本文關(guān)鍵詞：C-myc原癌基因啟動區(qū)G-四鏈體DNA序列對結(jié)腸癌細胞增殖的影響

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【摘要】：目的:結(jié)腸癌(colorectal carcinoma)作為消化系統(tǒng)的惡性腫瘤,發(fā)病率之高嚴重威脅人類健康,研究表明其發(fā)病機制與癌基因和抑癌基因的表達失調(diào)有關(guān)。隨著近年來對抗腫瘤藥物的不斷研發(fā),基因治療已經(jīng)成為一個研究熱點,大量針對新作用靶點的抗腫瘤基因藥物被逐漸發(fā)現(xiàn)并應用于臨床試驗中,其中G-四鏈體結(jié)構(gòu)是近年來人們關(guān)注的重點研究對象之一。G-四鏈體(G-quadruplex)由富含鳥嘌呤的核酸序列旋聚而成,基因啟動區(qū)和端粒末端可以形成G-四鏈體結(jié)構(gòu),部分小分子藥物可以結(jié)合和穩(wěn)定G-四鏈體結(jié)構(gòu),抑制相關(guān)癌基因表達和端粒酶活性從而抑制腫瘤生長。原癌基因c-myc啟動子區(qū)的核酸超敏元件Ⅲ1(NHEⅢ1也叫Pu27)富含鳥嘌呤可以形成分子內(nèi)G-四鏈體結(jié)構(gòu)從而沉默c-myc基因表達。富含鳥嘌呤寡核苷酸序列(oligonucleotides with guanosine-rich sequences)可以形成G-四鏈體結(jié)構(gòu),對于大部分腫瘤細胞,一些GRO(G-rich oligonucleotide)表現(xiàn)出高效增殖抑制作用的同時降低了對正常細胞的毒性作用,逐漸成為抗腫瘤治療的新型核酸藥物。Pu27序列可以在體外形成G-四鏈體,通過非轉(zhuǎn)染方式進入白血病細胞,穩(wěn)定c-myc基因啟動子區(qū)形成的G-四鏈體結(jié)構(gòu),下調(diào)c-myc基因表達抑制增殖,具有抗核酸酶及無需介導直接進入細胞等其他傳統(tǒng)大分子抗癌藥物(如反義寡核苷酸等)所不具備的優(yōu)點。觀察體外Pu27和突變體Mut Pu27序列對結(jié)腸粘膜正常上皮細胞FHC及結(jié)腸癌細胞HCT-116、SW480、SW620增殖與凋亡的影響;觀察體外Pu27和突變體Mut Pu27序列對結(jié)腸粘膜正常上皮細胞FHC及結(jié)腸癌細胞HCT-116、SW480、SW620原癌基因c-myc表達的影響;初步研究分析體外Pu27序列抑制腫瘤增殖和基因表達的可能分子機制。方法:(1)閱讀文獻并選出核酸類抗癌藥物Pu27序列和特異G堿基突變序列Mut Pu27并合成;(2)以人結(jié)腸癌細胞株HCT-116、SW480、SW620和結(jié)腸粘膜正常上皮細胞FHC為實驗對象,寡核苷酸序列Pu27和Mut Pu27以非轉(zhuǎn)染方式進入細胞并發(fā)揮作用,設(shè)立HCT-116/Pu27組、HCT-116/Mut Pu27組、SW480/Pu27組、SW480/Mut Pu27組、SW620/Pu27組、SW620/Mut Pu27組、FHC/Pu27組和FHC/Mut Pu27組;(3)提取上訴各個分組細胞的m RNA和蛋白,熒光實時定量PCR和Western blotting技術(shù)檢測c-myc基因表達水平;FHIC標記Pu27、Mut Pu27序列觀察細胞的攝取以及在細胞中的穩(wěn)定情況。結(jié)果:(1)MTT實驗和流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明,Pu27序列對三種不同結(jié)腸癌細胞有不同程度的抑制增殖作用,其中SW480細胞組敏感性最高,可以促進細胞凋亡,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(2)RT-PCR和Western blotting檢測表明,Pu27序列下調(diào)c-myc基因表達水平,三種不同結(jié)腸癌細胞中SW480細胞組敏感性最高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(3)細胞攝取實驗結(jié)果顯示Pu27通過非轉(zhuǎn)染途徑在短時間內(nèi)進入細胞且一定時間內(nèi)穩(wěn)定存在于細胞中。結(jié)論:外源性Pu27寡核苷酸序列通過非轉(zhuǎn)染方式直接進入細胞,與正常上皮細胞FHC組相比,抑制HCT-116、SW480結(jié)腸癌細胞的體外增殖并誘導凋亡,下調(diào)c-myc基因表達,其中對SW480細胞的作用更為顯著,提供了結(jié)腸癌基因治療的新思路。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 Pu27 c-myc
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-27
• 1.1 實驗材料13-18
• 1.2 研究方法18-27
• 2 結(jié)果27-36
• 2.1 Pu27 在結(jié)腸癌細胞增殖中的作用27-28
• 2.2 Pu27 對SW480 細胞凋亡的影響28-29
• 2.3 Pu27 對SW480 細胞周期的影響29-30
• 2.4 Pu27 對結(jié)腸癌細胞c-myc基因表達的作用30-34
• 2.5 Pu27 細胞攝取率34-36
• 3 討論36-39
• 4 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-42
• 綜述42-55
• 參考文獻49-55
• 致謝55-56
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果56-57
• 個人簡歷57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 田明月;張秀鳳;潘然;趙長琦;唐亞林;;原癌基因c-myc啟動區(qū)G-四鏈體結(jié)構(gòu)及靶向小分子配體[J];化學進展;2010年05期

2 常天俊;龔紅梅;李衛(wèi)國;;具抗腫瘤活性的G-四鏈體核酸研究進展[J];河南理工大學學報(自然科學版);2012年05期

3 李燕梅;沈曉燕;;具抑制端粒酶活性的G-四鏈體小分子配體研究進展[J];中國藥理學通報;2010年01期

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本文編號：1062050