本文關(guān)鍵詞：新型HSP90抑制劑BIIB021增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞放射敏感性的研究

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【摘要】：研究背景食管癌在世界上是最常見(jiàn)腫瘤之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World health organization, WHO)報(bào)道,2008年全球食管癌發(fā)病率和病死率分別居世界第八位、第六位。在中國(guó)以及其他東亞國(guó)家,超過(guò)90%為食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC),但在西方發(fā)達(dá)國(guó)家腺癌則比較常見(jiàn)。術(shù)前和術(shù)后放療在提高食管鱗癌患者的局部控制率和生存率中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。但腫瘤內(nèi)在的放射抵抗仍使食管鱗癌患者存在較高的復(fù)發(fā)率和較低的5年生存率。因此,為食管鱗癌患者提供一個(gè)臨床上可靠的放射增敏劑是非常有必要的。熱休克蛋白90(Heat Shock Protein 90, HSP90)作為一個(gè)分子伴侶,可以促進(jìn)客戶蛋白構(gòu)象成熟和穩(wěn)定,保護(hù)它們免受降解。目前已證實(shí)的客戶蛋白有200多種,包括酪氨酸激酶,轉(zhuǎn)錄因子,結(jié)構(gòu)蛋白和激素受體等。其中EGFR, Akt, Raf-1, HER2等已被證實(shí)與放射抵抗相關(guān),從而保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。并且已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)HSP90在食管鱗癌及細(xì)胞系中高表達(dá),因此HSP90為食管鱗癌患者的臨床治療提供了一個(gè)有效的靶點(diǎn)。抑制HSP90可以導(dǎo)致這些放射抵抗相關(guān)蛋白的降解從而增強(qiáng)輻射導(dǎo)致的腫瘤殺滅效應(yīng),提高放射治療的療效。BIIB021是一種新型的人工合成的HSP90抑制劑,目前處于Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段。之前有實(shí)驗(yàn)證實(shí),HSP90抑制劑17-AAG可以顯著提高食管鱗癌細(xì)胞的放射敏感性。本研究中我們探討B(tài)IIB021作為單藥以及聯(lián)合放療在食管鱗癌細(xì)胞中顯著的抗腫瘤作用及其可能的機(jī)制。目的：探討B(tài)IIB021對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系增殖以及放射敏感性的影響。方法：1.CCK-8實(shí)驗(yàn)用來(lái)檢測(cè)BIIB021對(duì)Eca109和Eca9706細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制情況處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706,計(jì)數(shù)并分別接種于96孔板中,加入BIIB021(濃度梯度為：OnM,65nM,125nM,250nM,500nM, 1μM,2μM)培養(yǎng)5天。用CCK-8試劑盒檢測(cè)在此濃度梯度下,BIIB021對(duì)Eca109和Eca9706的生長(zhǎng)抑制情況。細(xì)胞活力=(實(shí)驗(yàn)組的OD450-空白組OD450)／(對(duì)照組OD450-空白組OD450)×100。2.通過(guò)克隆形式試驗(yàn)檢測(cè)BIIB021聯(lián)合放療對(duì)Eca109和Eca9706克隆形成能力的影響一定數(shù)目的Eca109和Eca9706接種在六孔板中,加入IC25濃度的BIIB021(Eca109: 97nM; Eca9706:33nM)培養(yǎng)16h后,分別接受2Gy,4Gy,6Gy,8Gy的單次劑量照射,4h后更換培養(yǎng)基。接種后的14天計(jì)數(shù)克隆形成(大于50個(gè)細(xì)胞數(shù)為一個(gè)克隆)。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡和周期(實(shí)驗(yàn)分為：對(duì)照組,單純照射組,單純藥物組,藥物聯(lián)合照射組)單純照射組照射劑量為6Gy,單純藥物組藥物濃度為1μM,藥物聯(lián)合照射組用1μM BⅡO021培養(yǎng)16h后接受6Gy的單次劑量照射,均在處理24h后收集細(xì)胞,分別用凋亡和周期試劑盒檢測(cè)Eca109和Eca9706的凋亡情況和周期分布。4.Western blotting用來(lái)檢測(cè)放射抵抗相關(guān)蛋白pEGFR, pAkt, Raf-1和凋亡相關(guān)蛋白cleaved PARP的表達(dá)情況以及pEGFR和pAkt的表達(dá)情況隨BIIB021培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短(12h,24h,48h)的變化結(jié)果：1.BIIB021以劑量依賴的方式抑制食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706的生長(zhǎng),并且Eca9706對(duì)BIIB021更敏感。2.BIIB021減弱了放射后食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706的克隆形成能力,提高了放射敏感性。3.BIIB021聯(lián)合照射組與單純BIIB021處理組及單純照射組相比,顯著增加了食管鱗癌細(xì)胞的凋亡,增強(qiáng)了細(xì)胞G2期阻滯,處在G2期細(xì)胞對(duì)放射更加敏感。4. BIIB021聯(lián)合照射組與單純BIIB021處理組及單純照射組相比顯著下調(diào)了放射抵抗相關(guān)蛋白pEGFR,pAkt,Raf-1的表達(dá),同時(shí)BIIB021聯(lián)合照射組凋亡相關(guān)蛋白cleaved PARP的表達(dá)顯著升高。pEGFR和pAkt的表達(dá)隨BIIB021培養(yǎng)時(shí)間增加而下調(diào)。結(jié)論：1.通過(guò)上述途徑,BIIB021增強(qiáng)了食管鱗癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性。所有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,BIIB021不論是作為單獨(dú)制劑還是聯(lián)合放療都在食管鱗癌細(xì)胞中發(fā)揮了強(qiáng)大的抗腫瘤能力。2.放射治療是針對(duì)晚期不能手術(shù)切除的食管鱗癌患者的主要治療手段,并且術(shù)前或術(shù)后放療在提高食管鱗癌患者的局部控制和生存率中起到非常重要的作用,但是內(nèi)在的腫瘤抗輻射大大降低了放射治療的敏感性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,新型可口服的HSP90抑制劑BIIB021,可以同時(shí)阻斷多種與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號(hào)通路,無(wú)論是作為單藥制劑還是放射增敏劑,都為食管鱗癌患者提供了更好的治療策略。
【關(guān)鍵詞】：HSP90 HSP90抑制劑 BIIB021 食管鱗癌 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 綜述46-58
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄59-60
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表60

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