本文關(guān)鍵詞：人類胰腺癌細(xì)胞中ROS和caspase在TRAIL誘導(dǎo)下的凋亡和凋亡性壞死中功能的研究

  更多相關(guān)文章： TRAIL ROS 凋亡 壞死 胰腺癌 凋亡性壞死

【摘要】：目的:通過檢測在凋亡和凋亡性壞死發(fā)生時(shí)信號通路中的活性氧簇、caspase家族分子的表達(dá)與變化,分析它們在凋亡和壞死性凋亡中的功能及聯(lián)系,為后續(xù)研究凋亡和凋亡性壞死發(fā)生過程中的功能及在胰腺癌中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)支持和研究思路,為胰腺癌臨床治療提供治療策略。方法:1.通過對TRAIL處理下的WST-8細(xì)胞活力檢測,篩選出對TRAIL敏感的細(xì)胞系。通過檢測細(xì)胞表面的TRAIL受體,證明TRAIL可以作用于TRAIL敏感性的胰腺癌細(xì)胞。最終通過流式細(xì)胞術(shù)檢測TRAIL誘導(dǎo)下,在TRAIL敏感性胰腺癌細(xì)胞中,ROS的產(chǎn)生。2.通過ROS抑制劑NAC和Tempol來抑制胰腺癌細(xì)胞中ROS的水平,用流式細(xì)胞術(shù)檢測這種情況下TRAIL敏感性胰腺癌細(xì)胞的情況。3.在檢測ROS抑制時(shí),TRAIL處理過的胰腺癌細(xì)胞的凋亡情況時(shí),出現(xiàn)了凋亡性壞死特征的細(xì)胞群。因此,通過凋亡性壞死特異性抑制劑Nec-1,用流式細(xì)胞術(shù)來驗(yàn)證這群細(xì)胞是否可能為凋亡性壞死細(xì)胞群。4.我們首先檢測了兩株胰腺癌細(xì)胞中凋亡壞死進(jìn)程中的關(guān)鍵性分子RIP3的表達(dá)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們對于出現(xiàn)的Annexin V-/PI+細(xì)胞群就是凋亡性壞死細(xì)胞群的想法,我們設(shè)計(jì)了利用si RNA沉默RIP3的實(shí)驗(yàn)。并通過細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)、流失細(xì)胞術(shù)的檢測,對比RIP3沉默前后胰腺癌細(xì)胞系的變化。5.通過免疫印跡檢測TRAIL處理后,兩株胰腺癌細(xì)胞中caspase表達(dá)的變化。接著,我們用caspase抑制劑后,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及壞死性凋亡的情況。6.為了研究caspase-2,-9和ROS的關(guān)系。我們首先抑制了caspase-9,通過免疫印跡觀察caspase-2的變化;接著caspase-2被抑制,通過免疫印跡觀察caspase-2的變化。通過流式細(xì)胞術(shù),我們還檢測了caspase-2,caspase-9抑制劑存在時(shí),TRAIL處理后的細(xì)胞中ROS水平的變化。結(jié)果:1.TRAIL敏感性胰腺癌細(xì)胞中會產(chǎn)生ROS。2.在Mia Pa Ca-2中抑制ROS會減少TRAIL誘導(dǎo)下的凋亡的產(chǎn)生。3.ROS抑制下在TRAIL誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞中凋亡性壞死的產(chǎn)生。4.ROS抑制下在TRAIL處理Bx PC-3細(xì)胞,出現(xiàn)依賴RIP3的凋亡性壞死。5.Caspase-2,-9參與到了在TRAIL誘導(dǎo)下的凋亡和壞死性凋亡。6.Caspase-2/9和ROS在TRAIL處理后的癌細(xì)胞中沒有交叉結(jié)論:ROS、caspase-2,-9參與了凋亡與壞死性凋亡。Mia Pa Ca-2作為ROS高表達(dá)細(xì)胞系,ROS的水平的高低與凋亡的程度成正比。ROS抑制時(shí),兩株細(xì)胞都會出現(xiàn)凋亡性壞死的現(xiàn)象,其中Bx PC-3為RIP3依賴性凋亡性壞死。在凋亡和壞死性凋亡的過程中,caspase-2是caspase-9的上游信號分子,ROS與caspase-2,-9沒有交叉。.
【關(guān)鍵詞】：TRAIL ROS 凋亡 壞死 胰腺癌 凋亡性壞死
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文縮略詞8-10
• 前言10-13
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法13-35
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2 方法16-35
• 結(jié)果35-51
• 討論51-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述61-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 致謝72-73
• 讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文73-74
• 個(gè)人簡歷74

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本文編號：1095881