本文關(guān)鍵詞：α2，8唾液酸轉(zhuǎn)移酶在人慢性粒細(xì)胞白血病多藥耐藥性中的作用

  更多相關(guān)文章： α2 8唾液酸轉(zhuǎn)移酶 慢性粒細(xì)胞白血病 多藥耐藥 PI3K/Akt信號通路

【摘要】：目的：人慢性粒細(xì)胞白血病白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是一種骨髓異常增生的惡性腫瘤,約占成人白血病的20%,但其發(fā)病機制仍未明確。由于與患者配型相合的造血干細(xì)胞短缺,故在臨床上化療成為了CML治療的首選方法。然而臨床數(shù)據(jù)顯示,大多的CML患者對化療藥物都有一定的耐藥性,阻礙了對CML的治療。隨著科學(xué)家們對糖蛋白、糖組學(xué)的深入研究,越來越多的學(xué)者將更多的目光投入到腫瘤與糖基化的研究。近年來的研究表明,唾液酸糖基化修飾與腫瘤及其耐藥有著密切的聯(lián)系,但引起腫瘤發(fā)生發(fā)展及耐藥的機制也尚未明確。a2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶(a2,8-sialyltransferase)作為唾液酸轉(zhuǎn)移酶家族中的一員,與白血病的發(fā)生及耐藥有著密切的聯(lián)系,但引起CML耐藥的機制還尚未報道。本文通過研究6種a2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶在三對人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株及CML患者外周血單個核細(xì)胞中的差異表達(dá),找出α2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶與人CML多藥耐藥的潛在聯(lián)系,從而為診斷、治療人慢性粒細(xì)胞白血病多藥耐藥提供新的策略和靶點。方法：(1)通過實時熒光定量PCR技術(shù)(real-time PCR, RT-PCR)定量檢測三對人CML細(xì)胞株及CML患者外周血單個核細(xì)胞中α2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)情況。(2)在三對人CML細(xì)胞株中,采用干擾和過表達(dá)技術(shù)特異性下調(diào)或上調(diào)差異表達(dá)3倍以上的α2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因,用RT-PCR、免疫蛋白印跡法分別檢測干擾或過表達(dá)前后K562/ADR、K562細(xì)胞內(nèi)基因和蛋白水平的變化,以及PI3K/Akt信號通路主要分子的表達(dá)情況,MTT法進(jìn)行體外藥敏分析,體內(nèi)抗瘤實驗以及免疫組化分析檢測白血病裸鼠模型對抗腫瘤藥物敏感性分析,用流式分析檢測P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表達(dá)情況。(3)用LY294002抑制P13K/Akt信號通路中P13K分子的表達(dá),Akt shRNA干擾Akt的表達(dá)量,分別用上述方法分別檢測抑制前后K562/ADR細(xì)胞在體內(nèi)、外對化療藥物敏感性的變化以及P-gp的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)在三對人CML細(xì)胞株中,只有ST8SIA4和ST8SIA6的表達(dá)差異在3倍以上,具有顯著差異(P0.05),其余4種a2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因無顯著差異或不表達(dá)。而在CML患者外周血單個核細(xì)胞中,也有相同的結(jié)果。(2)特異性下調(diào)K562/ADR細(xì)胞中ST8SIA4、上調(diào)K562/ADR細(xì)胞中ST8SIA6時,該細(xì)胞的藥物敏感性增強(P0.05)；特異性上調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA4、下調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA6時,該細(xì)胞的藥物敏感性減弱(P0.05)。(3)特異性下調(diào)K562/ADR細(xì)胞中ST8SIA4, PI3K/Akt信號通路分子、P-gp表達(dá)降低(P0.05)；特異性上調(diào)K562細(xì)胞中ST8SIA4, PI3K/Akt主要信號通路分子、P-gp表達(dá)增加(P0.05)。(4) K562/ADR細(xì)胞經(jīng)LY294002或Akt shRNA分別作用后,PI3K/Akt信號通路主要分子表達(dá)水平降低,P-gp表達(dá)量也降低(P0.05),并且增強了該細(xì)胞對抗腫瘤藥物的敏感性。結(jié)論：(1)在三對人慢性白血病細(xì)胞株及CML耐藥、非耐藥患者外周血單個核細(xì)胞中a2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)具有顯著差異,而這些差異表達(dá)與CML多藥耐藥具有相關(guān)性。(2)a2,8唾液酸轉(zhuǎn)移酶引起CML多藥耐藥的機制很可能是通過ST8SIA4調(diào)控PI3K/Akt信號通路繼而引起P-gp的變化,從而使CML產(chǎn)生耐藥性。
【關(guān)鍵詞】：α2 8唾液酸轉(zhuǎn)移酶 慢性粒細(xì)胞白血病 多藥耐藥 PI3K/Akt信號通路
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.72;R730.43
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-20
• 1. 實驗材料13-15
• 1.1 實驗對象13
• 1.2 主要試劑13-15
• 1.3 主要儀器15
• 2. 實驗方法15-20
• 2.1 患者標(biāo)本15
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.3 RNA提取和Real-time PCR16-17
• 2.4 免疫印跡分析17
• 2.5 RNA干擾分析17
• 2.6 過表達(dá)分析17
• 2.7 體外藥敏分析17-18
• 2.8 體內(nèi)腫瘤對抗腫瘤藥物的敏感分析18
• 2.9 免疫組化分析18-19
• 2.10 抑制PI3K/Akt信號通路19
• 2.11 流式分析19
• 2.12 統(tǒng)計分析19-20
• 結(jié)果20-33
• 1. ST8SIA基因在三對人CML及耐藥細(xì)胞株和CML患者中的差異表達(dá)20-21
• 2. 特異性下調(diào)或上調(diào)ST8SIA4的表達(dá)對CML細(xì)胞體內(nèi)外藥敏性的影響21-25
• 3. 特異性下調(diào)或上調(diào)ST8SIA6的表達(dá)對CML細(xì)胞體內(nèi)外藥敏性的影響25-28
• 4. ST8SIA4對PI3K/Akt信號通路的激活以及對P-gp表達(dá)的影響28-30
• 5. 抑制PI3K/Akt信號通路對K562/ADR細(xì)胞體內(nèi)外藥敏性的影響30-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述41-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況51-52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 譚健;;測定腫瘤療效的兩種酶——唾液酸轉(zhuǎn)移酶和核苷二磷酸酶[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1984年20期

2 盧大用,張明堅,梁罡,胥彬;高壓液相層析法研究正常鼠與荷瘤鼠血清中唾液酸含量差異及幾種藥物的影響[J];科學(xué)通報;1994年10期

3 田小蘭,王家，

本文編號：1075171