本文關(guān)鍵詞：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78對肝癌細(xì)胞增殖、自噬及體外血管生成的影響

  更多相關(guān)文章： 肝癌 GRP78 細(xì)胞增殖 自噬 腫瘤血管生成

【摘要】：目的:本研究旨在探討GRP78si RNA干擾GRP78表達(dá)對體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞株增殖、自噬和體外血管生成的影響及其作用機(jī)制,為探索有效抗腫瘤和抗腫瘤血管生成藥物提供新靶點(diǎn)與新思路。方法:1.GRP78最佳si RNA篩選:設(shè)計(jì)合成si RNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株MHCC97H,通過Western blot分析篩選出最佳干擾片段;2.實(shí)驗(yàn)分三組,即空白對照組(control group),陰性對照組(si Control group)和實(shí)驗(yàn)組(si GRP78 group);3.MTT法檢測下調(diào)GRP78表達(dá)后肝癌細(xì)胞增殖活力變化;4.流式細(xì)胞儀檢測下調(diào)GRP78表達(dá)后對肝癌細(xì)胞株huh7和SMMC7721細(xì)胞周期分布的影響;5.Western blot分析下調(diào)肝癌細(xì)胞GRP78表達(dá)后各組LC3-Ⅱ、CCND1、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)變化;6.收集轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞培養(yǎng)基上清行體外血管生成實(shí)驗(yàn):HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移檢測GRP78對腫瘤微環(huán)境中血管生成的影響。結(jié)果:1.GRP78si RNA特異性下調(diào)肝癌細(xì)胞GRP78表達(dá);2.下調(diào)GRP78表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞增殖;3.下調(diào)GRP78表達(dá)可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞阻滯在G0/G1期;4.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌細(xì)胞周期蛋白CCND1的表達(dá);5.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá);6.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌細(xì)胞AKT磷酸化水平;7.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著抑制體外血管生成:HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移。結(jié)論:1.GRP78si RNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞能夠特異性下調(diào)GRP78表達(dá),并抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)huh7和SMMC7721細(xì)胞周期阻滯;2.下調(diào)huh7和SMMC7721細(xì)胞GRP78后可能通過影響PI3K/AKT信號通路和Cyclin D1表達(dá),而誘導(dǎo)huh7和SMMC7721細(xì)胞周期阻滯;3.下調(diào)huh7細(xì)胞GRP78后,可顯著抑制細(xì)胞自噬和體外血管生成。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 GRP78 細(xì)胞增殖 自噬 腫瘤血管生成
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料與方法11-26
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 細(xì)胞株11
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器11-12
• 2.1.3 主要試劑和耗材12-13
• 2.2 方法13-26
• 2.2.0 試劑配制13-14
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14-17
• 2.2.3 RNA干擾片段的合成17
• 2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染17-18
• 2.2.5 最佳siGRP78 片段篩選18-19
• 2.2.6 MTT法檢測GRP78 對huh7、SMCC7721 肝癌細(xì)胞生長的影響19-20
• 2.2.7 流式細(xì)胞技術(shù)檢測GRP78 對肝癌細(xì)胞株huh7、SMMC7721 細(xì)胞周期分布的影響20
• 2.2.8 Western blot檢測GRP78 對肝癌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響20-24
• 2.2.9 平板克隆、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測GRP78 對體外血管生成的影響24-25
• 2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 第3章 結(jié)果26-32
• 3.1 GRP78siRNA轉(zhuǎn)染MHCC97H細(xì)胞對GRP78 蛋白表達(dá)的影響26
• 3.2 下調(diào)GRP78 表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞株MHCC97H增殖26-27
• 3.3 下調(diào)GRP78 表達(dá)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株huh7 和SMMC7721 阻滯在G0/G1 期27-29
• 3.4 下調(diào)GRP78 表達(dá)降低肝癌細(xì)胞株huh7 和SMMC7721 細(xì)胞周期蛋白CCND1表達(dá)29
• 3.5 下調(diào)GRP78 表達(dá)對肝癌細(xì)胞株huh7 自噬的影響29-30
• 3.6 下調(diào)GRP78 表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞株huh7 激活PI3K/AKT通路30
• 3.7 下調(diào)GRP78 表達(dá)抑制體外血管生成30-32
• 3.7.1 GRP78 對HUVEC平板克隆形成的影響30
• 3.7.2 GRP78 對HUVEC遷移能力的影響30-32
• 第4章 討論32-38
• 4.1 GRP78 的結(jié)構(gòu)和功能32-33
• 4.2 GRP78 對肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響33-34
• 4.3 GRP78 對肝癌細(xì)胞PI3K/AKT信號通路的影響34-35
• 4.4 GRP78 對肝癌細(xì)胞自噬的影響35-36
• 4.5 GRP78 對腫瘤微環(huán)境中血管生成的影響36-38
• 第5章 結(jié)論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)50-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 馬美娟;李妍;張英梅;閆浩;劉敏;張樂;馬穎;苑健;胡建華;紀(jì)兆樂;張榮慶;李聰葉;王海昌;;不同程度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對巨噬細(xì)胞自噬的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年02期

2 GE Jiao;LIU Yan;LI Qiang;GUO Xia;GU Ling;MA Zhi Gui;ZHU Yi Ping;;Resveratrol Induces Apoptosis and Autophagy in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells by Inhibiting Akt/mTOR and Activating p38-MAPK[J];Biomedical and Environmental Sciences;2013年11期

3 劉友平;嚴(yán)冬梅;陳川寧;段春燕;陳紹坤;李洪;代榮陽;;PI3K/Akt調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對GRP78的誘導(dǎo)[J];中國病理生理雜志;2011年04期

，

本文編號：1073973