本文關(guān)鍵詞：Plk1分子信號(hào)通路在類腫瘤干細(xì)胞靜息調(diào)控中的特征分析

  更多相關(guān)文章： 鹵蟲 類腫瘤干細(xì)胞 細(xì)胞靜息 Plk1 RSK1

【摘要】：鹵蟲是一種生活在高山鹽湖、海洋高鹽等極端環(huán)境的小型甲殼動(dòng)物,它在地球上出現(xiàn)已有4億年之久,在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過程中,它的形態(tài)、生理和生化方面幾乎沒有任何改變,但為了適應(yīng)惡劣的環(huán)境,鹵蟲形成了兩套生殖及胚胎發(fā)育體系：即在環(huán)境適宜的條件下,鹵蟲主要是以卵胎生模式繁殖；當(dāng)條件不適宜時(shí),鹵蟲則會(huì)產(chǎn)生由密致幾丁質(zhì)殼包被的休眠卵,這種休眠卵的細(xì)胞周期處于靜息狀態(tài)(GO期),休眠卵經(jīng)過冷凍激活后,當(dāng)遇到適宜的環(huán)境條件時(shí),細(xì)胞靜息被打破重新啟動(dòng)細(xì)胞分裂,進(jìn)入胚胎發(fā)育并孵化出幼體。鹵蟲細(xì)胞周期的靜息與打破為研究細(xì)胞靜息與增值調(diào)控提供了適宜的材料。先前的研究表明,P1k1與RSK1信號(hào)通路與鹵蟲休眠胚胎的形成有關(guān),并且在鹵蟲休眠卵中,P1k1和RSK1的活性都是被抑制的。為了進(jìn)一步研究Plk1、RSK1信號(hào)通路與細(xì)胞的靜息和打破靜息的關(guān)系,在鹵蟲的孵化過程中,用NM(去乙�；敢种苿�)處理,人為的使細(xì)胞周期處于靜息狀態(tài),之后撤去NM,細(xì)胞靜息被打破,在這個(gè)過程中,檢測(cè)了Plk1、MEK-ERK-RSK1信號(hào)通路分子的表達(dá)特征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在用NM處理細(xì)胞靜息時(shí),Plk1、MEK表達(dá)量很低,而去掉NM后,Plk1、MEK的表達(dá)量又開始上升。這說明P1k1和RSK1信號(hào)通路參與了鹵蟲細(xì)胞的靜息與打破靜息的調(diào)節(jié)。在類腫瘤干細(xì)胞中進(jìn)一步研究了P1k1和RSK1這條信號(hào)通路在細(xì)胞靜息調(diào)控中的作用,首先在胃癌細(xì)胞系MKN45中分選得到了類腫瘤干細(xì)胞,并通過PKH26標(biāo)記找到了靜息的類腫瘤干細(xì)胞。通過研究靜息類腫瘤干細(xì)胞中P1k1,MEK-ERK-RSK1信號(hào)通路分子的表達(dá)特征,發(fā)現(xiàn)與處于旺盛有絲分裂的腫瘤細(xì)胞相比,在靜息的類腫瘤干細(xì)胞中P1k1,以及RSK1信號(hào)通路分子的表達(dá)量受到了明顯的抑制,這表明P1k1和RSK1信號(hào)通路參與了類腫瘤干細(xì)胞靜息的調(diào)控。在類腫瘤干細(xì)胞中,使用P1k1的抑制劑處理,結(jié)果表明處理組的細(xì)胞生長(zhǎng)停滯,類腫瘤干細(xì)胞無法成球,同時(shí)發(fā)現(xiàn)RSK1信號(hào)通路受到了明顯的抑制。而用RSK1抑制劑處理抑制RSK1蛋白水平時(shí),P1k1的活性增強(qiáng),這說明RSK1可以反饋的促進(jìn)P1k1的表達(dá),P1k1作為MEK-ERK-RSK1信號(hào)通路的上游調(diào)節(jié)類腫瘤干細(xì)胞的增殖。癌癥是現(xiàn)在人類面臨最多的疾病之一。傳統(tǒng)的放療,化療,手術(shù)切除等方式并不能完全治愈癌癥,研究表明,在實(shí)體瘤中存在靜息的類腫瘤干細(xì)胞,這種細(xì)胞可以抵抗放療、化療等。所以以鹵蟲為研究模型動(dòng)物,研究細(xì)胞的靜息機(jī)制對(duì)于腫瘤的科學(xué)研究提供了很多新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：鹵蟲 類腫瘤干細(xì)胞 細(xì)胞靜息 Plk1 RSK1
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 致謝6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 縮略詞13-17
• 第1章 緒論17-27
• 1.1 研究背景17-26
• 1.1.1 鹵蟲概況17
• 1.1.2 鹵蟲休眠胚胎的發(fā)育過程17-18
• 1.1.3 Plk1激酶18-20
• 1.1.4 RSK1激酶20-21
• 1.1.5 腫瘤干細(xì)胞概述21-23
• 1.1.6 腫瘤干細(xì)胞的靜息23-26
• 1.2 研究目的、方法和意義26-27
