本文關鍵詞：血清exosome中miR-221與胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的相關性研究

  更多相關文章： 胃癌 exosome 微小RNA-221(miR-221) 胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的診斷 腫瘤微環(huán)境

【摘要】：目的:Exosome是由細胞內(nèi)產(chǎn)生的,大小約為30-140nm的膜性小囊泡,其內(nèi)含有各種類型的核酸,蛋白質(zhì),脂類物質(zhì)。Exosome內(nèi)含的miRNA-221與非編碼RNA進行堿基配對可通過信號通路介導促進上皮間質(zhì)化Epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)使腫瘤更易發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此檢測胃癌患者血清exosome內(nèi)miRNA的含量是否能作為生物學指標來判斷胃癌分期和是否轉(zhuǎn)移,從而指導治療。方法:共收集2014年6月至2016年3月入住湖南省腫瘤醫(yī)院胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者血清30份(實驗組)。入組標準為:(1)已通過胃鏡、病理活檢、超聲內(nèi)鏡、CT、B超確診為胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者;(2)未發(fā)現(xiàn)有其它的原發(fā)腫瘤;(3)患者未接受放化療、中藥治療等輔助治療;(4)非胃癌復發(fā)患者。30份未發(fā)生胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的女性患者血清(對照組)。入組標準為:(1)已通過胃鏡活檢、超聲內(nèi)鏡、CT、B超確診為胃癌;(2)未發(fā)現(xiàn)有胃癌的遠處轉(zhuǎn)移;(3)未發(fā)現(xiàn)有其它的原發(fā)腫瘤;(4)患者未接受放化療、中藥治療等輔助治療;(5)非胃癌復發(fā)患者。對抽取的血清樣本于3000g離心15分鐘去除細胞或細胞碎片;將上清轉(zhuǎn)移至另一干凈的滅菌管中,加入適量的ExoQuick TC試劑;上下顛倒離心管,混勻;4℃孵育過夜(至少12小時);室溫或4℃1500g離心30min,管底可見沉淀;去除上清;1500g繼續(xù)離心5min,小心去除上層的液體組分;用100-500ul buffer重懸沉淀。通過western blot檢測CD9、CD63來證實exosome提取成功。TRIzol法來對exsome中5種miRNA(miR-221、miR-376c、miR-744、miR-451、miR-486)進行提取。然后通過PCR實驗來對比試驗組和對照組miRNA含量。結(jié)果:為了探究胃癌卵巢轉(zhuǎn)移與非轉(zhuǎn)移病人血清中exosome的miRNA的表達是否與胃癌卵巢轉(zhuǎn)移呈相關性,我們選取了5種在癌癥病人血清exosome中高表達的miRNA進行檢測,發(fā)現(xiàn)在胃癌卵巢轉(zhuǎn)移病人相比于未發(fā)生胃癌卵巢轉(zhuǎn)移病人血清exosome中miR-221的含量有顯著性差異(P0.01),胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者血清exosome中miR-221的含量呈明顯的高表達,其它exosome中內(nèi)含的miRNA如miR-376c、miR-774、miR-451和miR-486在胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者和非轉(zhuǎn)移病人血清中含量沒有顯著性差異。為了更細致分析地血清exosome中miR-221在不同年齡段胃癌卵巢轉(zhuǎn)移病人的差異性,將胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者按年齡分為20-40歲、40-60歲、60歲以上三組,其中20-40歲組患者相比于其他年齡段患者血清exosome中miR-221呈更高的表達水平。結(jié)論:1.胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者血清exosome中miR-221呈明顯高表達。2.血清exosome中miR-221有作為診斷胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的生物學指標的可能。3.胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者血清exosome中miR-221含量還與年齡相關,20-40歲患者中該指標更高,預示著更明顯的特征。
【關鍵詞】：胃癌 exosome 微小RNA-221(miR-221) 胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的診斷 腫瘤微環(huán)境
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要縮略詞中英文對照索引9-12
• 第1章 緒論12-16
• 1.1 胃癌概述12-13
• 1.2 腫瘤與exosome的關系13
• 1.3 腫瘤與miRNA的關系13-16
• 第2章 材料與方法16-24
• 2.1 實驗標本16-17
• 2.2 抗體與試劑17
• 2.3 主要實驗儀器17
• 2.4 實驗方法17-21
• 2.4.1exosome的提取17-18
• 2.4.2 TRIzol法提RNA18-19
• 2.4.3 定量PCR實驗19-20
• 2.4.4 western blot20-21
• 2.5 統(tǒng)計分析21-24
• 第3章 結(jié)果24-30
• 3.1 通過檢測測CD9和CD63證實exosome提取成功24-25
• 3.2 血清exosome中miRNA和胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的關系25-28
• 3.3 各年齡段胃癌卵巢轉(zhuǎn)移患者血清exosome中miR-221表達水平28-30
• 第4章 討論30-34
• 4.1 Exosome在胃癌中作用30
• 4.2 MiR-221在胃癌中的作用30-32
• 4.3 血清Exosome中miRNA作為診斷胃癌卵巢轉(zhuǎn)移的生物學指標的潛力32-33
• 4.4 展望33-34
• 第5章 結(jié)論34-36
• 參考文獻36-40
• 綜述 Exsome在癌癥診斷與治療中的研究進展40-52
• 參考文獻48-52
• 作者攻讀學位期間的科研成果52-54
• 致謝54

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