本文關(guān)鍵詞：TRAF6抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移通過調(diào)控β-catenin信號

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【摘要】：研究背景和目的結(jié)直腸癌是世界上第三大常見腫瘤,已成為危害我國居民健康的最常見惡性腫瘤之一,患者術(shù)后生存率較高,但總的預(yù)后并不理想;因結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌發(fā)展進(jìn)程中最為關(guān)鍵的事件,直接影響臨床結(jié)直腸癌患者的治療及預(yù)后,因此研究結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移機制及調(diào)控因子對改善患者預(yù)后具有重要意義。β-鏈蛋白(β-catenin)主要功能為介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和參與基因的表達(dá)。在胞膜處與E-cadherin形成復(fù)合體,維持細(xì)胞的黏附、防止細(xì)胞的移動。細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin處于較低的水平,當(dāng)其不能被GSK-3β/APC蛋白酶體途徑、p53/Siah-1/APC蛋白酶體途徑、自噬溶酶體途徑降解時,β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中累積入核,與TCF及LEF-1結(jié)合,啟動一系列的與腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移等有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄,如ZEB1,E-cadherin等。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)是TNFR和IL-1R/TLR兩超家族誘導(dǎo)的信號匯合中心點,在TNF,IL-1,LPS等炎癥因子的刺激下,激活TRAF6下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)節(jié)中最重要的三條通路:NF-KB通路、MAPK通路和Src通路,這三條通路在調(diào)控細(xì)胞的存活、生長、增殖、分化、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)行為發(fā)揮著重要作用,而且與骨肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、胃癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。有報道稱TRAF6可促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖,但其在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機制尚不清楚。在該課題中,我們著重研究了TRAF6在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中的作用及其可能調(diào)控機制。研究方法Western Blot檢測蛋白表達(dá)情況;逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR檢測mRNA的水平;免疫組織化學(xué)技術(shù)和細(xì)胞免疫熒光檢測蛋白表達(dá)及定位情況;用慢病毒載體培養(yǎng)和篩選TRAF6穩(wěn)定干擾細(xì)胞株;Migration遷移實驗、Invasion侵襲實驗及構(gòu)建裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型來檢測細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力;熒光報告基因檢測β-catenin介導(dǎo)的Top-Flash活性。結(jié)果1、臨床結(jié)直腸癌配對組織樣本中,結(jié)直腸癌組織中TRAF6 mRNA水平及蛋白水平均低于癌旁正常組織,且相比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織TRAF6蛋白表達(dá)顯著降低。2、體、內(nèi)外實驗中,穩(wěn)定干擾TRAF6后,細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力顯著增高。3、人為改變TRAF6的表達(dá)可顯著調(diào)控β-catenin的降解及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。即,過表達(dá)TRAF6后,β-catenin蛋白水平及其介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性降低,ZEB1蛋白表達(dá)下降;基因沉默TRAF6后,β-catenin蛋白水平升高且出現(xiàn)核定位的現(xiàn)象,同時ZEB1蛋白表達(dá)增強。進(jìn)一步的研究還發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定干擾TRAF6表達(dá)的同時再敲低β-catenin的表達(dá),結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力相比僅僅穩(wěn)定干擾TRAF6的細(xì)胞顯著下降。結(jié)論TRAF6在人結(jié)直腸癌組織中存在普遍的低表達(dá),且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移緊密相關(guān);下調(diào)TRAF6的表達(dá)可以顯著地促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移;瞬時敲低β-catenin可以逆轉(zhuǎn)穩(wěn)定干擾TRAF6后所促進(jìn)的結(jié)直腸癌細(xì)胞體外的遷移、侵襲能力;TRAF6可通過促進(jìn)β-catenin的降解來抑制結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移能力。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 TRAF6 轉(zhuǎn)移 β-catenin 降解
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 前言11-17
• 1 結(jié)直腸癌簡介11
• 2 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子 6（TRAF6）簡介11-14
• 3 WNT/Β-CATENIN信號通路簡介14-17
• 第二章 TRAF6通過調(diào)控 Β-CATENIN的降解抑制結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移17-49
• 第一節(jié) 在結(jié)直腸癌臨床標(biāo)本中檢測TRAF6的表達(dá)17-25
• 一 材料與方法17-22
• （一）材料17
• （二）方法17-22
• 二 結(jié)果22-25
• 第二節(jié) 穩(wěn)定敲低TRAF6對結(jié)直腸癌細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的影響25-31
• 一 材料與方法25-28
• （一）材料25
• （二）方法25-28
• 二 結(jié)果28-31
• 第三節(jié) TRAF6+/-對小鼠結(jié)直腸癌浸潤的影響31-36
• 一 材料與方法31-33
• （一）材料31
• （二）方法31-33
• 二 結(jié)果33-36
• 第四節(jié) TRAF6調(diào)控 Β-CATENIN的降解36-49
• 一 材料與方法36-42
• （一）材料36
• （二）方法36-42
• 二 結(jié)果42-49
• 討論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-60
• 綜述 TRAF6在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用60-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 英文縮略詞69-70
• 主要成果70-71
• 致謝71-73

【相似文獻(xiàn)】

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10 張文;張p，

本文編號：1114597