本文關(guān)鍵詞：溶血磷脂酸在卵巢癌細(xì)胞遷移和增殖中的作用及其分子機(jī)理的研究

  更多相關(guān)文章： LPA3 人卵巢癌細(xì)胞 增殖與遷移 信號(hào)通路

【摘要】：溶血磷脂酸(LPA)是一種具有生物活性的磷脂小分子,能夠通過細(xì)胞膜表面的六個(gè)受體(LPA1-6)介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)一系列生理藥理過程。如,能夠參與細(xì)胞的增殖、遷移、黏附、凋亡、分化與分泌等,并與傷口愈合、肺纖維化、腫瘤發(fā)生與發(fā)展等病理過程密切相關(guān)。此外,已證實(shí)LPA已成為卵巢癌的早期生物標(biāo)記物,并在患者的腹水內(nèi)LPA高濃度積累,這對(duì)卵巢癌的發(fā)展有何作用及其機(jī)理是個(gè)有趣而未解決的科學(xué)問題。所以,本研究在發(fā)現(xiàn)LPA能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移的基礎(chǔ)上闡明了LPA在上述作用中參與的LPA受體亞型,并進(jìn)一步弄清了其信號(hào)通路。研究結(jié)果為卵巢癌治療戰(zhàn)略中指出潛在的靶位點(diǎn)。因此,相關(guān)研究對(duì)于生理活性脂質(zhì)的調(diào)控功能以及與腫瘤發(fā)展之間關(guān)系等眾多的理論和實(shí)踐方面具有重要意義。實(shí)驗(yàn)過程中,我們利用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖、Micro chemotaxis chamber法測(cè)定細(xì)胞的遷移活性。采用Real Time PCR技術(shù)檢測(cè)人卵巢癌細(xì)胞(A2780/HO8910) LPA受體表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)A2780和H08910中LPA1/LPA3受體優(yōu)先表達(dá),用藥理學(xué)方法驗(yàn)證了LPA1/LPA3受體參與細(xì)胞增殖和遷移,進(jìn)一步用RNA干擾技術(shù)證明了LPA3是主要的參與受體。用特異性抑制劑確定G偶聯(lián)蛋白為Gai/o型偶聯(lián)蛋白。在下游的信號(hào)通路研究中,用Western blot測(cè)定相關(guān)蛋白的表達(dá),MAP激酶的特異性抑制劑確定了參與通路的MAPK類型為p38和ERK,參與的轉(zhuǎn)錄因子為NF-kB,而Bcl-2參與抗凋亡過程,同時(shí)也測(cè)得到MMP參與細(xì)胞的遷移機(jī)制。結(jié)論1、LPA是通過LPA3受體/Gai/o-MAPK-p38/ERK -NF-kB-MMP促進(jìn)細(xì)胞的遷移。2、LPA通過LPA3受體的信號(hào)通路促進(jìn)增殖。我們結(jié)果提示,LPA3受體可以作為治療卵巢癌的一個(gè)潛在的靶位點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：LPA3 人卵巢癌細(xì)胞 增殖與遷移 信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 第一章 LPA促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910的增殖和遷移13-23
• 1 材料與方法13-18
• 1.1 材料13-15
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料13
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 1.1.4 常用溶劑的配置14-15
• 1.2 方法15-18
• 1.2.1 人卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910的培養(yǎng)15-17
• 1.2.1.1 人卵巢癌細(xì)胞的復(fù)蘇15
• 1.2.1.2 人卵巢癌細(xì)胞的傳代15-16
• 1.2.1.3 人卵巢癌細(xì)胞的凍存16-17
• 1.2.2 CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖17
• 1.2.3 細(xì)胞遷移17-18
• 2 結(jié)果與分析18-22
• 2.1 人卵巢癌A2780和HO8910的培養(yǎng)18-19
• 2.2 人卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910的細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)曲線19-20
• 2.3 LPA刺激能夠促進(jìn)A2780和HO8910細(xì)胞遷移20-21
• 2.4 LPA刺激能夠促進(jìn)A2780和HO8910細(xì)胞增殖21-22
• 討論22-23
• 第二章 人卵巢癌細(xì)胞A2780/HO8910LPA受體表達(dá)情況及相關(guān)載體的篩選23-38
• 1 材料與方法23-30
• 1.1 材料23-25
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材23
• 1.1.2 菌種與質(zhì)粒23
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑23-24
• 1.1.4 常用溶劑的配置24-25
