本文關(guān)鍵詞：miR-192靶向調(diào)控MMP-11對(duì)人骨肉瘤MG63細(xì)胞侵襲及遷移的影響

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【摘要】：背景和目的骨肉瘤是一種起源于原始成骨間充質(zhì)細(xì)胞的惡性腫瘤,是兒童和青少年最主要的原發(fā)性骨腫瘤。手術(shù)和多種藥物化療是本病的標(biāo)準(zhǔn)治療方案,骨肉瘤治療的新進(jìn)展已經(jīng)使患者的預(yù)后得到了顯著改善,但仍有大約40%的患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移,提示了腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性。因此,迫切需要發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)這些患者的預(yù)后,并提供治療方法。微小核糖核酸(miRNA)是小的非編碼單鏈RNA,長(zhǎng)度為19到25個(gè)核苷酸,存在于植物和動(dòng)物的基因組中。miRNA的正常功能包括調(diào)控細(xì)胞分化途徑、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。miRNAs的表達(dá)失調(diào)可能導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)展。最近,在肺癌、膀胱癌、直腸癌、乳腺癌等癌細(xì)胞中,均發(fā)現(xiàn)miR-192表達(dá)下調(diào),且常抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。但是至今未見(jiàn)miR-192在骨肉瘤中的表達(dá)和對(duì)骨肉瘤的影響。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類鋅離子依賴性金屬蛋白酶。MMP-11在胚胎著床,器官發(fā)育,組織退化、修復(fù)等過(guò)程中起作用,同時(shí)還影響許多疾病,如動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和癌癥。原發(fā)腫瘤中高水平的MMP-11與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究miR-192靶向調(diào)節(jié)MMP-11蛋白對(duì)骨肉瘤侵襲和遷移的影響,了解miR-192、MMP-11與骨肉瘤之間的關(guān)系,從而為骨肉瘤的診斷和基因靶向治療提供依據(jù)。方法1.從臨床上收集了20例骨肉瘤患者的骨肉瘤組織及匹配的癌旁組織。對(duì)組織中miR-192及MMP-11基因的m RNA表達(dá)采用q RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。此外,采用Western blot實(shí)驗(yàn)對(duì)組織中MMP-11蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。2.用脂質(zhì)體將合成的miR-192 mimics和negative control轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG63細(xì)胞中。根據(jù)轉(zhuǎn)染物質(zhì)的不同,將細(xì)胞分成三組。miR-192組:轉(zhuǎn)染miR-192mimics和脂質(zhì)體;NC組:轉(zhuǎn)染miR-192 negative control和脂質(zhì)體;Blank組:僅轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞置于二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng),用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.對(duì)三組細(xì)胞進(jìn)行劃痕,觀察miR-192對(duì)MG63細(xì)胞遷移的影響。4.對(duì)三組細(xì)胞進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn),觀察miR-192對(duì)MG63細(xì)胞侵襲的影響。5.對(duì)miR-192的作用靶標(biāo)進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè),將miR-192 mimics或者negative control分別與構(gòu)建的MMP-11的3’UTR區(qū)的野生型及突變型重組報(bào)告基因載體,共轉(zhuǎn)染入骨肉瘤MG63細(xì)胞中,通過(guò)Western blot和雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-192的作用靶標(biāo)。結(jié)果1.骨肉瘤組織中miR-192的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織(P0.05),骨肉瘤組織中MMP-11基因的m RNA和蛋白表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P0.05)。2.三組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,miR-192組的miR-192表達(dá)水平明顯高于NC組和Blank組(P0.05),表明轉(zhuǎn)染成功。3.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與NC組和Blank組相比,miR-192組骨肉瘤MG63細(xì)胞的遷移能力明顯下降。4.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與NC組和Blank組相比,miR-192組穿過(guò)基底膜的骨肉瘤MG63細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05)。5.生物信息學(xué)分析軟件軟件預(yù)測(cè)miR-192的作用靶標(biāo)是MMP-11。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和Western blot結(jié)果證明MMP-11是miR-192的作用靶標(biāo),miR-192靶向作用于MMP-11的3’UTR,負(fù)調(diào)控其表達(dá)。結(jié)論1.miR-192的高表達(dá)可有效抑制骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。2.miR-192靶向作用于MMP-11的3’UTR區(qū)并負(fù)向調(diào)控其表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：miR-192 MMP-11 骨肉瘤 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 1 前言12-14
• 2 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 3 實(shí)驗(yàn)方法17-26
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 5 討論34-36
• 6 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述 MICRORNAS在骨與軟組織肉瘤治療中的潛在靶向作用40-67
• 參考文獻(xiàn)56-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷67-68
• 致謝68

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