本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子SOX2、OCT4在胃癌組織中的表達(dá)及過表達(dá)SOX2對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌組織 SGC7901 性別決定相關(guān)基因簇2(SOX2) 分化程度

【摘要】：目的:腫瘤組織的分化程度是決定胃癌預(yù)后的重要因素,本研究檢測胃癌組織中SOX2和OCT4的表達(dá),并探討其與胃癌患者臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系及意義。并誘導(dǎo)生成過表達(dá)SOX2的SGC7901-hSox2細(xì)胞株。研究過表達(dá)SOX2影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)特征的表現(xiàn)和分子機(jī)制。方法:1.通過熒光定量PCR、Western-bloting、免疫組化技術(shù)檢測60例不同分化程度的胃癌組織與正常胃粘膜組織中SOX2和OCT4的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。2.分析SOX2和OCT4基因的表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。3.構(gòu)建含SOX2基因的質(zhì)粒載體,將慢病毒感染SGC-7901培養(yǎng)得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-hSox2細(xì)胞。4.各種細(xì)胞功能試驗(yàn),如Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞耐藥實(shí)驗(yàn),裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn),依次檢測過表達(dá)SOX2對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。5.熒光定量PCR、western bloting檢測過表達(dá)SOX2的胃癌細(xì)胞中PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控基因PTEN及干性標(biāo)記基因的表達(dá)變化。結(jié)果:1.熒光定量PCR、Western-bloting檢測顯示,高分化胃癌組織SOX2 mRNA和蛋白的相對表達(dá)量與正常胃黏膜組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.1033,P0.05,t=0.116,P0.05),但顯著高于中分化胃癌組織(t=12.48,P0.05,t=22.78,p0.05)和低分化胃癌組織(t=17.56,p0.05,t=30.00,p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高分化胃癌組織oct4mrna和蛋白的相對表達(dá)量與正常胃黏膜組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.436,p0.05,t=1.064,p0.05),但顯著低于中分化胃癌組織(t=13.23,p0.05,t=25.56,p0.05)和低分化胃癌組織(t=12.10,p0.05,t=69.48,p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.免疫組化顯示高分化胃癌組織中sox2的陽性表達(dá)率(10/21)高于中分化胃癌組織(7/20)和低分化胃癌組織(2/19)(p0.05),高分化胃癌組織中oct4的陽性表達(dá)率(2/21)低于中分化胃癌組織(6/20)和低分化胃癌組織(12/19)(p0.05)。3.與臨床病理參數(shù)相比較,胃癌中sox2,oct4蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡無關(guān),無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。與病理分期、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān)(p0.05)。4.成功誘導(dǎo)得到胃癌細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株sgc7901-hsox2,transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)提示sgc7901-hsox2組與sgc7901組、sgc7901-zpp組相比較,細(xì)胞的穿膜能力顯著減弱(t=18.58,p0.05,t=18.19,p0.05)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明sgc7901-hsox2組的遷移能力低于空白、對照組(t=2.999,p0.05,t=4.635,p0.05),細(xì)胞耐藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:sgc7901-hsox2組對l-ohp和5-fu的ic50均低于對照、空白組(p0.05),裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)提示:sgc7901-hsox2組細(xì)胞的致瘤性較空白、對照組降低(t=9.204,p0.05,t=15.78,p0.05)。5.熒光定量pcr、western bloting實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:sgc7901-hsox2組細(xì)胞的pi3k-akt信號通路的調(diào)控基因pten相對表達(dá)水平與空白、對照組相比明顯升高。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。然而過表達(dá)基因sox2的胃癌細(xì)胞中干細(xì)胞表面標(biāo)記物oct4、c-myc、cd44無明顯變化(p0.05)。結(jié)論:1.不同分化程度胃癌組織的sox2表達(dá)水平不同,分化程度越高,sox2表達(dá)水平越高,提示sox2在胃上皮細(xì)胞的分化過程中起了明顯的作用,在胃癌的演變過程中具有抑癌基因的功能。2.胃癌組織分化程度越低,oct4的mrna及蛋白的表達(dá)量越高,低分化胃癌組織的OCT4表達(dá)水平明顯高于中、高分化胃癌組織,OCT4基因的表達(dá)與胃癌細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)。3.SOX2基因的低表達(dá)水平和OCT4的高水平表達(dá)可能促進(jìn)胃癌的進(jìn)展和侵襲,有望成為胃癌臨床診斷、治療和愈后生存期的一個(gè)指標(biāo)。4.過表達(dá)SOX2胃癌細(xì)胞的侵襲遷移、增殖能力及致瘤性明顯降低,5.SOX2可能通過PTEN下調(diào)PI3K/AKT信號通路來改變胃癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。
【關(guān)鍵詞】：胃癌組織 SGC7901 性別決定相關(guān)基因簇2(SOX2) 分化程度
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 英文縮略詞6-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-35
• 1 主要材料15-21
• 1.1 組織標(biāo)本15
• 1.2 細(xì)胞株來源15
• 1.3 質(zhì)粒來源15-16
• 1.4 主要儀器和設(shè)備16-17
• 1.5 主要試劑17-19
• 1.6 主要試劑的配制19-21
• 1.7 PCR引物21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-35
• 2.1 組織標(biāo)本采集21
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.3 慢病毒包裝22-23
• 2.4 慢病毒生物學(xué)滴度測定23-24
• 2.5 慢病毒感染SGC7901并誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-hsox2，，穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-zpp24-25
• 2.6 總RNA提取及m RNA逆轉(zhuǎn)成cDNA25-27
• 2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（染料法）27-28
• 2.8 Western-bloting實(shí)驗(yàn)28-31
• 2.9 免疫組化檢測31-32
• 2.10 胃癌細(xì)胞的成瘤實(shí)驗(yàn)32
• 2.11 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲性32-33
• 2.12 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.13 MTs實(shí)驗(yàn)檢測增殖能力34
• 2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法34-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-49
• 1. 不同分化程度胃癌組織中轉(zhuǎn)錄因子SOX2、OCT4的表達(dá)35-39
• 1.1 Real-time PCR檢測胃癌組織中SOX2、OCT4基因mRNA的表達(dá)35-36
• 1.2 Western-bloting檢測胃癌組織中SOX2、OCT4蛋白的表達(dá)36-37
• 1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果37-38
• 1.4 免疫組化胃癌組織中SOX2、OCT4的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的比較38-39
• 2. 過表達(dá)SOX2對胃癌細(xì)胞腫瘤特性的影響39-49
• 2.1 慢病毒滴度測定結(jié)果39-40
• 2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染SGC7901及 構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-hsox2、穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-ZPP40-41
• 2.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901-hsox2的PCR鑒定結(jié)果41-42
• 2.4 MTS法檢測過表達(dá)Sox2對胃癌細(xì)胞的耐藥性影響。42
• 2.5 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)42-43
• 2.6 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)43-44
• 2.7 熒光定量PCR44-46
• 2.8 Western Blot結(jié)果46-47
• 2.9 胃癌細(xì)胞的裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)47-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 綜述55-62
• 參考文獻(xiàn)60-62
• 致謝62

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本文編號：1102053