發(fā)布時間：2017-10-30 05:36

  本文關鍵詞：細胞自噬對腺花素誘導肝癌細胞死亡的影響

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【摘要】：細胞自噬(autophagy)指自身細胞內的物質包括衰老的細胞器、細胞質成分以及長壽命蛋白通過雙層膜樣囊泡結構包裹、運送至溶酶體發(fā)生降解的過程。自噬廣泛存在于真核細胞的生命活動中,在適應代謝應激、保持基因組完整性及維持內環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用。一系列研究顯示,自噬參與細胞死亡的發(fā)生與發(fā)展過程,其對細胞死亡的影響可能為促進、阻礙或無影響。最近,課題組在國際上首次報道,腺花素(Adenanthin),一種從腺花香茶菜葉子中提取的天然二萜類化合物,通過抑制過氧化還原酶I/II(peroxiredoxin I/II)活性,引起細胞內ROS累積從而選擇性的誘導肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)細胞死亡。目前的研究發(fā)現,ROS的累積通常能增強細胞的自噬活性,故本研究主要關注自噬在腺花素誘導的HCC細胞死亡中的作用。通過Western blot和免疫熒光技術發(fā)現,腺花素能夠顯著增強HCC細胞系Bel-7402細胞的自噬活性,表現為自噬重要標志分子LC3-II蛋白的明顯累積、GFP-LC3和內源性LC3蛋白的聚集并呈現明顯的點狀分布于細胞漿內。利用RNA干預技術沉默Beclin-1基因的表達并不影響腺花素誘導的細胞自噬活性增強效應,同時也不影響腺花素引發(fā)的細胞死亡過程,提示腺花素誘導的HCC細胞自噬活性增強為非Beclin-1依賴的。進一步地,CCK-8結果顯示,與野生型小鼠胚胎成纖維細胞(WT MEFs)相比,ATG5缺失(ATG5-/-)的MEF細胞對于腺花素誘導的細胞生長抑制效應更為抵抗;同樣地,利用小RNA干預Bel-7402細胞中ATG5基因的表達,也明顯拮抗腺花素誘導的細胞生長抑制效應,這些結果提示,腺花素增強的細胞自噬活性,能夠促進其誘導的HCC細胞死亡效應。隨著這些工作的開展,我們將深入認識腺花素選擇性殺傷HCC細胞的潛在作用機制,并且為特異性靶向和殺傷腫瘤細胞的治療策略提供更多的信息。
【關鍵詞】：細胞自噬 腺花素 細胞死亡 肝細胞癌
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-10
• 符號說明10-11
• 緒論11-16
• 方法與材料16-27
• 1、細胞培養(yǎng)與制劑16
• 2、質粒轉染與siRNA瞬轉敲除16-17
• 3、免疫熒光和共聚焦顯微鏡17-18
• 4、細胞加藥處理及細胞收集、蛋白裂解18-19
• 5、免疫印跡技術19-22
• 6、病毒包裝與細胞系構建22-24
• 7、顯微鏡攝片24
• 8、CCK-8 法檢測IC5024-25
• 9、抗體及試劑、儀器25-27
• 結果27-37
• 1、腺花素顯著增強肝細胞癌細胞的自噬活性27-31
• 2、腺花素誘導的HCC細胞自噬活性增強不依賴于Beclin-1 的表達31-34
• 3、自噬活性喪失的ATG5~(-/-) MEFs對腺花素誘導的細胞生長抑制效應更為抵抗34-35
• 4、干預ATG5表達的Bel-7402細胞明顯抵抗腺花素誘導的細胞生長抑制效應35-37
• 討論37-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-46
• 致謝46-48
• 碩士期間發(fā)表和待發(fā)表論文目錄48

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本文編號：1116355