本文關(guān)鍵詞：成人T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后分子標(biāo)記PHF6和DNM2特征研究

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【摘要】：第一部分PHF6在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的特征研究目的：T細(xì)胞祖細(xì)胞在轉(zhuǎn)化過程中出現(xiàn)多種基因的異常改變,這些異�；騾f(xié)同作用即導(dǎo)致T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL)的產(chǎn)生。PHF6 (plant homeodomain finger 6)是近期研究發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵性腫瘤抑制基因,且在T-ALL疾病中存在突變。本研究目的在于研究成人T-ALL中PHF6基因突變、表達(dá)及臨床意義。方法：本研究通過對成人T-ALL患者的PHF6基因外顯子(exon)2-10進(jìn)行擴(kuò)增、克隆和測序,研究PHF6突變的發(fā)生率、突變位點和類型。通過實時熒光定量PCR檢測T-ALL患者PHF6 mRNA的表達(dá)水平。分析PHF6突變及表達(dá)異常與NOTCH1突變的相關(guān)性及預(yù)后意義。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 20.0軟件,白細(xì)胞(white blood cell,WBC)、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板(platelet, PLT)、乳酸脫氫酶(1actic dehydrogenase, LDH)等計量資料的差異采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗；計數(shù)資料采用X2檢驗(或Fisher精確檢驗)；Kaplan-Meier檢驗方法建立生存曲線,并對不同分組進(jìn)行總生存(overall survival, OS)時間和無事件生存(event-free survival, EFS)時間的生存分析。P0.05認(rèn)為結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：本研究成人T-ALL患者中,PHF6基因突變率為27.1%(16/59),其中包括10例新發(fā)現(xiàn)的突變,其中6例為框移突變(6/16,37.5%),可導(dǎo)致PHF6功能的喪失。此外,本研究發(fā)現(xiàn)在T-ALL患者中PHF6 mRNA表達(dá)水平顯著降低。重要的是,本研究發(fā)現(xiàn)PHF6突變與高齡、血紅蛋白濃度降低、CD13陽性表達(dá)、脾腫大或淋巴結(jié)腫大具有顯著相關(guān)性。另外,PHF6突變與NOTCH1突變具有顯著相關(guān)性,同時具有這兩種突變的T-ALL患者的EFS時間顯著減少。結(jié)論：在T-ALL中PHF6基因由于低表達(dá)或突變導(dǎo)致失活。PHF6突變可以與NOTCHl突變共存,且具有這兩種突變的患者有著更差的預(yù)后。在T-ALL患者中,PHF6突變與NOTCH1突變的協(xié)同致癌因素可能是一種潛在的預(yù)后標(biāo)志。第二部 DNM2在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的突變研究目的：NM2 (dynamin2)基因是一種轉(zhuǎn)錄因子,參與多種細(xì)胞功能,如胞吞,吞噬體形成,細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸,與肌動蛋白和微管網(wǎng)相互作用,以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡等。本研究目的在于研究成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中DNM2基因突變。方法：本研究通過對成人T-ALL患者的DNM2基因外顯子(exon)2-10、12-14和16-22進(jìn)行擴(kuò)增和測序,研究DNM2突變的發(fā)生率、突變位點和類型,分析DNM2突變與NOTCH1和PHF6突變的相關(guān)性。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 20.0軟件,白細(xì)胞(white blood cell,WBC)、血紅蛋白(hemoglobin, Hb)、血小板(platelet, PLT)等計量資料的差異采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗；計數(shù)資料采用X2檢驗(或Fisher精確檢驗)。P0.05認(rèn)為結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：本研究成人T-ALL患者中,DNM2基因突變率為9.52%(4/42),4例突變均為點突變(R361X,Y485H,G537S和R601W),其中2例位于MID域,2例位于PH域。4例DNM2突變患者均存在NOTCH1突變,這4例NOTCH1突變發(fā)生于HD-N、HD-C及PEST域：其中3例合并存在PHF6突變,3例PHF6突變發(fā)生于exon4、5、8。另外,本研究發(fā)現(xiàn)DNM2有同義氨基酸突變,發(fā)生于exon4(1/42,2.38%)、exon6(1/42,2.38%)、exon22(1/42,2.38%),特別在exon20有著高發(fā)生率(35/42,83.33%),且exon20存在2種同義氨基酸突變(Ala713Ala和Asp720Asp),其中A713A的突變率為73.81%(31/42),并且此突變也發(fā)生于B細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL)及健康人中,突變率均在80%以上。結(jié)論：DNM2突變與NOTCH1突變及PHF6突變有著共存現(xiàn)象,可能在T-ALL的發(fā)生發(fā)展中有著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病 PHF6 NDTCH1 突變 T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病 DNM2 NOTCH1 PHF6 突變
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 PHF6在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的特征研究12-34
• 1 前言12-13
• 2 材料與方法13-19
• 2.1 主要試劑和耗材13
• 2.2 主要儀器和設(shè)備13-14
• 2.3 研究對象14
• 2.4 標(biāo)本采集及單個核細(xì)胞的收集14-15
• 2.5 細(xì)胞總DNA的提取15-16
• 2.6 細(xì)胞總RNA的提取和cDNA的制備16-17
• 2.7 免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)檢測17
• 2.8 基因組PCR及測序17-18
• 2.9 實時熒光定量PCR18-19
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)分析19
• 3 結(jié)果19-29
• 3.1 PHF6在T-ALL中的突變特征19-22
• 3.2 PHF6基因在T-ALL患者中的表達(dá)及與突變的關(guān)聯(lián)22-23
• 3.3 PHF6突變與臨床指標(biāo)的相關(guān)性23-25
• 3.4 PHF6突變與其它基因突變在T-ALL中的關(guān)聯(lián)性25
• 3.5 PHF6突變與NOTCH1突變共表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性25-28
• 3.6 PHF6突變與臨床預(yù)后的相關(guān)性28-29
• 4 討論29-31
• 5 參考文獻(xiàn)31-34
• 第二部分 DNM2在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的突變研究34-53
• 1 前言34-35
• 2 材料與方法35-41
• 2.1 主要試劑和耗材35
• 2.2 主要儀器和設(shè)備35-36
• 2.3 研究對象36
• 2.4 標(biāo)本采集及單個核細(xì)胞的收集36-37
• 2.5 細(xì)胞總DNA的提取37-38
• 2.6 免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)檢測38
• 2.7 基因組PCR及測序38-40
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)分析40-41
• 3 結(jié)果41-48
• 3.1 DNM2在T-ALL中的突變特征41-43
• 3.2 DNM2基因同義氨基酸突變43-45
• 3.3 DNM2突變合并存在NOTCH1、PHF6突變45
• 3.4 DNM2突變與臨床指標(biāo)的相關(guān)性45-48
• 4 討論48-50
• 5 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述53-68
• 參考文獻(xiàn)59-68
• 附錄68-70
• 在讀期間發(fā)表的論文70-71
• 致謝71

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李敏;成人T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后分子標(biāo)記PHF6和DNM2特征研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：1102701