發(fā)布時間：2017-10-19 18:24

  本文關鍵詞：胃泌素高表達型大腸癌中microRNAs差異表達的研究

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【摘要】：目的:探討差異表達的miRNA在胃泌素促進大腸癌細胞中作用機制,并分析在大腸癌治療中可能存在的臨床意義。方法:應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對各標本中GAS的含量進行檢測,得到43例標本中胃泌素的濃度,從中選取胃泌素表達陽性的癌組織、癌旁組織以及胃泌素表達陰性的癌組織、癌旁組織標本各1例,選擇丹麥Exiqon公司生產(chǎn)的第六代芯片技術對所選取的的癌組織標本進行miRNA芯片掃描,得到熒光強度圖片,再利用掃描儀配套的GenePix pro V6.0熒光信號處理軟件對原始數(shù)據(jù)進行分析運算,將所得結果進行比較,篩選出具有明顯差異的miRNA,最后在所得到的表達差異的miRNA中選取明顯上調(diào)表達和下調(diào)表達的miRNA各3例進行實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(real time PCR)驗證。結果:本課題組前期利用ELISA法對標本GAS含量測得的結果如下:GAS含量在50.00pg/g以上的9例,200.00pg/g以上的2例,分別為226.10、202.20pg/g;50.00到200.00pg/g之間的有7例,分別為178.85、156.10、122.85、118.70、93.95、76.55、51.65pg/g;其余34例未測得GAS含量。利用miRNA基因芯片對各組標本進行檢測,差異表達在3倍以上的miRNA作為納入標準,其中胃泌素表達陽性的癌組織與癌旁組織比較,上調(diào)表達的有349個,下調(diào)表達的為108個,胃泌素表達陰性的癌組織與癌旁組織比較,上調(diào)表達的有212個,下調(diào)表達的為61個。胃泌素表達陽性與陰性的癌組織差異基因中,上調(diào)表達的有159個,下調(diào)表達的基因有77個,胃泌素表達陽性、陰性的癌組織中差異基因與胃泌素表達陽性、陰性的癌旁組織的差異基因相比較,最終得出的差異miRNA,上調(diào)的22個,下調(diào)的有12個。從中分別選取明顯上調(diào)表達和下調(diào)表達的miRNA各三個,運用Real-time PCR技術驗證。Real-time PCR得到的表達強度通過與內(nèi)參進行比較和轉(zhuǎn)換,所得到的熒光定量PCR結果與芯片分析結果基本一致。結論:1、胃泌素表達陽性大腸癌中存在差異的miRNAs。2、發(fā)現(xiàn)了以前尚未報道過的miRNAs,可能在胃泌素表達陽性的大腸癌中發(fā)揮著重要作用。
【關鍵詞】：大腸癌 胃泌素 miRNAs
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-16
• 內(nèi)容與方法16-27
• 1.研究內(nèi)容16-17
• 1.1 總體思路16
• 1.2 技術路線16-17
• 2. 材料與方法17-27
• 2.1 標本來源17-18
• 2.2 主要試劑、藥品、實驗器材18-20
• 2.3 試驗方法和步驟20-27
• 2.3.1 實驗準備工作20-21
• 2.3.2 標本采集21
• 2.3.3 總RNA的提取21-22
• 2.3.4 標本RNA的質(zhì)量控制22-23
• 2.3.5 RNA樣本的熒光標記23
• 2.3.6 miRNA芯片雜交23-24
• 2.3.7 miRNA序列掃描及分析24-25
• 2.3.8 實時定量PCR驗證25-27
• 結果27-37
• 1.標本情況27
• 2.樣本RNA純度及質(zhì)量檢測27-28
• 3.芯片掃描結果28-35
• 4.數(shù)據(jù)分析35-36
• 5.實時定量PCR驗證結果36-37
• 討論37-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-57
• 綜述57-74
• 參考文獻67-74
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果74-75
• 致謝75-76

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱峰;胃泌素在惡性腫瘤中的作用機制[J];中國腫瘤;2003年10期

2 鄭芝田,王征英,李瓊芳,金敬善,王廣才,金雁,張丹,韓桂欣,王鳳蘭;胃液中胃泌素的測定[J];新醫(yī)學;1982年05期

3 孫以方;;促胃泌素對胃癌的影響[J];蘭州醫(yī)學院學報;1984年02期

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本文編號：1062650