本文關(guān)鍵詞：生物鐘蛋白Cry1與腫瘤的關(guān)聯(lián)性

  更多相關(guān)文章： 生物鐘蛋白 Cry1 腫瘤

【摘要】：目的:檢測(cè)生物鐘蛋白Cry1在不同腫瘤組織中的表達(dá)并分析其與臨床病理特征的關(guān)系,探討Cry1與不同腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系并篩選出與Cry1表達(dá)高度關(guān)聯(lián)的腫瘤。體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞,檢測(cè)Cry1在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)和亞細(xì)胞定位。通過(guò)分子生物學(xué)手段改變腫瘤細(xì)胞Cry1的表達(dá)水平,檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移的變化,探討Cry1在該腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:(1)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)10種腫瘤(282例標(biāo)本)中Cry1的表達(dá),分析Cry1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系,篩選出與Cry1表達(dá)高度關(guān)聯(lián)的腫瘤組織。(2)培養(yǎng)正常腎小管上皮細(xì)胞HK-2和腎癌細(xì)胞786-0,分別提取細(xì)胞中的總RNA和總蛋白,Real time PCR和Western blot檢測(cè)Cry1在不同細(xì)胞中的表達(dá)水平;構(gòu)建Cry1真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Cry1,采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞786-0,轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞,Real time PCR和Western blot法檢測(cè)786-0細(xì)胞中Cry1的表達(dá),鑒定pcDNA3.1(+)-Cry1的功能;CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化,劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移的變化。(3)培養(yǎng)正常人胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和胃癌細(xì)胞BGC-823,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)Cry1在GES-1和BGC-823細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位;核質(zhì)分離試劑盒分別提取GES-1和BGC-823細(xì)胞中的胞質(zhì)蛋白和核蛋白,Western blot檢測(cè)Cry1在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的表達(dá)量。結(jié)果:第一部分:(1)生物鐘蛋白Cry1在腎癌和宮頸癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度低于癌旁組織,兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㩳0.05);食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、甲狀腺癌、乳腺癌等8種腫瘤的癌組織和癌旁組織之間,cry1表達(dá)強(qiáng)度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05)。(2)cry1在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá),在多數(shù)腫瘤的癌旁組織中,cry1主要以細(xì)胞核表達(dá)為主,但在食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、肺癌、乳腺癌和宮頸癌等7種癌組織中,cry1的胞質(zhì)表達(dá)水平較癌旁組織顯著上升(p㩳0.05);在食管癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、肺癌、腎癌、宮頸癌等6種癌組織中,cry1的核表達(dá)水平較癌旁組織顯著下降(p㩳0.05);肝癌、胰腺癌和腎癌的癌組織和癌旁組織中,cry1的亞細(xì)胞定位在兩者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p㧐0.05),其中在肝癌的癌組織和癌旁組織中,cry1胞質(zhì)表達(dá)的比例均較高。(3)cry1在10種腫瘤組織中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位與患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、tnm分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等臨床病理特征均無(wú)相關(guān)性(p㧐0.05)。第二部分:(1)realtimepcr結(jié)果顯示,cry1在腎癌細(xì)胞786-0,正常腎小管上皮細(xì)胞hk-2中均有表達(dá),與正常對(duì)照hk-2細(xì)胞相比,cry1的轉(zhuǎn)錄水平在786-0細(xì)胞中偏低。westernblot檢測(cè)結(jié)果表明cry1蛋白水平與基因轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果基本一致。(2)使用構(gòu)建的真核表達(dá)載體pcdna3.1(+)-cry1以及對(duì)照空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染786-0細(xì)胞,48h后收集細(xì)胞,pcr結(jié)果顯示,與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染pcdna3.1(+)-cry1的786-0細(xì)胞中cry1mrna的表達(dá)水平增加近45倍。(3)轉(zhuǎn)染48h后,分別進(jìn)行細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞凋亡和遷移能力的檢測(cè),結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染pcdna3.1(+)-cry1的786-0細(xì)胞與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力無(wú)明顯改變。第三部分:(1)通過(guò)細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在胃癌細(xì)胞BGC-823中,Cry1在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá),而在正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1中,Cry1主要表達(dá)在細(xì)胞核,胞質(zhì)表達(dá)水平極低。(2)分別提取BGC-823細(xì)胞、GES-1細(xì)胞的核蛋白和胞質(zhì)蛋白進(jìn)行Western blot檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果與細(xì)胞免疫熒光結(jié)果基本一致。結(jié)論:1在腎癌和宮頸癌組織中,Cry1的表達(dá)低于癌旁組織,提示Cry1與腎癌和宮頸癌的發(fā)生呈負(fù)相關(guān),可能對(duì)腎癌和宮頸癌具有抑制作用。2在食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、肺癌、乳腺癌和宮頸癌等7種癌組織中,Cry1表達(dá)的亞細(xì)胞定位發(fā)生改變,提示Cry1的亞細(xì)胞定位發(fā)生改變可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)聯(lián)。3增加Cry1的表達(dá)對(duì)于腎癌細(xì)胞786-0的增殖、凋亡和遷移等生物學(xué)行為無(wú)明顯作用,提示Cry1可能與一些腫瘤相關(guān)蛋白共同作用對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。
【關(guān)鍵詞】：生物鐘蛋白 Cry1 腫瘤
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-9
• 中文摘要9-12
• Abstract12-16
• 前言16-18
• 第一部分：生物鐘蛋白Cry1在不同腫瘤中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系18-55
• 材料與方法18-21
• 1 材料與試劑18
• 2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器18-19
• 3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟19-21
• 結(jié)果21-46
• 討論46-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 第二部分：生物鐘蛋白Cry1在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響55-91
• 材料與方法55-79
• 1 材料與試劑55-59
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器59-60
• 3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟60-79
• 結(jié)果79-86
• 討論86-89
• 結(jié)論89-90
• 參考文獻(xiàn)90-91
• 第三部分：生物鐘蛋白Cry1在胃癌細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位研究91-101
• 材料與方法91-95
• 1 材料與試劑91
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器91-92
• 3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟92-95
• 結(jié)果95-97
• 討論97-99
• 結(jié)論99-100
• 參考文獻(xiàn)100-101
• 技術(shù)路線101-102
• 綜述102-111
• 參考文獻(xiàn)107-111
• 作者簡(jiǎn)介（學(xué)習(xí)及工作經(jīng)歷、讀研期間主要成果）111-112
• 致謝112

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉海軍;生物鐘蛋白Cry1與腫瘤的關(guān)聯(lián)性[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：1081686