本文關(guān)鍵詞：蒿甲醚通過(guò)PPARγ信號(hào)通路抑制小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：[目的]：大量研究發(fā)現(xiàn)青蒿素及其衍生物具有抗腫瘤活性,其與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移,凋亡具有密切的關(guān)系,但其具體的抗腫瘤機(jī)制還有很多未知的方面。近年來(lái),研究證實(shí)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPARy)亦與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。為更廣泛的探索青蒿素及其衍生物可能的抗腫瘤機(jī)制,本課題通過(guò)建立Lewis肺癌小鼠模型,探索青蒿素的衍生物蒿甲醚對(duì)小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及抑制侵襲轉(zhuǎn)移的效應(yīng),探討其機(jī)制是否與PPARy通路調(diào)節(jié)NF-κB及Caspase-3的表達(dá),從而抑制腫瘤新生血管生成,促進(jìn)細(xì)胞周期阻滯及腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)。為臨床抗肺癌治療及抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)提供新靶點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。[方法]：1、建立小鼠Lewis肺癌模型：選LLC細(xì)胞及C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌模型,按不同分組給藥,分別為：①NS組(注射生理鹽水90mg/kg)、②ARE組(注射蒿甲醚50mg/kg)、③GW9662組(注射PPARy特異性抑制劑GW96621mg/kg)、④GW9662+ARE聯(lián)合組(先注射GW9662 30mi,再注射ARE,給藥濃度均同前)；GW9662為PPARy的特異性抑制劑,可特異性的阻斷PPARy的表達(dá)。2、觀察各組小鼠的生存狀態(tài)、體重變化、瘤體積變化；3、計(jì)算抑瘤率：腫瘤抑制率=[對(duì)照組瘤重—給藥組瘤重]／[對(duì)照組瘤重]；4、病理學(xué)變化：取各組瘤組織10%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色,光鏡觀察；5、免疫組化：在14天治療結(jié)束后取各組腫瘤組織進(jìn)行免疫組化染色,檢測(cè)各組瘤組織PPARy、NF-κB、caspase-3、CD31、VEGF表達(dá)情況；6、流式細(xì)胞術(shù)：流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組瘤組織細(xì)胞周期及凋亡率。7、RT-PCR法檢測(cè)各組瘤組織中PPARγ、NF-κB、caspase-3 mRNA水平8、western blot法檢測(cè)各組瘤組織中PPARγ、NF-κB、Caspase-3蛋白的表達(dá)水平9、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間資料應(yīng)用單因素方差分析(one way ANOVA)和t檢驗(yàn)。[結(jié)果]：1.(1)ARE組能明顯抑制Lewis肺癌移植瘤的生長(zhǎng)(抑瘤率為64.51%)；(2) ARE+GW9662聯(lián)合組對(duì)Lewis肺癌移植瘤有抑制作用(抑瘤率為45.14%)；(3)GW9662組對(duì)Lewis肺癌移植瘤無(wú)明顯的抑制作用,其瘤組織大小與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2.病理學(xué)改變：各組HE染色均可見(jiàn)形態(tài)各異的腫瘤細(xì)胞,大小不一,細(xì)胞核增大,可見(jiàn)異形核,核膜增厚,核仁肥大,數(shù)目增多,核質(zhì)比率失調(diào),異常核分裂等。NS組及GW9662組除了可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞典型形態(tài)外,瘤體中心還可見(jiàn)明顯的大片出血壞死液化區(qū),壞死區(qū)域內(nèi)腫瘤組織中有明顯的血細(xì)胞浸潤(rùn)。此外生理鹽水組GW9662組均有遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移,生理鹽水組可見(jiàn)明顯的肌肉侵犯,而GW9662組也可見(jiàn)骨骼肌侵犯。ARE組及ARE+GW9662聯(lián)合組未見(jiàn)明顯遠(yuǎn)處侵犯,均可見(jiàn)凋亡的腫瘤細(xì)胞,尤以ARE組明顯；3.免疫組化：ARE組及聯(lián)合組PPARy陽(yáng)性表達(dá)較NS組明顯增加,GW9662組則為陰性；GW9662組NF-κB陽(yáng)性表達(dá)明顯較其它各組高,而ARE組及聯(lián)合組均較NS組降低；GW9662組及NS組CD31陽(yáng)性表達(dá)較聯(lián)合組及ARE組明顯；VEGF在GW9662組及NS組陽(yáng)性表達(dá)明顯較其它兩組高；Caspase-3在各組的陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)意義；4.流式細(xì)胞術(shù)：ARE組及聯(lián)合組均可見(jiàn)G0/G1期比例增加,S期比例減小,細(xì)胞凋亡率均增高。其中ARE組變化最明顯。5. RT-PCR結(jié)果：PPARy mRNA表達(dá)水平：ARE組聯(lián)合組NS組GW9662組；NF-κB mRNA:GW9662組聯(lián)合組NS組ARE組；Caspase-3 mRNA在各組的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6. Western blot結(jié)果:PPARγ蛋白：ARE組聯(lián)合組NS組GW9662組；NF-κB蛋白：GW9662組聯(lián)合組NS組ARE組；各組的Caspase-3蛋白水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)論]：1.ARE可通過(guò)抑制血管生成抑制Lewis肺癌移植瘤的生長(zhǎng)；2.ARE可通過(guò)G0/G1期阻滯,降低S期比例,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡抑制腫瘤組織生長(zhǎng)；3.ARE通過(guò)上調(diào)PPARγ表達(dá),下調(diào)NF-κB抑制Lewis肺癌移植瘤增殖和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：蒿甲醚(ARE) 小鼠Lewis肺癌 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ) Caspase-3 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 主要中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-20
• 材料與方法20-37
• 結(jié)果37-48
• 討論48-53
• 結(jié)論53
• 本課題研究的創(chuàng)新性53
• 本課題進(jìn)一步的研究問(wèn)題53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 綜述59-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 在讀期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67

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