本文關(guān)鍵詞：羧酸甜菜堿兩性聚合物功能化尼龍導(dǎo)管及其捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究

  更多相關(guān)文章： 羧酸甜菜堿甲基丙烯酸酯 ATRP 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 捕獲 介入醫(yī)療

【摘要】：癌癥的個體化治療近年來日益受到研究者的關(guān)注和重視,它要求針對不同的病人及其所處的不同臨床階段采取不同的治療方案,那么判斷病人的臨床階段就顯得尤為重要起來。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是一種從腫瘤原位病灶脫離并進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞,它的出現(xiàn)極有可能引發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移,是腫瘤難以治愈甚至致死的主要原因。隨著介入醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展,我們希望能夠研發(fā)一種循環(huán)腫瘤細(xì)胞實時檢測設(shè)備來取代如CELLSEARCH系統(tǒng)那樣價格昂貴、敏感性差的血液檢測系統(tǒng)。但是,介入醫(yī)療器械需要滿足血液相容性的要求,否則設(shè)備表面會吸附大量蛋白導(dǎo)致血管堵塞,從而引發(fā)血栓等效應(yīng),因此需要對介入材料進(jìn)行表面處理。另外,由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞在血液中的數(shù)量非常稀少,這也要求介入設(shè)備能夠高效、特異地捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞,從而達(dá)到最終的檢測目的。鑒于上述兩個方面,本論文首先進(jìn)行介入材料的表面改性工作。選擇尼龍材料是因為它已廣泛的作為醫(yī)療介入材料而使用。選擇羧酸甜菜堿兩性聚合物作為表面改性分子是因為它具有獨特的雙功能性：即能夠有效地提高表面親水性能,同時末端豐富的羧基又為抗體的固定提供了良好位點。通過甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DMAEMA)和氯丙酸為原料,探索出羧酸甜菜堿甲基丙烯酸酯(CBMA)單體的合成方法。用甲醛處理尼龍表面后,通過ATRP法將CBMA聚合物接枝到尼龍表面制成聚合物刷。改性表面的物理化學(xué)性質(zhì)是通過全反射-傅里葉紅外光譜(ATR-FITR),X射線光電子能譜(XPS),掃描電子顯微鏡(SEM)和原子力顯微鏡(AFM)觀察得到。結(jié)果顯示,改性前后表面性質(zhì)截然不同,證明我們成功地接枝上了CBMA聚合物刷。改性表面的血液相容性是通過水接觸角實驗(WCA),血小板黏附實驗,蛋白吸附試驗和血漿復(fù)鈣時間實驗得到。結(jié)果顯示,PCBMA改性后的尼龍表面水接觸角大大降低,黏附的血小板和BSA、BFG蛋白數(shù)量顯著減少,血漿復(fù)鈣時間大大延長,證明接枝CBMA聚合物刷的尼龍表面血液相容性得到明顯提高。本論文另一部分重要工作是利用改性尼龍進(jìn)行捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的試驗。選擇anti-EpCAM抗體作為特異性抗體是因為EpCAM在多種腫瘤細(xì)胞(包括本實驗選擇的胃癌)表面過表達(dá)；選擇SGC7901細(xì)胞株是因為免疫組化實驗表明它對anti-EpCAM表達(dá)呈陽性。通過EDC/NHS活化CBMA基團(tuán)的羧基,將抗體成功接枝上去,隨后分別在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液和全血中進(jìn)行捕獲試驗。通過DAPI染色、SEM和熒光顯微鏡拍照觀察發(fā)現(xiàn),改性尼龍器械在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中能夠成功捕獲大量的腫瘤細(xì)胞,在全血中可以特異性的富集、捕獲腫瘤細(xì)胞而不受其他血液成分的干擾。這一實驗結(jié)果驗證了改性尼龍醫(yī)療器械捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的可行性。本論文的第三部分是針對ATRP法改性和KH550法改性尼龍捕獲效率的對比論證。KH550法作為一種成熟的表面改性方法也可以用作改性表面捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞。與KH550法相比,理論上ATRP法能夠接枝更多的有效官能團(tuán),從而捕獲效率更高。