• 1.2 方法25-30
• 1.2.1 Real Time PCR檢測(cè)A2780和HO8910細(xì)胞中LPA受體的mRNA表達(dá)25-28
• 1.2.1.1 細(xì)胞RNA的提取25
• 1.2.1.2 反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA25-27
• 1.2.1.3 Real Time PCR檢測(cè)mRNA的表達(dá)量27-28
• 1.2.2 搖菌28-29
• 1.2.3 提質(zhì)粒29
• 1.2.4 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)29-30
• 2 結(jié)果與分析30-37
• 2.1 人卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910中的LPA受體表達(dá)情況30-31
• 2.2 LPA刺激卵巢癌細(xì)胞后受體表達(dá)變化31-32
• 2.3 轉(zhuǎn)染LPA1/LPA3過表達(dá)載體,檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910內(nèi)LPA1/LPA3mRNA表達(dá)量32-33
• 2.4 轉(zhuǎn)染LPA1/LPA3干擾載體,檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞A2780和HO8910內(nèi)LPA1/LPA3mRNA表達(dá)量33-37
• 討論37-38
• 第三章 探索LPA介導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞A2780/HO8910增殖和遷移的信號(hào)通路38-64
• 1 材料與方法38-44
• 1.1 材料38-40
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材38
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品38
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑38-39
• 1.1.4 常用試劑的配制39-40
• 1.1.4.1 1.5 M的Tris-HCl(pH 8.8)的配制39
• 1.1.4.2 1 MTris-HCl的配制39
• 1.1.4.3 5×電泳緩沖液(Running buffer)的配制39
• 1.1.4.4 10×轉(zhuǎn)膜緩沖液(Transfer buffer)的配制39
• 1.1.4.5 TBST Buffer液的配制39-40
• 1.1.4.6 顯影液和定影液的配制40
• 1.1.4.7 檸檬酸緩沖液的配置(pH 6.0)40
• 1.2 方法40-44
• 1.2.1 Western Blot實(shí)驗(yàn)方法-細(xì)胞總蛋白的提取40-42
• 1.2.2 SDS-PAGE濃縮膠和分離膠的配制42
• 1.2.3 Wetern blot實(shí)驗(yàn)42-44
• 2 結(jié)果與分析44-61
• 2.1 Ki16425抑制LPA促進(jìn)細(xì)胞遷移44-45
• 2.2 shRNA-LPA3能夠解除LPA促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用45-47
• 2.3 LPA對(duì)HO8910細(xì)胞MMPs/TIMP的mRNA表達(dá)的影響47-48
• 2.4 PTX抑制LPA誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移48-50
• 2.5 shRNA-LPA3能夠解除PTX抑制細(xì)胞遷移的作用50-51
• 2.6 SB203580、PD98059抑制LPA促進(jìn)細(xì)胞遷移的影響51-54
• 2.7 BAY抑制LPA促進(jìn)A2780和HO8910細(xì)胞遷移的作用54-57
• 2.8 shRNA-LPA3能夠解除LPA促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用57-58
• 2.9 LPA能夠促進(jìn)卵巢癌A2780和HO8910細(xì)胞Bcl-2表達(dá)量的影響升高58-59
• 2.10 EGF抑制劑AG1478對(duì)卵巢癌A2780和HO-8910細(xì)胞遷移的影響59-61
• 討論61-64
• 結(jié)論64-65
• 1、LPA能夠促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖和遷移64
• 2、卵巢癌細(xì)胞內(nèi)LPA1/LPA3高表達(dá)64
• 3、LPA是通過LPA3受體/G/n-MAPK-p38/抓K-NF- K B-MMP促進(jìn)細(xì)胞的遷移64
• 4、LPA通過LPA3受體促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖64-65
• 綜述 溶血磷脂酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞影響的研究進(jìn)展65-69
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文75

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