshi;Isao Kurosaki;Yoshio Shirai;Masahiko Okada;Yutaka Aoyagi;;Multicentric occurrence of hepatocellular carcinoma with nonalcoholic steatohepatitis[J];World Journal of Hepatology;2011年01期

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本文編號：1130838