本文關(guān)鍵詞：華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)炎性刺激下A549細(xì)胞增殖的抑制效果及其相關(guān)作用機(jī)制研究

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究華蟾素注射液(cinobufacini injection,CI)聯(lián)合吡咯烷二硫基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbama,PDTC)對(duì)炎性刺激下A549細(xì)胞的增殖及LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中炎癥因子的抑制效果,并探討其與NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)作用機(jī)制。為華蟾素注射液聯(lián)合PDTC防治炎癥促進(jìn)肺癌的惡化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制效果:接種A549細(xì)胞孵育貼壁,設(shè)對(duì)照組,PDTC組,華蟾素注射液組,聯(lián)合組,加藥作用24h、48h后,用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率。2.華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞存活率的影響:接種RAW264.7細(xì)胞孵育貼壁,設(shè)對(duì)照組,LPS刺激組,LPS刺激PDTC組,LPS刺激華蟾素注射液組,LPS刺激聯(lián)合組,各處理組用脂多糖刺激2h,加藥作用24h后,用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率。3.華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)炎癥因子的抑制效果:將RAW264.7細(xì)胞接種于12孔板,分組加LPS誘導(dǎo)2h,藥物孵育24h后,取上清液,用一氧化氮試劑盒檢測(cè)NO的含量,ELISA試劑盒檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。4.華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)炎性刺激下A549細(xì)胞增殖的抑制效果:接種A549細(xì)胞孵育貼壁,設(shè)對(duì)照組,炎性刺激組,炎性刺激PDTC組,炎性刺激華蟾素注射液組,炎性刺激聯(lián)合組,并設(shè)立非炎性刺激組做對(duì)比,炎性刺激組加入LPS刺激RAW264.7細(xì)胞上清培養(yǎng)基,藥物組分別加入上清培養(yǎng)基或正常培養(yǎng)基配制的藥物,孵育48h后,用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率。5.NF-κB p65與細(xì)胞核共定位:將RAW264.7細(xì)胞接種于cofocal小皿,分組加藥處理24h后,在激光共聚焦顯微鏡下觀察nf-κbp65與細(xì)胞核定位情況。6.華蟾素注射液聯(lián)合pdtc抑制iκb-α的降解:將raw264.7細(xì)胞接種于6孔板,分組加藥孵育24h后,收集細(xì)胞,提取蛋白,用westernblot檢測(cè)iκb-α蛋白的表達(dá)。結(jié)果:cck-8結(jié)果顯示,華蟾素注射液及pdtc對(duì)a549細(xì)胞的增殖均有抑制效果,兩者聯(lián)合使用后,抑制作用更強(qiáng)(p0.05)。lps、華蟾素注射液及pdtc對(duì)raw264.7細(xì)胞存活率沒有影響(p0.05)。消炎效果顯示,raw264.7細(xì)胞加lps刺激后,各炎癥因子的含量明顯增加(p0.05),華蟾素注射與pdtc對(duì)no、tnf-α、il-6、il-1β均有不同程度的抑制效果,聯(lián)合使用后,抑制作用總體上高于單藥組。在炎性刺激下能促進(jìn)a549細(xì)胞的增殖(p0.05),華蟾素注射液聯(lián)合pdtc對(duì)炎性刺激下a549細(xì)胞增殖的抑制效果仍高于單藥組(p0.05)。激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示,經(jīng)lps刺激后,raw264.7細(xì)胞中nf-κbp65的核位移明顯增多,華蟾素注射液與pdtc均能抑制nf-κbp65的核位移,聯(lián)合用藥后抑制效果更明顯。westernblot結(jié)果顯示,lps能夠促進(jìn)raw264.7細(xì)胞中iκb-α的降解(p0.05),經(jīng)華蟾素注射液與pdtc處理后,iκb-α的降解減少,聯(lián)合作用后能夠提高對(duì)iκb-α降解的抑制效果(p0.05)。結(jié)論:(1)華蟾素注射液聯(lián)合pdtc能有效抑制lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞中no、tnf-α、il-6、il-1β的分泌,其對(duì)炎癥因子的抑制效果總體上高于單藥組。(2)炎性刺激下能促進(jìn)a549細(xì)胞的增殖,華蟾素注射液聯(lián)合pdtc能有效抑制炎性刺激下及非炎性刺激下a549細(xì)胞的增殖,其抑制效果高于單藥組。(3)華蟾素注射液聯(lián)合pdtc抑制炎性刺激下a549細(xì)胞增殖的作用機(jī)制可能為通過(guò)減少lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞中iκb-α的降解,從而抑制nf-κb的核位移,使nf-κb不能進(jìn)入細(xì)胞核與no、tnf-α、il-6、il-1β相關(guān)基因結(jié)合并轉(zhuǎn)錄,減少了這些炎癥因子的分泌,進(jìn)而降低了炎性刺激對(duì)A549細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 華蟾素注射液 PDTC 炎癥 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 引言11-13
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法13-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞13
• 1.2 藥物、試劑、儀器及耗材13-15
• 1.3 試驗(yàn)方法15-22
• 1.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 2 結(jié)果23-31
• 2.1 PDTC對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用23
• 2.2 華蟾素注射液對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用23-24
• 2.3 華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用24-25
• 2.4 華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)LPS刺激RAW264.7 細(xì)胞存活率的影響25-26
• 2.5 華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)炎癥因子的抑制效果26-27
• 2.6 華蟾素注射液聯(lián)合PDTC對(duì)炎性刺激和非炎性刺激下A549細(xì)胞增殖的影響27-28
• 2.7 NF-κB p65與細(xì)胞核共定位28-29
• 2.8 華蟾素注射液聯(lián)合PDTC抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞中IκB-α 的降解29-31
• 3 討論和分析31-66
• 3.1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肺癌的認(rèn)識(shí)31
• 3.2 肺癌的組織病理學(xué)分類31
• 3.3 肺癌的治療31-36
• 3.4 炎癥與腫瘤的關(guān)系36-38
• 3.5 炎癥因子與腫瘤的關(guān)系38-42
• 3.6 NF-κB通路42-48
• 3.7 NF-κB抑制劑48-56
• 3.8 結(jié)果分析56-64
• 3.9 存在問題和展望64-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-82
• 縮略詞表82-83
• 綜述 NF-κB通路在肺部炎癥-腫瘤中的作用及其抑制藥物研究進(jìn)展83-96
• 參考文獻(xiàn)91-96
• 致謝96-97
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間獲得的科研成果97

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1 陳秀珍;華蟾素注射液治療晚期腫瘤300例[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2005年02期

2 邱炳力;董桂蘭;;華蟾素注射液治療晚期惡性腫瘤60例臨床分析[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2010年32期

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7 陳U，

本文編號(hào)：1081421