發(fā)布時間：2017-10-27 21:05

  本文關鍵詞：CHD1L通過抑制hMLH1的表達影響肝癌細胞SMMC7721增殖遷移和凋亡的研究

  更多相關文章： Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like human mut Lhomolog 1 肝癌細胞

【摘要】：目的:探討CHD1Lsi RNA下調CHD1L(Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like)基因的表達對肝癌細胞系SMMC7721中h MLH1(human mut L homolog 1)基因表達和其增殖、遷移、凋亡的影響。方法:1、CHD1Lsi RNA轉染后,下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L基因的表達后,檢測h MLH1基因m RNA及蛋白表達水平的變化;2、采用CCK8實驗、凋亡實驗和Transwell遷移實驗觀察轉染后肝癌細胞系SMMC7721增殖、凋亡和遷移的變化。3、統(tǒng)計分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,計量資料采用(x±S)表示,所有實驗數(shù)據(jù)均經(jīng)兩獨立樣本t檢驗進行分析,P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果:1、下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后,h MLH1在m RNA和蛋白表達水平上調;2、下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后,肝癌細胞SMMC7721的增殖、遷移受到抑制和其凋亡得到提高;結論:1、在肝癌細胞系SMMC7721中,下調CHD1L基因表達可能上調h MLH1的表達;2、在肝癌細胞系SMMC7721中,下調CHD1L基因表達抑制肝癌細胞增殖、遷移并促進其凋亡。
【關鍵詞】：Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like human mut Lhomolog 1 肝癌細胞
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料與方法11-31
• 2.1 材料11
• 2.1.1 實驗細胞11
• 2.2 主要實驗試劑和耗材11-12
• 2.3 配制實驗試劑12-13
• 2.4 主要的實驗設備儀器13-14
• 2.5 細胞的培養(yǎng)14-17
• 2.5.1 細胞的傳代14-15
• 2.5.2 細胞凍存15-16
• 2.5.3 細胞復蘇16-17
• 2.6 提取細胞的總RNA和聚合酶鏈反應（PCR）17-20
• 2.6.1 細胞總RNA的提取17-18
• 2.6.2 RNA逆轉錄為cDNA18
• 2.6.3 梯度PCR選取最適的退火溫度18-19
• 2.6.4 實時熒光定量PCR檢測CHD1L和hMLH1的mRNA表達水平19-20
• 2.7 蛋白提取和Western blot檢測CHD1L和hMLH1蛋白的表達20-24
• 2.7.1 細胞總蛋白的提取20
• 2.7.2 BCA法測定蛋白濃度20-21
• 2.7.3 SDS-PAGE凝膠電泳21-22
• 2.7.4 轉膜22-23
• 2.7.5 免疫反應23
• 2.7.6 蛋白檢測23-24
• 2.8 在SMMC7721細胞中轉染siRNA后檢測CHD1L和hMLH1的mRNA和蛋白的表達水平24-27
• 2.8.1 設計合成針對CHD1L基因特異性siRNA序列24
• 2.8.2 細胞轉染24-25
• 2.8.3 最佳siCHD1L片段篩選25-26
• 2.8.4 實時熒光定量PCR分析轉染siRNA后細胞的CHD1L和hMLH1的mRNA表達水平的變化情況26
• 2.8.5 Western blot分析轉染siRNA后細胞的CHD1L和hMLH1的蛋白表達水平的變化情況26-27
• 2.9 CCK8法檢測CHD1L對肝癌細胞系SMMC7721增殖的影響27-28
• 2.9.1 細胞分組與處理27
• 2.9.2 CCK8法檢測細胞增殖情況27-28
• 2.10 凋亡實驗檢測CHD1L對肝癌細胞系SMMC7721凋亡的影響28-29
• 2.10.1 細胞分組和處理28
• 2.10.2 凋亡實驗檢測細胞的凋亡情況28-29
• 2.11 Transwell遷移實驗檢測對肝癌細胞系SMMC7721遷移能力的影響29-30
• 2.11.1 細胞分組和處理29
• 2.11.2 Transwell遷移實驗檢測細胞的遷移能力29-30
• 2.12 統(tǒng)計學分析30-31
• 第3章 結果31-37
• 3.1 CHD1LsiRNA轉染肝癌細胞系SMMC7721對CHD1L蛋白表達的影響31-32
• 3.2 下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后hMLH1的mRNA和蛋白表達水平上調32-33
• 3.3 下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后，其增殖功能受到抑制33-34
• 3.4 下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后，其凋亡率升高34-35
• 3.5 下調肝癌細胞系SMMC7721中CHD1L的表達后，，其遷移能力降低35-37
• 第4章 討論37-40
• 4.1 CHD1L基因對肝癌細胞系SMMC7721增殖、遷移和凋亡的影響37-38
• 4.2 CHD1L基因對肝癌細胞系SMMC7721中hMLH1基因表達的影響38-40
• 第5章 結論40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻42-45
• 攻讀學位期間的研究成果45-46
• 綜述 CHD1L、hMLH1在肝癌中的最新研究進展46-54
• 參考文獻52-54

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