發(fā)布時(shí)間：2017-10-22 10:32

  本文關(guān)鍵詞：光動(dòng)力療法對結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞的殺傷作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:光動(dòng)力療法(photodynamic therapy,PDT)是19世紀(jì)末興起的并在近年發(fā)展起來的一種治療惡性腫瘤的新的輔助方法。氨三乙酸修飾卟啉(5-(4-N,N-diacetoxylphenyl)-10,15,20-tetraphenylporphyrin,DTPP)是一種新型親脂性光敏劑DTPP,腫瘤細(xì)胞比正常靜止細(xì)胞表達(dá)更多的低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor,LDLP),所以親脂性的光敏劑DTPP能夠在腫瘤細(xì)胞上高度聚集,其治療腫瘤的機(jī)理目前報(bào)道較少。關(guān)于DTPP的研究集中在細(xì)胞毒性和細(xì)胞代謝方面,本研究以DTPP為光敏劑,以結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞為模型,研究DTPP-PDT中光敏劑濃度和激光照射能量密度關(guān)系,對細(xì)胞凋亡進(jìn)行觀察,并通過相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的跟蹤,旨在為光動(dòng)力治療結(jié)腸癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:通過MTT法分析不同濃度的光敏劑及光照劑量對人源結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞作用24h后的細(xì)胞存活率;利用DAPI染色觀察細(xì)胞是否出現(xiàn)凋亡;單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)探討不同劑量DTPP-PDT時(shí)結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞DNA斷裂情況;DNA Ladder分析再次檢測DTPP-PDT引起Caco-2細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象;Western Blotting對經(jīng)DTPP-PDT處理過的Caco-2細(xì)胞表達(dá)的增殖蛋白,即增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)進(jìn)行了評估。結(jié)果:經(jīng)過光動(dòng)力對Caco-2細(xì)胞24小時(shí)的作用后,Caco-2細(xì)胞的生存率出現(xiàn)了不同程度的下降;DTPP-PDT后24小時(shí),Caco-2細(xì)胞核凋亡特征越來越明顯,而空白對照組、單純光照組和單純光敏劑組與正常培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)差異不明顯,細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。當(dāng)光敏劑DTPP濃度為10μg/m L,光照時(shí)間1分鐘和2分鐘,光照能量分別為1.2J/cm2和2.4J/cm2時(shí),在熒光顯微鏡下觀察彗星圖像時(shí),可見濃集閃亮的頭部和分散暗淡的尾部,且隨著光動(dòng)力作用增強(qiáng),當(dāng)細(xì)胞損傷效應(yīng)超過其自身DNA修復(fù)時(shí),彗星細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,慧尾逐漸拉長。而空白對照組、單純光照組和單純光敏劑組Caco-2細(xì)胞則無明顯改變。用不同劑量的DTPP-PDT處理Caco-2細(xì)胞24小時(shí)后出現(xiàn)了DNA梯狀條帶。Westernblot分析表明,在DTPP 10ug/ml處理Caco-2細(xì)胞,光照不同時(shí)間后,其PCNA出現(xiàn)了下調(diào)。結(jié)論:當(dāng)我們選擇合適的光敏劑質(zhì)量濃度和光照能量時(shí),DTPP-PDT可以有效的殺傷結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞。這種殺傷作用除了引起細(xì)胞凋亡外,還有介導(dǎo)抑制Caco-2細(xì)胞的增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：光動(dòng)力治療 結(jié)腸癌 凋亡 增殖 光敏劑
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-11
• 第一部分 光動(dòng)力療法對結(jié)腸癌Caco-2 細(xì)胞的細(xì)胞存活率的影響11-21
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-18
• 討論18
• 小結(jié)18-19
• 參考文獻(xiàn)19-21
• 第二部分 光動(dòng)力療法對結(jié)腸癌Caco-2 細(xì)胞增殖和凋亡的影響21-39
• 材料與方法21-30
• 結(jié)果30-32
• 附圖32-34
• 討論34-36
• 小結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 結(jié)論39-40
• 綜述 結(jié)腸癌和腺瘤性息肉的病生理、臨床表現(xiàn)與診斷40-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡歷69-70

【參考文獻(xiàn)】

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1 程智廣,余翼飛,顧瑛,劉凡光;血卟啉單甲醚-光動(dòng)力學(xué)療法對兔移植靜脈再狹窄的抑制作用[J];中國激光醫(yī)學(xué)雜志;2004年01期

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本文編號：1078017