本文關(guān)鍵詞：miR-30a通過下調(diào)Runx2抑制人骨肉瘤細胞的遷移，侵襲和增殖

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【摘要】：目的：本文旨在研究miR-30a在惡性程度不同的幾株的骨肉瘤細胞和骨髓基質(zhì)細胞的內(nèi)源性表達情況。探討miR-30a對骨肉瘤細胞的遷移、侵襲和增殖的影響,并對其機制進行初步探索。方法：定量PCR檢測miR-30a在惡性程度不同的幾株骨肉瘤細胞(143B, MG63, U2OS, Saos2)和正常骨髓基質(zhì)細胞(HS-5)中的表達。過表達或抑制miR-30a分別處理人骨肉瘤細胞143B和Saos2。Transwell實驗檢測細胞遷移和侵襲能力；劃痕實驗觀察細胞劃痕愈合能力；MTT實驗和流式細胞術(shù)檢測miR-30a對骨肉瘤細胞增殖的影響；利用qRT-PCR和Western blot分別在mRNA水平、蛋白水平尋找miR-30a的靶基因。利用pMIR-REPORT質(zhì)粒構(gòu)建miR-30a靶基因3'-UTR熒光素酶報告質(zhì)粒,雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測miR-30a是否會結(jié)合靶基因Runx23'-UTR。結(jié)果：在幾株骨肉瘤細胞和正常骨髓基質(zhì)細胞中,miR-30a在惡性程度最高的143B細胞中表達最低,在惡性程度較低的Saos2細胞和骨髓基質(zhì)細胞中表達最高。過表達miR-30a可以抑制骨肉瘤細胞143B遷移和侵襲(P0.05),MTT實驗顯示,miR-30a明顯抑制143B細胞的活力(P0.01),流式細胞術(shù)顯示143B細胞被阻滯在G1期；在Saos2細胞中抑制miR-30a的內(nèi)源性表達后,Saos2細胞的遷移和侵襲能力增加(P0.05),細胞增殖能力也表現(xiàn)出上升水平(P0.05)。同時,過表達miR-30a可以抑制143B細胞中Runx2的蛋白表達。抑制內(nèi)源性miR-30a后,Saos2細胞中的Runx2蛋白水平表達明顯增加(P0.05),而不論過表達或抑制miR-30a Runx2的mRNA水平均沒有明顯變化。成功構(gòu)建Runx2 3'-UTR熒光素酶質(zhì)粒。雙熒光素酶活性實驗顯示,加入miR-30a后,第一個熒光素片段載體熒光素活性降低(P0.01)。Rescue試驗中,同時過表達miR-30a和Runx2,143B細胞劃痕愈合率得到恢復(fù)(P0.05),細胞活力也上升(P0.01)；同時抑制miR-30a和Runx2,Saos2細胞劃痕愈合率(P0.05)和細胞活力都下降(P0.01)。結(jié)論：miR-30a在惡性程度不同的骨肉瘤細胞中內(nèi)內(nèi)源性表達水平有明顯差異。惡性程度高的細胞中miR-30a的表達水平比惡性程度低的細胞和正常骨髓基質(zhì)細胞明顯降低。miR-30a可以抑制骨肉瘤細胞的遷移、侵襲和增殖,其作用可以能是通過抑制Runx2的表達來實現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 miR-30a Runx2
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 1 材料12-15
• 2 實驗方法15-25
• 3 結(jié)果25-36
• 4 討論36-38
• 參考文獻38-42
• 全文總結(jié)42-43
• 文獻綜述43-48
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49

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本文編號：1126999