本文關(guān)鍵詞：C-myc原癌基因啟動(dòng)區(qū)G-四鏈體DNA序列對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：目的:結(jié)腸癌(colorectal carcinoma)作為消化系統(tǒng)的惡性腫瘤,發(fā)病率之高嚴(yán)重威脅人類健康,研究表明其發(fā)病機(jī)制與癌基因和抑癌基因的表達(dá)失調(diào)有關(guān)。隨著近年來對(duì)抗腫瘤藥物的不斷研發(fā),基因治療已經(jīng)成為一個(gè)研究熱點(diǎn),大量針對(duì)新作用靶點(diǎn)的抗腫瘤基因藥物被逐漸發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于臨床試驗(yàn)中,其中G-四鏈體結(jié)構(gòu)是近年來人們關(guān)注的重點(diǎn)研究對(duì)象之一。G-四鏈體(G-quadruplex)由富含鳥嘌呤的核酸序列旋聚而成,基因啟動(dòng)區(qū)和端粒末端可以形成G-四鏈體結(jié)構(gòu),部分小分子藥物可以結(jié)合和穩(wěn)定G-四鏈體結(jié)構(gòu),抑制相關(guān)癌基因表達(dá)和端粒酶活性從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。原癌基因c-myc啟動(dòng)子區(qū)的核酸超敏元件Ⅲ1(NHEⅢ1也叫Pu27)富含鳥嘌呤可以形成分子內(nèi)G-四鏈體結(jié)構(gòu)從而沉默c-myc基因表達(dá)。富含鳥嘌呤寡核苷酸序列(oligonucleotides with guanosine-rich sequences)可以形成G-四鏈體結(jié)構(gòu),對(duì)于大部分腫瘤細(xì)胞,一些GRO(G-rich oligonucleotide)表現(xiàn)出高效增殖抑制作用的同時(shí)降低了對(duì)正常細(xì)胞的毒性作用,逐漸成為抗腫瘤治療的新型核酸藥物。Pu27序列可以在體外形成G-四鏈體,通過非轉(zhuǎn)染方式進(jìn)入白血病細(xì)胞,穩(wěn)定c-myc基因啟動(dòng)子區(qū)形成的G-四鏈體結(jié)構(gòu),下調(diào)c-myc基因表達(dá)抑制增殖,具有抗核酸酶及無需介導(dǎo)直接進(jìn)入細(xì)胞等其他傳統(tǒng)大分子抗癌藥物(如反義寡核苷酸等)所不具備的優(yōu)點(diǎn)。觀察體外Pu27和突變體Mut Pu27序列對(duì)結(jié)腸粘膜正常上皮細(xì)胞FHC及結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116、SW480、SW620增殖與凋亡的影響;觀察體外Pu27和突變體Mut Pu27序列對(duì)結(jié)腸粘膜正常上皮細(xì)胞FHC及結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116、SW480、SW620原癌基因c-myc表達(dá)的影響;初步研究分析體外Pu27序列抑制腫瘤增殖和基因表達(dá)的可能分子機(jī)制。方法:(1)閱讀文獻(xiàn)并選出核酸類抗癌藥物Pu27序列和特異G堿基突變序列Mut Pu27并合成;(2)以人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116、SW480、SW620和結(jié)腸粘膜正常上皮細(xì)胞FHC為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,寡核苷酸序列Pu27和Mut Pu27以非轉(zhuǎn)染方式進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)揮作用,設(shè)立HCT-116/Pu27組、HCT-116/Mut Pu27組、SW480/Pu27組、SW480/Mut Pu27組、SW620/Pu27組、SW620/Mut Pu27組、FHC/Pu27組和FHC/Mut Pu27組;(3)提取上訴各個(gè)分組細(xì)胞的m RNA和蛋白,熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting技術(shù)檢測(cè)c-myc基因表達(dá)水平;FHIC標(biāo)記Pu27、Mut Pu27序列觀察細(xì)胞的攝取以及在細(xì)胞中的穩(wěn)定情況。結(jié)果:(1)MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明,Pu27序列對(duì)三種不同結(jié)腸癌細(xì)胞有不同程度的抑制增殖作用,其中SW480細(xì)胞組敏感性最高,可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)RT-PCR和Western blotting檢測(cè)表明,Pu27序列下調(diào)c-myc基因表達(dá)水平,三種不同結(jié)腸癌細(xì)胞中SW480細(xì)胞組敏感性最高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Pu27通過非轉(zhuǎn)染途徑在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)入細(xì)胞且一定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定存在于細(xì)胞中。結(jié)論:外源性Pu27寡核苷酸序列通過非轉(zhuǎn)染方式直接進(jìn)入細(xì)胞,與正常上皮細(xì)胞FHC組相比,抑制HCT-116、SW480結(jié)腸癌細(xì)胞的體外增殖并誘導(dǎo)凋亡,下調(diào)c-myc基因表達(dá),其中對(duì)SW480細(xì)胞的作用更為顯著,提供了結(jié)腸癌基因治療的新思路。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 Pu27 c-myc
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-18
• 1.2 研究方法18-27
• 2 結(jié)果27-36
• 2.1 Pu27 在結(jié)腸癌細(xì)胞增殖中的作用27-28
• 2.2 Pu27 對(duì)SW480 細(xì)胞凋亡的影響28-29
• 2.3 Pu27 對(duì)SW480 細(xì)胞周期的影響29-30
• 2.4 Pu27 對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞c-myc基因表達(dá)的作用30-34
• 2.5 Pu27 細(xì)胞攝取率34-36
• 3 討論36-39
• 4 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述42-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 田明月;張秀鳳;潘然;趙長(zhǎng)琦;唐亞林;;原癌基因c-myc啟動(dòng)區(qū)G-四鏈體結(jié)構(gòu)及靶向小分子配體[J];化學(xué)進(jìn)展;2010年05期

2 常天俊;龔紅梅;李衛(wèi)國(guó);;具抗腫瘤活性的G-四鏈體核酸研究進(jìn)展[J];河南理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年05期

3 李燕梅;沈曉燕;;具抑制端粒酶活性的G-四鏈體小分子配體研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2010年01期

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本文編號(hào)：1062050