• 第2章 Plk1,RSK1信號(hào)通路分子在鹵蟲細(xì)胞靜息與打破過程中的表達(dá)特征27-36
• 2.1 引言27-28
• 2.2 材料與儀器28
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料28
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑28
• 2.2.3 主要儀器28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法28-32
• 2.3.1 去乙酰化酶抑制劑(NM)侵泡與移除28-29
• 2.3.2 總蛋白的提取29
• 2.3.3 Western blotting29-32
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-34
• 2.4.1 鹵蟲孵化過程中的NM處理32-33
• 2.4.2 鹵蟲孵化NM處理與撤去過程中,Plk1和RSK1信號(hào)通路分子表達(dá)特征33-34
• 2.5 小結(jié)與討論34-36
• 第3章 類腫瘤干細(xì)胞的篩選及干性鑒定36-47
• 3.1 引言36-37
• 3.2 材料37
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料37
• 3.2.2 主要試劑37
• 3.2.3 主要儀器37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法37-41
• 3.3.1 胃癌干細(xì)胞的分選37-38
• 3.3.2 類腫瘤干細(xì)胞的的再次篩選38-39
• 3.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)39-40
• 3.3.4 細(xì)胞免疫熒光40-41
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 3.4.1 類腫瘤干細(xì)胞的流式分選41-45
• 3.5 小結(jié)與討論45-47
• 第4章 類腫瘤干細(xì)胞靜息的鑒定47-55
• 4.1 引言47-48
• 4.2 材料48-49
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 4.2.2 主要試劑48-49
• 4.2.3 主要儀器49
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法49
• 4.3.1 PKH26染色方法49
• 4.3.2 細(xì)胞免疫熒光49
• 4.4 結(jié)果49-54
• 4.4.1 胃癌干細(xì)胞靜息的標(biāo)記49-51
• 4.4.2 靜息類腫瘤干細(xì)胞的鑒定51-54
• 4.5 小結(jié)與討論54-55
• 第5章 Plk1,RSK1信號(hào)通路分子在靜息類腫瘤干細(xì)胞中的表達(dá)特征以及Plk1與RSK1信號(hào)通路的相互作用55-65
• 5.1 引言55-56
• 5.2 材料56-57
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料56
• 5.2.2 主要試劑56-57
• 5.2.3 主要儀器57
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法57
• 5.3.1 細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)57
• 5.3.2 抑制劑的使用57
• 5.3.3 Western blotting57
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-63
• 5.4.1 靜息類腫瘤干細(xì)胞中,Plk1和RSK1信號(hào)通路蛋白的表達(dá)特征57-60
• 5.4.2 Plk1抑制劑處理對(duì)于細(xì)胞分裂的影響60
• 5.4.3 Plk1抑制劑處理對(duì)RSK1信號(hào)通路的影響60-61
• 5.4.4 RSK1抑制劑對(duì)于Plk1的影響61-62
• 5.4.5 Plk1抑制劑和RSK1抑制劑共處理對(duì)于細(xì)胞分裂的影響62-63
• 5.5 小結(jié)與討論63-65
• 結(jié)論與展望65-66
• 1 結(jié)論65
• 2 展望65-66
• REFERENCES66-75
• 附錄一 常用試劑配制一覽表75-77
• 附錄二 作者簡(jiǎn)歷77

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