本文關(guān)鍵詞：IL-17通過(guò)上皮間皮轉(zhuǎn)化促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究

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【摘要】：研究背景胃癌是臨床常見的惡性腫瘤,2014年全世界大約有700000人死于胃癌,胃癌是導(dǎo)致死亡最多的腫瘤之一,盡管近年來(lái)一些新的治療方法及藥物被開發(fā)并應(yīng)用于臨床,但仍有大于50%的患者在術(shù)后五年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移導(dǎo)致死亡。其復(fù)發(fā)的主要原因目前尚不清楚。IL-17主要是由Th17細(xì)胞的一部分亞群細(xì)胞和中性粒細(xì)胞共同分泌產(chǎn)生的一種促進(jìn)炎癥發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞因子(proinflammatory cytokine)。IL-17主要有155個(gè)氨基酸組成的相對(duì)分子質(zhì)量為(15-22)×103的同型二聚體,N端為信號(hào)多肽。IL-17細(xì)胞因子家族中至少有6個(gè)成員,包括IL-17A亞型、IL-17B亞型、IL-17C亞型、IL-17D亞型、IL-17亞型E(又稱為IL-25)和IL-17F亞型,其中IL-17A亞型是該細(xì)胞家族中的標(biāo)志性細(xì)胞因子(hallmark cytokine)又稱為IL-17或CTLA-8[1-3]。慢性炎癥的種類復(fù)雜、表現(xiàn)形式各異例如炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases)、幽門螺桿菌的感染、乙肝病毒的感染和病源不明的各種前列腺炎均可致部分腫瘤的發(fā)生,稱為炎癥相關(guān)性腫瘤,而在這類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有IL-17表達(dá)增高。在我們前期研究中有部分內(nèi)容關(guān)于IL-17的研究,其在胃癌組織中高表達(dá)IL-17,而且IL-17的表達(dá)程度與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈現(xiàn)顯著正相關(guān),胃癌患者IL-17高表達(dá)在預(yù)后較差的患者中所占比例高,但I(xiàn)L-17是如何影響胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不清楚。有研究認(rèn)為IL-17與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有一定的關(guān)系。腫瘤微環(huán)境是一個(gè)由腫瘤細(xì)胞,基質(zhì)細(xì)胞,免疫細(xì)胞以及眾多細(xì)胞因子組成的復(fù)雜環(huán)境,文獻(xiàn)報(bào)道,腫瘤微環(huán)境中的炎性因子和炎癥介質(zhì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移也發(fā)揮著重要影響。一方面,腫瘤細(xì)胞等能夠通過(guò)激活機(jī)體免疫系統(tǒng),一些炎性因子發(fā)揮著抑制腫瘤的作用;另一方面,炎性因子可以促進(jìn)血管新生,激活某些信號(hào)途徑,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。有研究認(rèn)為,腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移可能與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有聯(lián)系,但在胃癌中IL-17與EMT的關(guān)系尚未闡明。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是一個(gè)上皮細(xì)胞失去上皮特性,同時(shí)獲得間皮特性,并且具有運(yùn)動(dòng)能力的生物學(xué)變化過(guò)程。該過(guò)程的發(fā)生形態(tài)學(xué)的改變,與細(xì)胞的分子水平的變化有關(guān)。最近大量研究證實(shí),上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系,細(xì)胞與細(xì)胞之間粘連的能力降低,細(xì)胞與細(xì)胞的基質(zhì)粘附能力減弱,運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng),但是否是有炎癥因子的作用并未深入研究。現(xiàn)有的研究表明il-17在乳腺癌、前列腺癌中與emt的關(guān)系已部分闡明。這些特征的改變均可為侵襲轉(zhuǎn)移提供條件,鑒于此過(guò)程在侵襲轉(zhuǎn)移的重要作用,闡明上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響因素對(duì)于研究腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有重要意義�；趇l-17在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的重要作用,我們推測(cè)il-17可能影響胃癌侵襲轉(zhuǎn)移能力,促進(jìn)胃癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。在本研究中,我們采用體外細(xì)胞模型,通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、pcr、wb等方法研究il-17對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以的影響。研究方法1.不同濃度il-17對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響選取sgc-7901細(xì)胞以及mgc-803細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。加入終濃度為0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml的il-17。細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí),拍照記錄細(xì)胞在il-17作用下形態(tài)學(xué)的變化。觀察細(xì)胞在形態(tài)學(xué)的變化的程度,選擇形態(tài)學(xué)變化最明顯的濃度進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的影響劃痕實(shí)驗(yàn)方法用來(lái)測(cè)試兩株胃癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力:實(shí)驗(yàn)組加入100ng/ml濃度il-17培養(yǎng)48小時(shí),對(duì)照組加入等量pbs培養(yǎng),進(jìn)行劃痕操作,記錄劃痕寬度。再培養(yǎng)24小時(shí),再次記錄兩組劃痕寬度。3.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的影響transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)方法用來(lái)檢測(cè)兩株胃癌細(xì)胞侵襲能力:選取重懸細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組加入100ng/ml濃度的il-17,對(duì)照組加入等體積pbs,培養(yǎng)48小時(shí)。將細(xì)胞接種到transwell小室上室,下室加入含胎牛血清,再放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。取出transwell小室,洗凈后,固定,染色,計(jì)數(shù)。4.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞n-cadherin、e-cadherin和vimentinmrna表達(dá)的影響real-timepcr實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)用來(lái)檢測(cè)兩株胃癌細(xì)胞mrna表達(dá),實(shí)驗(yàn)組加入100ng/ml濃度的il-17,對(duì)照組加入等體積pbs,培養(yǎng)48小時(shí)。提取細(xì)胞總rna,逆轉(zhuǎn)錄,進(jìn)行檢測(cè)n-cadherin、e-cadherin、vimentin在mrna的表達(dá)。5.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞n-cadherin、e-cadherin和vimentin蛋白表達(dá)的影響westernbolt檢測(cè)法運(yùn)用來(lái)測(cè)定兩株胃癌細(xì)胞蛋白表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)組分別加入100ng/ml濃度的il-17,對(duì)照組加入等體積pbs,培養(yǎng)48小時(shí)。提取細(xì)胞總蛋白,進(jìn)行e-cadherin,n-cadherin,vimentin在蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:1.不同濃度il-17對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響結(jié)果表明:在il-17對(duì)胃癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)影響實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),il-17處理過(guò)后的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,呈濃度依賴性,以100ng/ml的il-17處理過(guò)后,24小時(shí)對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響最大,可以觀察到細(xì)胞間粘附降低,細(xì)胞由多角形態(tài)變成梭型,部分細(xì)胞變圓,甚至呈懸浮狀態(tài)。