本文關(guān)鍵詞：HACE1在肝癌中的生物學特性與其臨床病理學特征及預(yù)后的關(guān)系

  更多相關(guān)文章： 肝癌 HACE1 遷移 臨床病理特征 預(yù)后

【摘要】：肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)(以下簡稱肝癌)是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一,在全球,肝癌的發(fā)病率不斷攀升。流行病學和實驗研究均表明病毒性肝炎與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有著特定的關(guān)系,其中以乙型肝炎與肝癌關(guān)系最為密切。中國肝癌患者中約90%都存在乙型肝炎病毒(HBV)感染背景,加上其惡性程度高和預(yù)后差等特點,我國面臨的肝癌形勢日益嚴峻。截至目前,傳統(tǒng)外科手術(shù)和肝移植依然是肝癌治療的最佳方案,但由于肝癌起病隱匿,特異性臨床表現(xiàn)缺乏,大多數(shù)病人就診時已錯過最佳的手術(shù)時機,預(yù)后極差。因此,為探索肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的機制,改善患者長期預(yù)后,針對肝癌相關(guān)分子的研究已成為當前的研究熱點。HACE1基因是屬于HECT家族的E3泛素連接酶(HECT E3),位于染色體6q21,是多種惡性腫瘤中頻繁發(fā)生突變的一個位點。HACE1基因最早發(fā)現(xiàn)與腎母細胞瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),進一步研究發(fā)現(xiàn)該基因的低表達或突變與人類多種惡性腫瘤相關(guān),如乳腺癌,結(jié)直腸癌和淋巴瘤等。目前,HACE1基因?qū)Ω伟┑淖饔梦从忻鞔_報道。因此,本實驗主要探討HACE1基因在肝癌細胞中的生物學特性,研究其對肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。第一部分HACE1基因在肝癌細胞系和肝癌組織中的表達研究目的:研究HACE1基因在肝癌細胞株Huh7,MHCC97H,HCCLM3,MHCC97L,HepG2,SMCC7721以及肝正常細胞株L02和肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達,初步探討其與肝癌發(fā)生的關(guān)系。方法:采用RT?PCR和western blot方法檢測HACE1基因在肝癌細胞系、肝正常細胞株L02和40組肝癌及其相應(yīng)癌旁組織中mRNA和蛋白的表達水平。結(jié)果:在不同的肝癌細胞株Huh7,MHCC97H,HCCLM3,MHCC97L,HepG2,SMCC7721中,HACE1基因表達水平明顯低于肝正常細胞株L02,其中Huh7細胞中的HACE1基因相對表達水平最高,SMCC7721細胞中HACE1基因相對表達水平最低,因此選擇這兩株細胞進行后續(xù)功能實驗;在肝癌及相應(yīng)癌旁組織中,HACE1在肝癌中的表達明顯低于癌旁組織。結(jié)論:HACE1是一種重要的腫瘤抑制基因,其突變對肝癌的發(fā)生具有重要作用。第二部分HACE1基因表達水平與肝癌細胞增殖與遷移的關(guān)系目的:探討HACE1基因?qū)uh7和SMCC7721肝癌細胞株增殖與遷移的作用。方法:通過轉(zhuǎn)染HACE1 siRNA脂質(zhì)體與pcDNA3.1-HACE1質(zhì)粒分別沉默和過表達Huh7與SMCC7721細胞中的HACE1基因,從而構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HACE1siRNA、pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721肝癌細胞株;RT?PCR和western blot檢測HACE1基因的沉默和過表達效率;CCK-8實驗檢測沉默或過表達HACE1基因?qū)Ω伟┘毎鲋衬芰τ绊?Transwell和細胞劃痕實驗檢測對肝癌細胞遷移能力的作用。結(jié)果:成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HACE1 siRNA和pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721細胞株;CCK-8、Transwell和細胞劃痕實驗表明HACE1基因表達下調(diào)能夠明顯促進Huh7細胞的增殖和遷移(P0.01);過表達HACE1基因能夠明顯抑制SMCC7721細胞的增殖和遷移能力(P0.05)。結(jié)論:HACE1基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。第三部分HACE1基因表達與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系目的:探討HACE1基因在肝癌組織中的表達差異與肝癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法:采用免疫組化方法檢測102例肝癌組織中HACE1基因的表達情況,探討HACE1基因的不同表達水平與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:在所有102例患者中,其中75例患者HACE1基因呈低表達,27例患者HACE1基因呈高表達,且HACE1基因低表達的肝癌患者其腫瘤惡性程度更高。肝癌組織中HACE1基因表達水平的高低與患者血清AFP水平(P0.001),腫瘤分期(P0.05)和血管侵犯密切相關(guān)(P0.05),且HACE1基因高表達的患者5年總體生存率明顯高于低表達組(P0.05)。單因素和多因素回歸分析表明血清AFP水平、腫瘤分期和HACE1表達水平不僅能夠影響肝癌患者的總體生存率,同時也是獨立的預(yù)后因素。結(jié)論:HACE1基因在肝癌組織中的表達差異與肝癌的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 HACE1 遷移 臨床病理特征 預(yù)后
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 縮略詞表8-12
• 前言12-14
• 第一部分 HACE1基因在肝癌細胞系和肝癌組織中的表達14-25
• 一 材料和儀器14-17
• 1 材料14-15
• 2 主要試劑與儀器15-17
• 二 方法17-23
• 1 細胞培養(yǎng)17-18
• 2 實時熒光定量PCR(real-time RT-PCR)18-19
• 3 免疫印跡試驗（western blotting）19-23
• 4 統(tǒng)計學分析23
• 三 結(jié)果23-24
• 1 HACE1基因在肝癌細胞系和肝正常細胞株中的mRNA和蛋白表達23
• 2 HACE1基因在肝癌及其相應(yīng)癌旁組織中的mRNA和蛋白表達23-24
• 四 實驗小結(jié)24-25
• 第二部分 HACE1基因表達水平與肝癌細胞增殖與遷移的關(guān)系25-33
• 一 材料和儀器25-26
• 1 材料25-26
• 2 主要試劑或儀器26
• 二 方法26-28
• 1 細胞轉(zhuǎn)染26-27
• 2 CCK-8 細胞增殖實驗27-28
• 3 Transwell細胞遷移實驗28
• 4 細胞劃痕實驗28
• 5 統(tǒng)計學分析28
• 三 結(jié)果28-32
• 1 沉默及過表達HACE1細胞株的建立28-29
• 2 CCK-8 法檢測細胞的增殖能力29-30
• 3 Transwell實驗檢測細胞的遷移能力30-31
• 4 細胞劃痕實驗檢測檢測細胞的遷移能力31-32
• 四 實驗小結(jié)32-33
• 第三部分 HACE1基因表達與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系33-40
• 一 材料與儀器33-34
• 1 材料33-34
• 2 主要試劑與儀器34
• 二 方法34-36
• 1 免疫組織化學染色34-35
• 2 結(jié)果觀察與分析方法35
• 3 統(tǒng)計學分析35-36
• 三 結(jié)果36-39
• 1 免疫組化結(jié)果36
• 2 免疫組化結(jié)果與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系36-39
• 四 實驗小結(jié)39-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-50
• 綜述：HACE1的生物學特性及其在惡性腫瘤的研究進展50-56
• 參考文獻54-56
• 在學期間的研究成果56-57
• 致謝57

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