發(fā)布時間：2017-10-22 22:21

  本文關鍵詞：卵泡刺激素受體（FSHR）作為抗腫瘤治療分子靶標的研究

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【摘要】：【研究背景】卵泡刺激素受體(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)是由垂體分泌的性激素,屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族的跨膜糖蛋白,具有促進排卵和精子的生成作用。最近研究發(fā)現(xiàn),FSHR高表達于多種腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞表面,但在腫瘤相近的正常組織和炎癥組織中都不表達。這提示FSHR是一種潛在的腫瘤標志物。因此獲得抗FSHR的特異抗體具有診斷和治療價值。駱駝免疫系統(tǒng)中存在一種獨特的天然缺失輕鏈的重鏈抗體(heavy chain antibodies,HCAb),與常規(guī)抗體相比,具有穩(wěn)定性強,易制備,弱免疫源性等特點,其可變區(qū)的特殊結構特征及生化特性賦予其更多的優(yōu)勢,有可能作為新一代抗體藥物研發(fā)的候選分子�！狙芯磕康摹揩@得抗FSHR駱駝多克隆抗體,采用該抗體對小鼠腫瘤進行抗腫瘤治療,以探討FSHR作為抗體藥物作用靶標的有效性�！狙芯糠椒ā縄PTG誘導原核表達BL21-p ET-30a-fshr234及親和層析柱純化FSHR234重組蛋白,使用重組蛋白對新疆雙峰駝進行肌肉免疫。采集少量免疫前后的駱駝外周血樣,利用間接ELISA檢測抗FSHR抗體的血清效價。當抗體效價達到或超過1:1×104時,從駱駝頸靜脈采集300 m L血液,分離抗FSHR抗血清,并通過流式細胞術和Western Blot檢測其與抗原的結合活性。免疫組化實驗檢測小鼠腫瘤中FSHR的表達情況。并培養(yǎng)CT-26腫瘤細胞,建立Balb/C小鼠CT-26移植瘤模型。注射腫瘤第6天時開始抗FSHR多抗對小鼠治療。將荷瘤小鼠分為PBS(空白組),未免疫駱駝血清(陰性對照組)和駱駝抗FSHR多克隆抗體(實驗組)等3組;每組6只小鼠,每只小鼠按20 mg/kg的劑量(即每只小鼠0.4 mg)進行尾靜脈注射抗體,觀察及檢測抗FSHR多克隆抗體對腫瘤生長及侵襲的抑制作用�！狙芯拷Y果】IPTG誘導原核表達BL21-p ET-30a-fshr234獲得0.227 ug/m L FSHR重組蛋白;使用FSHR重組蛋白免疫新疆雙峰駱駝獲得效價為1:1.3×105的抗FSHR多克隆抗體;Western Blot結果顯示駱駝抗FSHR抗血清與FSHR234重組蛋白可以特異結合;流式細胞術檢測結果表明抗血清可與PC3細胞表面表達的FSHR特異結合;免疫組化檢測結果顯示,小鼠CT26腫瘤組織FSHR表達陽性,FSHR在腫瘤組織中及血管表面表達,即說明可以對Balb/C小鼠進行靶向于FSHR的抗體治療。對荷瘤Balb/C小鼠的抗FSHR多克隆抗體治療結果顯示,抗FSHR多克隆抗體明顯抑制小鼠移植瘤的生長。【研究結論】初步研究表明,抗FSHR的抗體對小鼠腫瘤生長具有一定抑制作用,該作用有可能是通過抑制腫瘤新生血管的形成發(fā)揮效用,確切機制還有待于進一步研究。
【關鍵詞】：卵泡刺激素受體 多克隆抗體 新疆雙峰駝 抗腫瘤治療
【學位授予單位】：新疆大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一部分 文獻綜述9-34
• 腫瘤血管生成治療研究進展9-20
• 文獻16-20
• 抗腫瘤抗體靶向治療研究進展20-34
• 文獻30-34
• 第二部分 實驗部分34-67
• 第一章 駱駝抗卵泡刺激素受體（FSHR)多克隆抗體的制備及檢測34-55
• 摘要34-36
