本文關(guān)鍵詞：鹽霉素對人宮頸癌Hela細胞體外增殖和凋亡的影響

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【摘要】：目的探討鹽霉素是否具有抑制人宮頸癌Hela細胞的增殖,誘導(dǎo)其凋亡的作用,并從分子水平研究鹽霉素對Hela細胞生長可能的調(diào)控機制方法(1)將培養(yǎng)后的人宮頸癌Hela細胞以每孔5000個細胞濃度種入雙96孔板,培養(yǎng)24小時后,分別隨機選取12孔,其中一組為空白對照組,余九組加入鹽霉素,濃度分別為0、0.375、1.5、6、12、24、48、96、120μg/m L,其中0μg/m L組為陰性對照組,通過酶標儀測出藥物作用24h、48h、72h的OD值,繪制出抑制率與鹽霉素濃度和作用時間的關(guān)系圖;(2)根據(jù)上述結(jié)果,篩選出細胞接近IC50的鹽霉素濃度,分別為6、12、24μg/m L三組,同上法設(shè)對照組,將2ml細胞濃度為5×105/ml的細胞接種于6孔板上,培養(yǎng)24h以后,分別向各孔加入濃度為0、6、12、24μg/m L鹽霉素,24h后收集細胞,離心固定,PI染色,流式細胞儀測出各組細胞的細胞周期和凋亡率;(3)同上分組法,將10ml細胞濃度為5×106/ml的細胞懸液分別加入到5塊培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)24h后,分別向各培養(yǎng)皿加入濃度為0、6、12、24μg/m L鹽霉素,24h后提取各組細胞總蛋白,Western Blot法檢測Bax、Bcl-2、caspase-3基因表達。結(jié)果(1)cck-8法檢測發(fā)現(xiàn),0.375-120μg/mL的濃度范圍內(nèi)的鹽霉素作用Hela細胞24-72h后,細胞增殖抑制率由0.89%上升至96.35%,鹽霉素對Hela細胞增殖的抑制作用與鹽霉素濃度及作用時間呈正相關(guān)關(guān)系,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)流式細胞儀檢測鹽霉素干預(yù)24小時后的Hela細胞凋亡情況。發(fā)現(xiàn)Hela細胞凋亡率由(11.15±0.70)%上升至(45.1±0.21)%。且凋亡率隨濃度增加而呈線性上升,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)流式細胞儀檢測鹽霉素干預(yù)24小時后的Hela細胞周期分布情況。發(fā)現(xiàn)當鹽霉素濃度由6μg/m L升高為24μg/m L時,處于G0/G1期的細胞由(59.56±0.93)%升高至(74.31±0.57)%,且鹽霉素濃度越高對G0/G1期的阻滯越明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),處于G2期和S期的變化無明顯規(guī)律;(4)Western Blot法檢測發(fā)現(xiàn),藥物組Bcl-2蛋白表達明顯低于陰性對照組,且與濃度負相關(guān),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達明顯高于陰性對照組,且與濃度呈正相關(guān),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論(1)鹽霉素對人宮頸癌細胞Hela的體外增殖有較強的抑制效應(yīng),且具有良好的濃度依賴性和時間依賴性;(2)鹽霉素可誘導(dǎo)Hela細胞凋亡,其機制可能是通過增強bax、caspase-3基因的表達、減少bcl-2基因的表達。
【關(guān)鍵詞】：鹽霉素 Hela細胞抑制率 Bax Bcl-2 caspase-3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 主要縮略英文索引9-11
• 前言11-13
• 實驗材料13-15
• 實驗方法15-21
• 實驗結(jié)果21-37
• 討論37-43
• 結(jié)論43-45
• 參考文獻45-51
• 文獻綜述: 子宮頸癌的治療前景51-57
• 參考文獻54-57
• 碩士期間發(fā)表的論文57-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄒向陽;李連宏;;細胞周期調(diào)控與腫瘤[J];國際遺傳學(xué)雜志;2006年01期

2 ;Expression of Fas ligand and Caspase-3 contributes to formation of immune escape in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2003年07期

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本文編號：1092601