本文關(guān)鍵詞：miR-30a通過(guò)下調(diào)Runx2抑制人骨肉瘤細(xì)胞的遷移，侵襲和增殖

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【摘要】：目的：本文旨在研究miR-30a在惡性程度不同的幾株的骨肉瘤細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)源性表達(dá)情況。探討miR-30a對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖的影響,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法：定量PCR檢測(cè)miR-30a在惡性程度不同的幾株骨肉瘤細(xì)胞(143B, MG63, U2OS, Saos2)和正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞(HS-5)中的表達(dá)。過(guò)表達(dá)或抑制miR-30a分別處理人骨肉瘤細(xì)胞143B和Saos2。Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力；劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞劃痕愈合能力；MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-30a對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響；利用qRT-PCR和Western blot分別在mRNA水平、蛋白水平尋找miR-30a的靶基因。利用pMIR-REPORT質(zhì)粒構(gòu)建miR-30a靶基因3'-UTR熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)miR-30a是否會(huì)結(jié)合靶基因Runx23'-UTR。結(jié)果：在幾株骨肉瘤細(xì)胞和正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞中,miR-30a在惡性程度最高的143B細(xì)胞中表達(dá)最低,在惡性程度較低的Saos2細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)最高。過(guò)表達(dá)miR-30a可以抑制骨肉瘤細(xì)胞143B遷移和侵襲(P0.05),MTT實(shí)驗(yàn)顯示,miR-30a明顯抑制143B細(xì)胞的活力(P0.01),流式細(xì)胞術(shù)顯示143B細(xì)胞被阻滯在G1期；在Saos2細(xì)胞中抑制miR-30a的內(nèi)源性表達(dá)后,Saos2細(xì)胞的遷移和侵襲能力增加(P0.05),細(xì)胞增殖能力也表現(xiàn)出上升水平(P0.05)。同時(shí),過(guò)表達(dá)miR-30a可以抑制143B細(xì)胞中Runx2的蛋白表達(dá)。抑制內(nèi)源性miR-30a后,Saos2細(xì)胞中的Runx2蛋白水平表達(dá)明顯增加(P0.05),而不論過(guò)表達(dá)或抑制miR-30a Runx2的mRNA水平均沒(méi)有明顯變化。成功構(gòu)建Runx2 3'-UTR熒光素酶質(zhì)粒。雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)顯示,加入miR-30a后,第一個(gè)熒光素片段載體熒光素活性降低(P0.01)。Rescue試驗(yàn)中,同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-30a和Runx2,143B細(xì)胞劃痕愈合率得到恢復(fù)(P0.05),細(xì)胞活力也上升(P0.01)；同時(shí)抑制miR-30a和Runx2,Saos2細(xì)胞劃痕愈合率(P0.05)和細(xì)胞活力都下降(P0.01)。結(jié)論：miR-30a在惡性程度不同的骨肉瘤細(xì)胞中內(nèi)內(nèi)源性表達(dá)水平有明顯差異。惡性程度高的細(xì)胞中miR-30a的表達(dá)水平比惡性程度低的細(xì)胞和正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞明顯降低。miR-30a可以抑制骨肉瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖,其作用可以能是通過(guò)抑制Runx2的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 miR-30a Runx2
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 1 材料12-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-25
• 3 結(jié)果25-36
• 4 討論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 全文總結(jié)42-43
• 文獻(xiàn)綜述43-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49

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