發(fā)布時(shí)間：2017-10-19 19:51

  本文關(guān)鍵詞：靶向輸送microRNA let-7b用于腫瘤的免疫治療研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 腫瘤浸潤(rùn)性樹突狀細(xì)胞 靶向輸送 let-7b 腫瘤免疫療法

【摘要】：惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康,通過(guò)激活自身免疫系統(tǒng)來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞是目前腫瘤治療的研究熱點(diǎn)之一。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,大量的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)腫瘤組織,其中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)和腫瘤浸潤(rùn)性樹突狀細(xì)胞(TIDCs)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,它們?cè)诖龠M(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程中扮演重要的角色。巨噬細(xì)胞可以極化為抗腫瘤作用的M1型和促腫瘤作用的M2型,在腫瘤微環(huán)境的作用下,TAMs傾向于極化為促腫瘤作用的M2型；同時(shí)TIDCs大部分是未成熟的表型,缺乏抗原提呈能力和觸發(fā)免疫反應(yīng)能力。TAMs和TIDCs可以分泌大量生長(zhǎng)因子和免疫抑制細(xì)胞因子,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和參與維持免疫抑制的環(huán)境。因此,通過(guò)靶向輸送藥物至TAMs和TIDCs,促使TAMs由M2表型向M1表型轉(zhuǎn)換及TIDCs的成熟,有可能恢復(fù)其抗腫瘤活性。在本文中,我們構(gòu)建以下的核酸輸送系統(tǒng),該系統(tǒng)由富含甘露糖的陽(yáng)離子化的白芨多糖(cBSP)、對(duì)pH敏感的組胺酸修飾的海藻酸鹽(PHA)和let-7b(命名為let-7bvector)一起組成,在顯酸性的腫瘤微環(huán)境中,可以釋放let-7bcBSP納米復(fù)合物。由于TAMs和TIDCs表面富含甘露糖受體,體外實(shí)驗(yàn)表明,let-7bcBSP可以通過(guò)甘露糖受體介導(dǎo)作用進(jìn)入TAMs和TIDCs中。之前有報(bào)道顯示Iet-7b可作為Toll樣受體7(TLR-7)激動(dòng)劑和白細(xì)胞介素10(IL-10)抑制劑。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,let-7b上調(diào)白細(xì)胞介素12(IL-12)的表達(dá)同時(shí)抑制IL-10的產(chǎn)生；實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)(Q-PCR)結(jié)果顯示,let-7b上調(diào)了M1表面標(biāo)記誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá),下調(diào)了M2表面標(biāo)記精氨酸酶1(Arg-1)和甘露糖受體(MR)的表達(dá)。除了TAMs, TIDCs經(jīng)let-7b處理后,IL-12分泌能力得到提升,IL-10水平下降。流式結(jié)果提示let-b上調(diào)了TIDCs活化表面標(biāo)記(CD40、CD80、CD86和MHC-II),增強(qiáng)了TIDCs刺激T細(xì)胞產(chǎn)生和分泌干擾素γ(IFN-γ)的能力。在4T1乳腺癌小鼠模型中,let-7bvector可以有效抑制腫瘤的生長(zhǎng),延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間,提高小鼠存活率。隨后在體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)中,我們檢測(cè)了let-7b的細(xì)胞定位,結(jié)果發(fā)現(xiàn)let-7b主要聚集在中瘤組織的TAMs和TIDCs中。在let-7bvector給藥后,我們檢測(cè)TAMs和TIDCs狀態(tài),和細(xì)胞結(jié)果一致,let-7bvector可以逆轉(zhuǎn)TAMs的表型以及上調(diào)TIDCs表面成熟標(biāo)志,同時(shí)抑制IL-10的產(chǎn)生和增加了IL-12的表達(dá)。隨后我們檢測(cè)腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞因子的變化,結(jié)果顯示,IL-10、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)量顯著降低,同時(shí)IL-12的表達(dá)量顯著升高。綜上所述,基于TAMs和TIDCs靶向遞送以及l(fā)et-7b的雙重生物功能的給藥策略,可以重塑免疫抑制的腫瘤微環(huán)境,并且在治療腫瘤模型小鼠實(shí)驗(yàn)中取得了良好的治療效果,可能可以為腫瘤免疫療法提供一種有價(jià)值的治療手段。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 腫瘤浸潤(rùn)性樹突狀細(xì)胞 靶向輸送 let-7b 腫瘤免疫療法
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.51
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-34
• 一. TAMs和TIDCs與腫瘤的關(guān)系11-18
• 1.1 巨噬細(xì)胞的功能11-12
• 1.2 TAMs12-15
• 1.2.1 TAMs的表型及特征12-13
• 1.2.2 TAMs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用13-15
• 1.3 TIDCs15-18
• 1.3.1 DCs的功能15-16
• 1.3.2 TIDCs的表型及特征16-17
• 1.3.3 TIDCs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用17-18
• 二. 靶向TAMs與TIDCs治療腫瘤的研究進(jìn)展18-23
• 2.1 靶向TAMs在腫瘤治療中的運(yùn)用18-20
• 2.1.1 通過(guò)控制TAMs的招募18-19
• 2.1.2 促使TAMs由M2型轉(zhuǎn)換成M1型19-20
• 2.1.3 抑制TAMs的存活20
• 2.2 靶向TIDCs在腫瘤治療中的運(yùn)用20-23
• 2.2.1 改善TIDCs的抗原提呈能力21
• 2.2.2 恢復(fù)TIDCs成熟表型21-23
• 三. Let-7b23-27
• 3.1 核酸在治療中的運(yùn)用23-24
• 3.2 let-7家族24
• 3.3 let-7b與腫瘤的關(guān)系24-25
• 3.4 let-7b的作用25-27
• 參考文獻(xiàn)27-34
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分34-59
• 一. 引言34-35
• 二. 實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器35-36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料36
• 三. 實(shí)驗(yàn)方法36-44
• 3.1 陽(yáng)離子化白芨多糖(cBSP)的制造方法36-37
• 3.2 組氨酸修飾海藻酸鹽(Alginate)37
• 3.3 let-7b & vector的制備37
• 3.4 小鼠乳腺癌模型的建立37-38
• 3.5 TAMs的分離38
• 3.6 TIDCs的提取38
• 3.7 let-7b刺激TAMs和TIDCs的能力檢測(cè)38-39
• 3.8 TAMs的表型轉(zhuǎn)換檢測(cè)39
• 3.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)39
• 3.10 let-7b在組織和細(xì)胞分布檢測(cè)39-40
• 3.11 let-7b抗腫瘤能力檢測(cè)40
• 3.12 Q-PCR40-43
• 3.13 免疫熒光和免疫組化43-44
• 3.13.1 免疫熒光43
• 3.13.2 免疫組化43-44
• 四. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-57
• 4.1 體外轉(zhuǎn)染cBSP&let-7b復(fù)合物44-46
• 4.2 let-7b的組織中分布和細(xì)胞定位46-50
• 4.3 Let-7b逆轉(zhuǎn)TAMs表型和恢復(fù)TIDCs免疫功能50-52
• 4.4 let-7b & vector的抗腫瘤活性52-53
• 4.5 體內(nèi)檢測(cè)let-7b & vector給藥后TAMs和TIDCs狀態(tài)53-56
• 4.6 let-7 & vector對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響56-57
• 五. 總結(jié)與討論57-59
• 參考文獻(xiàn)59-60
• 附錄碩士期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

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