本文關(guān)鍵詞：CD123在兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)與抗人CD123單克隆抗體的制備

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【摘要】：一、CD123在兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)與意義目的:監(jiān)測(cè)CD123在B系急性淋巴細(xì)胞性白血病(B-ALL)患兒中的表達(dá),并分析不同因素與CD123表達(dá)的關(guān)系。方法:2013年5月至2014年12月收至我院的246例兒童骨髓標(biāo)本,其中,B型急性淋巴細(xì)胞性白血病(B-ALL)196例(包括初診B-ALL174例,復(fù)發(fā)B-ALL22例),T型急性淋巴細(xì)胞性白血病(T-ALL)34例,健康兒童16例(特發(fā)性血小板減少性紫癜康復(fù)后復(fù)檢患兒),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析CD123及其它細(xì)胞表面標(biāo)記物在這些病人中的表達(dá)情況,并分析B-ALL中性別、年齡、基因、初診白細(xì)胞數(shù)、染色體、細(xì)胞成熟度對(duì)CD123表達(dá)的影響。結(jié)果:1、健康兒童CD123的表達(dá)為陰性的,T-ALL中極少數(shù)表達(dá)CD123,表達(dá)率為8.82%,我院196例B-ALL患兒多數(shù)表達(dá)CD123,表達(dá)率為92.82%。2、對(duì)我院B-ALL患兒分析發(fā)現(xiàn)91.8%B-ALL患兒同時(shí)表達(dá)CD123與CD19(CD123+CD19+),而且CD34高表達(dá)患兒CD123表達(dá)高于CD34低表達(dá)患兒(P0.05)。3、CD123/10/34/19這一組合可檢測(cè)125例B-ALL患兒化療后白血病細(xì)胞微小殘余病灶(MRD),有效率占58.01%。4、就診時(shí)性別、年齡、白細(xì)胞數(shù)、是否復(fù)發(fā)對(duì)B-ALL細(xì)胞表面CD123的表達(dá)無(wú)明顯影響(P均0.05),超二倍體CD123表達(dá)高于正常核型(P0.001),存在E2A/PBX、TEL/MLL基因的患兒較對(duì)應(yīng)的基因陰性的患兒CD123表達(dá)低(P0.05)。結(jié)論:1、CD123表達(dá)于多數(shù)B-ALL患兒骨髓幼稚細(xì)胞表面,可用于B-ALL微小殘余病灶的監(jiān)測(cè),并可能作為靶點(diǎn)為復(fù)發(fā)及難治的B-ALL提供新的治療手段。2、B-ALL患兒中,CD123表達(dá)與細(xì)胞成熟度成負(fù)相關(guān);CD123過(guò)表達(dá)與超二倍核型有關(guān);E2A/PBX或TEL/AML1基因陽(yáng)性可能提示CD123相對(duì)弱表達(dá)。二、鼠抗人CD123單克隆抗體的制備目的:研制鼠抗人CD123單克隆抗體,為進(jìn)一步研究人CD123分子的功能奠定基礎(chǔ)。方法:比較幾種表達(dá)CD123細(xì)胞株的CD123表達(dá)水平,選擇表達(dá)水平高的細(xì)胞株SHI-1細(xì)胞株多次免疫小鼠獲得免疫后的小鼠脾細(xì)胞與狀態(tài)良好的骨髓瘤細(xì)胞融合制備雜交瘤,通過(guò)顯微鏡觀察雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,同時(shí)通過(guò)CD123質(zhì)粒轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞成功制備L929-CD123細(xì)胞株。采用流式細(xì)胞術(shù),通過(guò)間接免疫熒光的方法,應(yīng)用SHI-1細(xì)胞株、L929-CD123細(xì)胞株分別初步篩選、進(jìn)一步篩選上清中含抗CD123單克隆抗體(MAb)雜交瘤細(xì)胞,并且通過(guò)有限稀釋法獲取單克隆的雜交瘤。我們將制備的雜交瘤通過(guò)小鼠腹腔注射的方法,收集小鼠腹水并進(jìn)行純化后,對(duì)MAb類型鑒定并與商品化抗體比較其效價(jià)。結(jié)果:CD123質(zhì)粒有效轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞株,制備出L929-CD123細(xì)胞株;SHI-1免疫后的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合通過(guò)流式篩選制備出單克隆的分泌CD123抗體的雜交瘤細(xì)胞(克隆號(hào)C1409);C1409抗體具備較高的效價(jià)。結(jié)論:成功獲取一株能穩(wěn)定持續(xù)分泌抗人CD123單克隆抗體的雜交瘤,其分泌的抗體具備較高的效價(jià),可用于流式細(xì)胞術(shù)分析。
【關(guān)鍵詞】：CD123 B-ALL 過(guò)表達(dá) 雜交瘤 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 CD123 在兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)與意義11-26
• 材料與方法11-16
• 結(jié)果16-22
• 討論22-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二部分 抗人CD123 單克隆抗體的制備26-41
• 材料與方法26-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 結(jié)論41-42
• 綜述42-54
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 英漢雙解縮略詞54-55
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-57

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本文編號(hào)：1119087