2.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響結(jié)果表明:sgc-7901胃癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組劃痕寬度0.41±0.09mm,對(duì)照組劃痕寬度0.71±0.09mm,(p=0.0188)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力顯著強(qiáng)于對(duì)照組。mgc-803胃癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組劃痕寬度0.40±0.15mm,對(duì)照組劃痕寬度0.76±0.13mm,(p=0.0364)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力顯著強(qiáng)于對(duì)照組。3.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的影響結(jié)果表明:sgc-7901胃癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組穿膜細(xì)胞數(shù)170±15個(gè),對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)131±14個(gè),(p=0.0331)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞侵襲能力顯著強(qiáng)于對(duì)照組。mgc-803胃癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組穿膜細(xì)胞數(shù)159±28個(gè),對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)94±18個(gè),(p=0.0297)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞侵襲能力顯著強(qiáng)于對(duì)照組。4.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞n-cadherin、e-cadherin和vimentinmrna表達(dá)的影響結(jié)果表明:sgc-7901胃癌細(xì)胞e-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組0.81±0.14,對(duì)照組0.97±0.16,(p=0.0222);n-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.16±0.12,對(duì)照組0.71±0.13,(p=0.014);vimentinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.51±0.22,對(duì)照組0.81±0.13,(p=0.0096)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞e-cadherin表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組,n-cadherin和vimentin表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。mgc-803胃癌細(xì)胞e-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組0.45±0.13,對(duì)照組1.06±0.23,(p=0.0189);n-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.36±0.20,對(duì)照組0.89±0.13,(p=0.0289);vimentinmrna相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.51±0.22,對(duì)照組1.23±0.41(p=0.0431)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞e-cadherin表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組,n-cadherin和vimentin表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。5.il-17對(duì)胃癌細(xì)胞n-cadherin、e-cadherin和vimentin蛋白水平的影響結(jié)果表明:SGC-7901胃癌細(xì)胞E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.08±0.37,對(duì)照組1.82±0.22,(P=0.0418);N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.42±0.22,對(duì)照組0.84±0.16,(P=0.0209);Vimentin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.65±0.27,對(duì)照組0.95±0.10(P=0.0146)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組,N-cadherin和Vimentin表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。MGC-803胃癌細(xì)胞E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組0.86±0.17,對(duì)照組1.56±0.29,(P=0.0238);N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.41±0.35,對(duì)照組0.77±0.15,(P=0.0441);Vimentin蛋白相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組1.01±0.12,對(duì)照組0.56±0.17,(P=0.0227)。兩組間比較有顯著差異,實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組,N-cadherin和Vimentin表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。結(jié)論:1.IL-17可以顯著改變胃癌細(xì)胞的形態(tài),以及顯著增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。2.IL-17可以顯著降低胃癌細(xì)胞上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)水平,以及顯著增強(qiáng)間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin的表達(dá)水平,從而增加胃癌細(xì)胞上皮間皮轉(zhuǎn)換。3.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是IL-17促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 EMT IL-17 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 英文縮寫詞簡(jiǎn)表5-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-15
• 第一章 前言15-17
• 第二章 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響17-31
• 2.1 引言17
• 2.2 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響17-22
• 2.2.1 材料與方法17-19
• 2.2.2 結(jié)果19-22
• 2.3 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響22-26
• 2.3.1 材料與方法22-23
• 2.3.2 結(jié)果23-26
• 2.4 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的影響26-30
• 2.4.1 材料與方法26-28
• 2.4.2 結(jié)果28-30
• 2.5 討論30
• 2.6 小結(jié)30-31
• 第三章 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響31-47
• 3.1 引言31
• 3.2 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞N-cadherin、E-cadherin和Vimentin mRNA表達(dá)的影響31-37
• 3.2.1 材料與方法31-35
• 3.2.2 結(jié)果35-37
• 3.3 IL-17對(duì)胃癌細(xì)胞N-cadherin、E-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)的影響37-44
• 3.3.1 材料與方法37-41
• 3.3.2 結(jié)果41-44
• 3.4 討論44-46
• 3.5 小結(jié)46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 文獻(xiàn)綜述IL-17在腫瘤微環(huán)境中作用的研究進(jìn)展52-63
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果63-64
• 致謝64

