本文關(guān)鍵詞：胃泌素高表達(dá)型大腸癌中microRNAs差異表達(dá)的研究

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【摘要】：目的:探討差異表達(dá)的miRNA在胃泌素促進(jìn)大腸癌細(xì)胞中作用機(jī)制,并分析在大腸癌治療中可能存在的臨床意義。方法:應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)各標(biāo)本中GAS的含量進(jìn)行檢測,得到43例標(biāo)本中胃泌素的濃度,從中選取胃泌素表達(dá)陽性的癌組織、癌旁組織以及胃泌素表達(dá)陰性的癌組織、癌旁組織標(biāo)本各1例,選擇丹麥Exiqon公司生產(chǎn)的第六代芯片技術(shù)對(duì)所選取的的癌組織標(biāo)本進(jìn)行miRNA芯片掃描,得到熒光強(qiáng)度圖片,再利用掃描儀配套的GenePix pro V6.0熒光信號(hào)處理軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析運(yùn)算,將所得結(jié)果進(jìn)行比較,篩選出具有明顯差異的miRNA,最后在所得到的表達(dá)差異的miRNA中選取明顯上調(diào)表達(dá)和下調(diào)表達(dá)的miRNA各3例進(jìn)行實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(real time PCR)驗(yàn)證。結(jié)果:本課題組前期利用ELISA法對(duì)標(biāo)本GAS含量測得的結(jié)果如下:GAS含量在50.00pg/g以上的9例,200.00pg/g以上的2例,分別為226.10、202.20pg/g;50.00到200.00pg/g之間的有7例,分別為178.85、156.10、122.85、118.70、93.95、76.55、51.65pg/g;其余34例未測得GAS含量。利用miRNA基因芯片對(duì)各組標(biāo)本進(jìn)行檢測,差異表達(dá)在3倍以上的miRNA作為納入標(biāo)準(zhǔn),其中胃泌素表達(dá)陽性的癌組織與癌旁組織比較,上調(diào)表達(dá)的有349個(gè),下調(diào)表達(dá)的為108個(gè),胃泌素表達(dá)陰性的癌組織與癌旁組織比較,上調(diào)表達(dá)的有212個(gè),下調(diào)表達(dá)的為61個(gè)。胃泌素表達(dá)陽性與陰性的癌組織差異基因中,上調(diào)表達(dá)的有159個(gè),下調(diào)表達(dá)的基因有77個(gè),胃泌素表達(dá)陽性、陰性的癌組織中差異基因與胃泌素表達(dá)陽性、陰性的癌旁組織的差異基因相比較,最終得出的差異miRNA,上調(diào)的22個(gè),下調(diào)的有12個(gè)。從中分別選取明顯上調(diào)表達(dá)和下調(diào)表達(dá)的miRNA各三個(gè),運(yùn)用Real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證。Real-time PCR得到的表達(dá)強(qiáng)度通過與內(nèi)參進(jìn)行比較和轉(zhuǎn)換,所得到的熒光定量PCR結(jié)果與芯片分析結(jié)果基本一致。結(jié)論:1、胃泌素表達(dá)陽性大腸癌中存在差異的miRNAs。2、發(fā)現(xiàn)了以前尚未報(bào)道過的miRNAs,可能在胃泌素表達(dá)陽性的大腸癌中發(fā)揮著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：大腸癌 胃泌素 miRNAs
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-16
• 內(nèi)容與方法16-27
• 1.研究內(nèi)容16-17
• 1.1 總體思路16
• 1.2 技術(shù)路線16-17
• 2. 材料與方法17-27
• 2.1 標(biāo)本來源17-18
• 2.2 主要試劑、藥品、實(shí)驗(yàn)器材18-20
• 2.3 試驗(yàn)方法和步驟20-27
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作20-21
• 2.3.2 標(biāo)本采集21
• 2.3.3 總RNA的提取21-22
• 2.3.4 標(biāo)本RNA的質(zhì)量控制22-23
• 2.3.5 RNA樣本的熒光標(biāo)記23
• 2.3.6 miRNA芯片雜交23-24
• 2.3.7 miRNA序列掃描及分析24-25
• 2.3.8 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證25-27
• 結(jié)果27-37
• 1.標(biāo)本情況27
• 2.樣本RNA純度及質(zhì)量檢測27-28
• 3.芯片掃描結(jié)果28-35
• 4.數(shù)據(jù)分析35-36
• 5.實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果36-37
• 討論37-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-57
• 綜述57-74
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果74-75
• 致謝75-76

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1 朱峰;胃泌素在惡性腫瘤中的作用機(jī)制[J];中國腫瘤;2003年10期

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3 孫以方;;促胃泌素對(duì)胃癌的影響[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1984年02期

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本文編號(hào)：1062650