本論文從接枝CBMA數(shù)量,連接抗體數(shù)量和最終在CTC培養(yǎng)液中捕獲腫瘤細(xì)胞數(shù)量三個方面論證兩種方法捕獲效率。其中,CBMA接枝數(shù)通過熒光顯微鏡觀察記錄FITC熒光強(qiáng)度來定性和定量判斷,抗體接枝數(shù)量通過UV-可見分光光度計測量吸光度后定量計算得到,捕獲腫瘤細(xì)胞數(shù)量通過DAPI染色后熒光顯微鏡拍照計數(shù)得到。實驗結(jié)果表明,ATRP法是KH550法接枝CBMA分子量的2.6倍,連接的抗體數(shù)量也要多2.1倍,捕獲的細(xì)胞數(shù)量則遠(yuǎn)遠(yuǎn)多出5.6倍。因此,本論文選擇ATRP法進(jìn)行表面改性更有利于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲。
【關(guān)鍵詞】：羧酸甜菜堿甲基丙烯酸酯 ATRP 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 捕獲 介入醫(yī)療
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08;R730.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 第一章 緒論13-27
• 1.1 腫瘤的個體化治療13-18
• 1.1.1 惡性腫瘤及個體化醫(yī)學(xué)13-14
• 1.1.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其檢測意義14-16
• 1.1.3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞的富集和檢測方法16-18
• 1.2 腫瘤的介入治療18-20
• 1.2.1 介入治療的分類18-19
• 1.2.2 介入治療材料19-20
• 1.3 介入材料的功能化修飾20-25
• 1.3.1 功能化修飾單體20-22
• 1.3.2 功能化修飾方法22-25
• 1.4 本論文的研究背景、內(nèi)容和創(chuàng)新點25-27
• 1.4.1 研究背景和內(nèi)容25-26
• 1.4.2 創(chuàng)新點26-27
• 第二章 ATRP法功能化尼龍的制備及表征27-41
• 2.1 引言27-28
• 2.2 實驗部分28-32
• 2.2.1 實驗材料和試劑28-29
• 2.2.2 羧酸甜菜堿甲基丙烯酸酯(CBMA)單體的制備29
• 2.2.3 ATRP法功能化尼龍29-30
• 2.2.4 功能化尼龍血液相容性測試30-31
• 2.2.5 主要方法和儀器31-32
• 2.3 實驗結(jié)果與討論32-40
• 2.3.1 CBMA單體核磁共振結(jié)果32
• 2.3.2 功能化尼龍表面物理和化學(xué)表征結(jié)果32-36
• 2.3.3 功能化尼龍血液相容性測試結(jié)果36-40
• 2.4 本章小結(jié)40-41
• 第三章 功能化尼龍捕獲循環(huán)腫墻細(xì)胞的研究41-50
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實驗部分42-45
• 3.2.1 實驗材料和試劑42-43
• 3.2.2 功能化尼龍表面抗體的接枝43
• 3.2.3 腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)43
• 3.2.4 腫瘤細(xì)胞株免疫組化實驗43-44
• 3.2.5 體外腫瘤細(xì)胞的捕獲44
• 3.2.6 全血中腫瘤細(xì)胞的捕獲44-45
• 3.2.7 實驗儀器及方法45
• 3.3 實驗結(jié)果與討論45-49
• 3.3.1 免疫組化實驗結(jié)果45-46
• 3.3.2 體外腫瘤細(xì)胞捕獲結(jié)果46-47
• 3.3.3 全血中腫瘤細(xì)胞捕獲結(jié)果 巧47-49
• 3.4 本章小結(jié)49-50
• 第四章 KH550法功能化尼龍及其與ATRP法的比較50-60
• 4.1 引言50-54
• 4.2 實驗部分54-55
• 4.2.1 實驗試劑和儀器54
• 4.2.2 定量CBMA接枝數(shù)量54-55
• 4.2.3 定量anti-EpCAM抗體接枝數(shù)量55
• 4.3 實驗結(jié)果與討論55-58
• 4.3.1 CBMA接枝效率定量比較結(jié)果55-57
• 4.3.2 anti-EpCAM抗體接枝定量比較結(jié)果 化57-58
• 4.3.3 CTCs捕獲定量比較結(jié)果58
• 4.4 本章小結(jié)58-60
• 總結(jié)與展望60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 碩士期間發(fā)表的論文及專利68-69
• 致謝69-71

