本文關(guān)鍵詞：吖啶橙熒光染色法檢測(cè)腎癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其臨床意義

  更多相關(guān)文章： 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 吖啶橙熒光染色 腎癌 陽(yáng)性率 檢測(cè)

【摘要】：目的應(yīng)用吖啶橙熒光染色法(acridine orange fluorescent,AO-F)搭建循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)篩選平臺(tái),并將其應(yīng)用于腎癌患者外周血CTCs篩查,評(píng)估其在腎癌患者中的臨床價(jià)值。方法1、培養(yǎng)腎癌組織原代細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞株769-P,AO-F法染色后加蓋片于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及著色情況。分別制備死亡腫瘤細(xì)胞(75℃水浴30min)和活腫瘤細(xì)胞(加新鮮PBS放置30min)。AO-F染色后分別計(jì)數(shù)5個(gè)隨機(jī)視野下兩組細(xì)胞中AO-F+細(xì)胞所占的比例,評(píng)估AO-F染料對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性。2、抽取健康體檢者肘正中靜脈血5 ml,紅細(xì)胞裂解液法富集單個(gè)核細(xì)胞,PBS逐級(jí)稀釋,配制為含106個(gè)單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞懸液于玻璃管中,共20管。將不同數(shù)量的769-P細(xì)胞(500、200、100、50、10個(gè)/管)與106個(gè)單個(gè)核細(xì)胞混合以模擬腎癌患者外周血CTCs模型,AO-F染色后計(jì)算各組腫瘤細(xì)胞回收率,驗(yàn)證該方法敏感性和可重復(fù)性。3、使用上述方法檢測(cè)139例腎癌患者(112例早期患者和27例轉(zhuǎn)移患者)、10例良性腎病患者外周血中CTCs的表達(dá)水平。并分析10例健康志愿者的外周血樣,評(píng)估此方法的特異性。4、分析CTCs表達(dá)水平與患者性別、年齡、腫瘤大小、病理類(lèi)型、T分類(lèi)、furhman分級(jí)、是否轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果1、腎癌組織原代細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞株的形態(tài)和著色情況無(wú)明顯差異�；钅[瘤細(xì)胞組呈現(xiàn)典型的AO-F+細(xì)胞特性,而死亡腫瘤細(xì)胞組卻未能呈現(xiàn)出相應(yīng)特征。平均每個(gè)視野下AO-F+細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例為93%±3%,吖啶橙染料與腫瘤細(xì)胞具有較高敏感性。2、含500、200、100、50個(gè)腫瘤細(xì)胞的懸液組腫瘤細(xì)胞回收率(%)分別為:10.2±3.8、9.2±2.3、10.8±2.6、10.5±1.9,組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.001,P0.05)。4組敏感性實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞平均回收率為10.16±2.73%。含10個(gè)細(xì)胞的懸液組偶然可測(cè)到AO-F+細(xì)胞。加入的腫瘤細(xì)胞越多,檢出的AO-F+細(xì)胞數(shù)越多,兩者間存在Pearson正相關(guān)(Pearson=0.959,P=0.00)。3、139例腎癌患者中19例(19/139,13.67%)可檢測(cè)到CTCs,早期和轉(zhuǎn)移患者分別為10例(10/112,8.93%)和9例(9/27,33.33%)。10例健康志愿者、10例良性腎病患者均未檢測(cè)到CTCs。4、總體檢出水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、病理類(lèi)型、T分類(lèi)、Furhman分級(jí)均未見(jiàn)相關(guān)性(P0.05),但與患者是否轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)(P0.05)。早期患者和轉(zhuǎn)移患者的檢出情況與臨床病理參數(shù)之間均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5、在早期患者和轉(zhuǎn)移患者之間,陽(yáng)性檢出率在患者年齡、性別、腫瘤大小、T分類(lèi)(T 2/3)、Furhman分級(jí)之間均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但在T1有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論證實(shí)了吖啶橙染料對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較高敏感性,AO-F染色法篩查外周血CTCs切實(shí)可行,并具有較高的可重復(fù)性和特異性。CTCs可作為預(yù)測(cè)腎癌患者是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要指標(biāo),對(duì)早期預(yù)測(cè)腎癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有一定參考價(jià)值,值得進(jìn)一步探索。
【關(guān)鍵詞】：循環(huán)腫瘤細(xì)胞 吖啶橙熒光染色 腎癌 陽(yáng)性率 檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-13
• 一、吖啶橙熒光染色技術(shù)檢測(cè)CTCs方法的建立13-29
• 1.1 材料和方法13-19
• 1.1.1 主要試劑13-14
• 1.1.2 儀器14
• 1.1.3 主要溶液的配制14-15
• 1.1.4 腎癌組織原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞株及健康人外周血15
• 1.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)15-18
• 1.1.6 模擬腎癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞18-19
• 1.1.7 吖啶橙熒光染色19
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法19
• 1.2 結(jié)果19-23
• 1.2.1 腎癌細(xì)胞原代培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 原代腫瘤細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)O-F染色對(duì)比20-21
• 1.2.3 活腫瘤細(xì)胞和死亡腫瘤細(xì)胞AO-F染色21
• 1.2.4 AO染料對(duì)腫瘤細(xì)胞敏感性21-22
• 1.2.5 模擬患者外周血CTCs模型中腫瘤細(xì)胞回收率22-23
• 1.3 討論23-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、吖啶橙熒光檢測(cè)法篩查腎癌患者CTCs29-45
• 2.1 對(duì)象和方法29-32
• 2.1.1 主要儀器和試劑29
• 2.1.2 研究對(duì)象29
• 2.1.3 國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)分期和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)29-31
• 2.1.4 患者外周血采集、CTCs檢測(cè)及臨床資料的隨訪31
• 2.1.5 吖啶橙檢測(cè)法的診斷標(biāo)準(zhǔn)31-32
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)方法32
• 2.2 結(jié)果32-39
• 2.2.1 腫瘤組織印片AO-F染色32-33
• 2.2.2 腎癌患者外周血AO-F染色33-35
• 2.2.3 139例患者臨床病理資料35
• 2.2.4 腎癌患者外周血CTCs檢出情況與臨床病理參數(shù)之間關(guān)系35-37
• 2.2.5 112例早期腎癌患者CTCs檢出率與臨床病理參數(shù)之間關(guān)系37-38
• 2.2.6 27例轉(zhuǎn)移腎癌患者CTCs檢出率與臨床病理參數(shù)之間關(guān)系38-39
• 2.2.7 早期腎癌患者與轉(zhuǎn)移腎癌CTCs的檢出與臨床病理的關(guān)系39
• 2.3 討論39-44
• 2.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明52-53
• 綜述53-67
• 綜述參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王禮泉;王玉華;崔進(jìn)貝;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)在腎癌患者的臨床應(yīng)用研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2010年33期

，

本文編號(hào)：1121980