• 1 材料和方法36-38
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 實驗器材36
• 1.1.2 實驗試劑36-37
• 1.1.3 載體37
• 1.1.4 實驗動物37
• 1.2 培養(yǎng)基及溶液配制37-38
• 2 實驗方法38-45
• 2.1 FSHR 234重組抗原蛋白的大量原核誘導表達及純化38-39
• 2.1.1 FSHR 234重組抗原蛋白的大量原核誘導表達38-39
• 2.1.2 FSHR234重組抗原蛋白的純化39
• 2.2 Western Blot檢測FSHR234重組蛋白39-40
• 2.3 Bradford蛋白濃度測定法測定FSHR 234蛋白濃度40
• 2.4 新疆雙峰駝的免疫及血樣采集40-41
• 2.5 間接ELISA檢測抗FSHR多克隆抗體效價41-42
• 2.6 Western Blot檢測駱駝抗FSHR多克隆抗體結合活性42
• 2.7 流式細胞檢測駱駝抗FSHR多克隆抗體結合活性42-43
• 2.8 小鼠腫瘤組織的石蠟包埋及組織切片的制備43-44
• 2.9 免疫組化檢測抗FSHR多克隆抗體結合活性44-45
• 3 實驗結果45-51
• 3.1 FSHR234重組蛋白的誘導表達及純化45-46
• 3.2 Western Blot檢測FSHR234蛋白46-47
• 3.3 純化后重組蛋白FSHR234的濃度測定47
• 3.4 新疆雙峰駝的免疫及抗FSHR多克隆抗體效價的檢測47-49
• 3.5 Western Blot檢測駱駝抗FSHR多克隆抗體結合活性49
• 3.6 流式細胞術檢測駱駝抗FSHR多克隆抗體結合活性49-50
• 3.7 免疫組化檢測CT-26小鼠移植瘤中FSHR表達情況50-51
• 4 討論51-52
• 5 參考文獻52-55
• 第二章 雙峰駝抗FSHR多克隆抗體抗腫瘤靶向治療作用的初步研究55-67
• 摘要55-56
• 1 實驗材料56-58
• 1.1 實驗器材56
• 1.2 實驗動物56
• 1.3 細胞56
• 1.4 試劑及溶液配制56-58
• 2 實驗方法58-61
• 2.1 小鼠結腸癌移植瘤腫瘤模型的建立58-61
• 2.1.1 CT-26細胞的復蘇58
• 2.1.2 CT-26細胞的傳代培養(yǎng)58-59
• 2.1.3 CT-26細胞的計數(shù)59-60
• 2.1.4 CT-26細胞的凍存60
• 2.1.5 CT-26移植瘤腫瘤模型的建立60-61
• 2.1.6 荷瘤Balb/C小鼠的分組61
• 2.1.7 Balb/C小鼠CT-26移植瘤生長情況的觀察及抗腫瘤免疫治療61
• 3 實驗結果61-65
• 3.1 CT-26細胞的培養(yǎng)及動物移植瘤模型的建立61-62
• 3.2 對荷瘤Balb/c小鼠的抗體免疫治療62
• 3.3 抗FSHR多克隆抗體治療對小鼠移植瘤生長影響的觀察62-65
• 4 討論65
• 5 參考文獻65-67
• 結論67
• 展望67-68
• 英文縮略語68-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70
• 參與課題及發(fā)表文章70-71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王理偉;周翡;李琦;;腫瘤藥物靶向治療的最新進展[J];腫瘤;2006年04期

2 夏雪琴;木亞沙爾·買買提拉洪;翟田甜;李江偉;;抗卵泡刺激素受體納米抗體的制備及鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2013年08期

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本文編號：1080360