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李帥;劉曉強(qiáng);;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年06期

2 曹璐;徐文;殷正豐;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離與檢測[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2010年03期

3 董印軍;宋平平;張百江;張為迪;;肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2009年05期

4 周晴接;楊建民;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2010年11期

5 平偉;付向?qū)?;肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2011年06期

6 馬瓊;周勇;裘秀春;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞自激注入的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年06期

7 周長春;范傳波;宋現(xiàn)讓;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測和應(yīng)用[J];分子診斷與治療雜志;2012年01期

8 宋英健;王正;楊林;;肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2012年10期

9 李慧;崔洪霞;程穎;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌中的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2012年11期

10 ;從400多億個血細(xì)胞中揪出1個循環(huán)腫瘤細(xì)胞[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2012年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳倩;崔巍;戈烽;林平;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞和肺癌TNM分期的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 宋彥齡;安源;張薇婷;朱志;俞春東;楊朝勇;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲檢測新方法[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第3分會場摘要集[C];2012年

3 馬麗;文仲光;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其在肺癌患者中的臨床應(yīng)用[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 張品南;許楊揚;楊小敏;;血循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展[A];2008年浙江省病理學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

5 彭佳茜;白林靈;趙瓊;楊延蓮;王琛;;基于多肽的循環(huán)腫瘤細(xì)胞富集與檢測研究[A];中國化學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會摘要集——第35分會：納米生物醫(yī)學(xué)中的化學(xué)問題[C];2014年

6 梅林航;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在乳腺癌中的應(yīng)用[A];2013年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

7 黃士昂;胡艷潔;范靈靈;劉偉;李欣;鄭金娥;賀艷麗;;運用多參數(shù)流式細(xì)胞計數(shù)監(jiān)測乳腺癌Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期病人外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞及對其預(yù)后的評估[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

8 任傳利;韓崇旭;薛小平;朱小平;呂煒;周林;;胰腺癌外周血凋亡循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測和輔助治療敏感性的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

9 陳曉霞;任勝祥;李雪飛;張玲;李瑋;周菲;高廣輝;李帥;周彩存;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌診斷中的作用[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2013年

10 楊卓;付靜軒;王斐;崔巍;;外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特性及其檢測分析的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 江蘇省人民醫(yī)院腫瘤科主任醫(yī)生 殷詠梅;循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測防癌癥復(fù)發(fā)[N];健康報;2012年

2 劉海英;循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有“自激注入”能力[N];科技日報;2009年

3 記者 王雪飛;從400多億個血細(xì)胞中揪出1個循環(huán)腫瘤細(xì)胞[N];健康報;2012年

4 劉海英;“捕蠅紙”型循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測裝置問世[N];科技日報;2009年

5 劉海英;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化基因可用于檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞[N];科技日報;2009年

6 張中橋;EGFR mRNA可用于乳癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測[N];中國醫(yī)藥報;2005年

7 聞?wù)x;美評出年度十大醫(yī)療技術(shù)創(chuàng)新[N];中國醫(yī)藥報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方主亭;肝癌動脈栓塞對循環(huán)腫瘤細(xì)胞的影響及機(jī)制實驗與臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 孫文潔;循環(huán)腫瘤細(xì)胞及功能影像在預(yù)測和評估直腸癌放化療療效方面的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 黃文濤;膽道腫瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及基因組擴(kuò)增[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 秦英剛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞與中、西醫(yī)治療肺癌患者療效及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 劉道永;肝細(xì)胞癌病人外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測和臨床意義[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

6 張玉娟;循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的方法學(xué)建立和改良及在實體瘤中的監(jiān)測應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 于躍;葉酸受體陽性的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可作為新的肺癌輔助診斷標(biāo)志物[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 左國華;肝癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其生物學(xué)特性[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 李世超;循環(huán)腫瘤細(xì)胞評估乳腺癌手術(shù)致微轉(zhuǎn)移風(fēng)險及輔助治療療效的臨床初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

10 柯峰;懸浮陣列技術(shù)檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞預(yù)測乳腺癌早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[D];華中科技大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳志清;結(jié)直腸癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的臨床診療價值研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 宋云飛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞對晚期乳腺癌預(yù)后影響的初步探究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 陰麗媛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞新型檢測方法的建立及其在臨床樣本中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 真德智;非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后輔助治療期間外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞EpCAM表達(dá)水平監(jiān)測的臨床意義[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2015年

5 朱玲;免疫磁珠法富集肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及臨床意義研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張亮;乳腺癌不同表型循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 董超群;羧酸甜菜堿兩性聚合物功能化尼龍導(dǎo)管及其捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究[D];南京大學(xué);2015年

8 高飛飛;食管鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測和臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

9 張俊哲;循環(huán)腫瘤細(xì)胞自動化檢測設(shè)備的研制[D];武漢紡織大學(xué);2014年

10 鄭羅凝;循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離方法的建立和臨床應(yīng)用的探索[D];浙江理工大學(xué);2015年

，

本文編號：1090467