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5 王振嶺;抗癌藥抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)研究獲重要發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

6 王振嶺;7種抗癌藥體外抑制胃癌細(xì)胞的研究有新發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

7 張中橋;胃癌細(xì)胞MDR機(jī)制研究取得新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

8 吳一福 蘇玉軍;白藜蘆醇可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞脫落凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李雙玲;IGF-1通過(guò)抑制Fox01核保留促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 胡偉國(guó);腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中Thy-1激活誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 周韻斕;應(yīng)激條件下胃癌細(xì)胞高表達(dá)線粒體活性氧和前梯度蛋白2促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 巨大維;白細(xì)胞介素8在胃癌細(xì)胞侵襲中的作用及消痰散結(jié)方的干預(yù)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 董召剛;瘦素對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

6 蔡愛珍;乙酰肝素酶調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞功能及其基因表達(dá)譜變化研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

7 宋舟;Sonic hedgehog信號(hào)通路在干樣胃癌細(xì)胞中的作用[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

8 李明;兩個(gè)新胃癌細(xì)胞表面分子標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)及鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

9 劉天舒;骨橋蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲以及對(duì)化療藥物敏感性的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

10 趙貴君;溶血磷脂酸對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖遷移作用及其信號(hào)通路[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林光錟;CyclinA/CDK2介導(dǎo)BAG3 Ser291位點(diǎn)的磷酸化并影響胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 蔡洙哲;p12-LOX對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-28的增殖和遷移的影響[D];延邊大學(xué);2015年

3 李龍;Her-2高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2015年

4 趙婷婷;GPIbα對(duì)胃癌細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制的初步探討[D];蘭州大學(xué);2015年

5 謝瑞霞;盤狀結(jié)構(gòu)域受體1調(diào)控上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響胃癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 王東倉(cāng);NM23-H2通過(guò)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞的侵襲遷移[D];蘭州大學(xué);2015年

7 朱瑞雪;NDRG2基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性表型的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

8 董凱楠;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 單爭(zhēng)爭(zhēng);二甲雙胍在IL-6誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

10 田莉;NM23-H2通過(guò)誘導(dǎo)自噬抑制胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生[D];蘭州大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1064218