本文關鍵詞：抑制Paip1表達對肝癌細胞遷移、增殖影響的研究

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【摘要】：目的:前期我們實驗小組使用芯片技術篩選,通過對肝癌和癌旁肝組織檢測發(fā)現(xiàn)了肝癌中Paip1蛋白表達量是上調的。本研究擬通過應用慢病毒載體介導的RNA干擾技術,使肝癌細胞中Paip1基因的蛋白表達量下調,觀察沉默Paip1基因對肝癌細胞遷移、增殖能力影響,進而探索Paip1基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用。研究方法:1.通過Western Blot方法在蛋白水平檢測Paip1在四種不同人肝癌細胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中和人肝細胞株L02細胞中的表達差異;2.在肝癌Hep G2細胞和SMMC-7721細胞中采用慢病毒介導的RNA干擾技術沉默Paip1基因表達,用倒置熒光顯微鏡下觀察感染效率,通過Western blot方法檢驗沉默效果。并且通過使用嘌呤霉素篩選出慢病毒感染的穩(wěn)定細胞(SMMC-7721-LV-sh-Paip1和HepG2-LV-sh-Paip1,SMMC-7721-sh-eGFP和HepG2-sh-eGFP),通過細胞劃痕愈合實驗、CCK-8實驗觀察Paip1基因沉默后細胞遷移和細胞增殖能力的變化;采用Western blot方法檢測Paip1基因沉默后PDCD4蛋白水平變化。研究結果:1.Paip1蛋白表達水平在人肝癌細胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細胞株L02明顯高(P0.05),我們從中選出兩株肝癌細胞株(HepG2和SMMC-7721)完成接下來的細胞實驗。2.采用慢病毒介導RNAi干擾人肝癌細胞株HepG2和SMMC-7721細胞后,用熒光顯微鏡下觀察GFP表達情況,約90%細胞發(fā)出綠色熒光,感染效率高;Western Blot檢測結果顯示HepG2和SMMC-7721細胞實驗組均能能有效的下調Paip1蛋白水平。3.劃痕24小時后,感染LV-sh-Paip1慢病毒(目的組)的肝癌HepG2細胞的遷移面積變化較陰性對照組小(P0.01);劃痕24小時后,感染LV-sh-Paip1慢病毒(目的組)的肝癌SMMC-7721細胞遷移面積變化較陰性對照組減小(P0.01)。4.感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌HepG2細胞的增殖能力較相應的陰性對照組及空白對照組亦下降(抑制率為48.60%);感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌SMMC-7721細胞的增殖能力較相應的陰性對照組及空白對照組下降(抑制率為52.32%)。5.Western Blot檢測感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌SMMC-7721細胞的PDCD4蛋白相對表達量,與陰性對照組及空白對照組相比有明顯升高(P0.01)。結論:1.Paip1蛋白表達水平在人肝癌細胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細胞株L02明顯高,說明Paip1可能在肝癌中高表達。2.利用RNAi干擾Paip1基因表達后,肝癌Hep G2細胞和SMMC-7721細胞遷移和增殖能力明顯下降。3.沉默Paip1,肝癌細胞SMMC-7721的PDCD4蛋白相對表達量升高,而PDCD4目前被公認為在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中起抑制作用,初步驗證了Paip1可能通過PDCD4發(fā)揮作用。
【關鍵詞】：肝細胞性肝癌 Paip1 PDCD4 遷移 增殖
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-25
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 細胞株、慢病毒13
• 2.1.2 主要材料及試劑13-14
• 2.1.3 主要儀器設備14-15
• 2.1.4 自配試劑15-16
• 2.2 方法16-25
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)相關技術16-19
• 2.2.2 Western blot檢測相應蛋白表達19-22
• 2.2.3 細胞篩選22-23
• 2.2.4 慢病毒篩選23
• 2.2.5 嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細胞株23
• 2.2.6 細胞劃痕愈合實驗檢測遷移能力23-24
• 2.2.7 CCK8檢測細胞的增殖水平變化24
• 2.2.8 統(tǒng)計學方法分析24-25
• 第3章 結果25-31
• 3.1 細胞篩選結果25
• 3.2 慢病毒篩選結果25-27
• 3.2.1 確定MOI值25-26
• 3.2.2 根據(jù)Western blot檢測結果選擇最適合的LV-sh-Paip1慢病毒26-27
• 3.3 嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細胞株結果27-28
• 3.4 CCK8數(shù)據(jù)分析結果28-29
• 3.5 細胞劃痕愈合實驗結果29-30
• 3.6 PDCD4的表達結果30-31
• 第4章 討論31-34
• 第5章 結論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-39
• 攻讀學位期間的研究成果39-40
• 綜述40-46
• 參考文獻45-46

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本文編號：1082313