本文關鍵詞：納米金、納米銀對腦膠質(zhì)瘤輻射增敏效果的比較研究

  更多相關文章： 納米金 納米銀 輻射增敏 腦膠質(zhì)瘤 凋亡 自噬

【摘要】：背景和目的腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性原發(fā)性腫瘤,也是死亡率最高的十類腫瘤之一。輻射治療是腦膠質(zhì)瘤綜合治療中最重要的治療手段之一,但大部分腦膠質(zhì)瘤細胞對射線不敏感,常規(guī)輻射治療效果不佳。通過提高射線的輻射劑量雖能有效殺死腫瘤細胞,但易對周圍正常組織造成嚴重傷害。因而,如何提高射線對腦膠質(zhì)瘤細胞的殺傷力,依舊是臨床亟待解決的關鍵問題。隨著納米科技的迅速發(fā)展,納米材料作為一種新型輻射增敏劑開辟了腫瘤輻射治療的新篇章。其中,納米金(AuNPs)以其穩(wěn)定的化學性質(zhì)、易于表面修飾、良好的生物相容性以及對射線具有較高的吸收效率等特點,致使其作為腫瘤輻射增敏劑倍受研究者的關注。研究發(fā)現(xiàn)AuNPs輻射增敏的機制主要包括對細胞周期的阻滯以及氧化應激誘導的細胞凋亡、壞死和DNA損傷。AuNPs已在多種射線輻射下不同細胞系和動物模型中證實具有良好的輻射增敏效果,但其是否在臨床常用的兆伏級射線能量下對腦膠質(zhì)瘤細胞具有輻射增敏作用尚不清楚。納米銀(AgNPs)由于其獨特的抗菌、催化及非線性光學等性能,使其在生物醫(yī)藥領域的研究中具有廣闊的應用前景。先前,本課題組在體內(nèi)、外實驗的研究中發(fā)現(xiàn)AgNPs能夠顯著提高射線對腦膠質(zhì)瘤細胞的殺傷作用,隨后又有研究證實AgNPs在其它多種腫瘤細胞系中均具有良好的輻射增敏效果。為了明確這兩種研究最為廣泛的輻射增敏劑在兆伏級射線能量下輻射增敏能力是否存在差異。我們擬制備檸檬酸鹽修飾粒徑相似的AuNPs和AgNPs,以腦膠質(zhì)瘤為研究對象,通過體內(nèi)、外實驗綜合評價和比較等摩爾等質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs對腦膠質(zhì)瘤的輻射增敏效果,并觀察其聯(lián)合輻射對細胞死亡及自噬水平的影響,以期為腦膠質(zhì)瘤高效輻射增敏劑的遴選和應用提供理論和實驗基礎。方法1.材料表征利用檸檬酸鈉還原體系制備粒徑相似的AuNPs和AgNPs,并應用等離子光譜質(zhì)譜儀、透射電子顯微鏡、紫外可見光分析儀及動態(tài)光散射納米粒度分析儀進行表征。2.體外實驗(1)CCK8法檢測等摩爾/質(zhì)量濃度梯度的AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對膠質(zhì)瘤細胞活性的影響；(2)細胞克隆形成實驗檢測等摩爾/質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs對膠質(zhì)瘤細胞輻射敏感性的影響；(3) Annexin V-FITC流式細胞儀檢測等摩爾/質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對膠質(zhì)瘤細胞凋亡的影響；(4) Hoescht-PI雙染檢測等摩爾/質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對膠質(zhì)瘤細胞死亡率的影響；(5)單丹磺酰戊二胺、吖啶橙、LC3II蛋白免疫熒光染色檢測等摩爾/質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對膠質(zhì)瘤細胞自噬水平的影響。3.通過構(gòu)建腦膠質(zhì)瘤原位裸鼠模型,觀察瘤內(nèi)直接注射等摩爾/質(zhì)量濃度的AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對荷瘤鼠生存期的影響。結(jié)果1.利用檸檬酸鈉還原體系成功合成粒徑約為15nm的AuNPs和AgNPs,分散性良好,粒徑均一。2.體外實驗：(1) AuNPs、AgNPs聯(lián)合輻射能夠降低膠質(zhì)瘤細胞的活性,并具有濃度依賴性,AgNPs聯(lián)合輻射對細胞活性的影響較強；(2)等摩爾濃度AgNPs、AuNPs、等質(zhì)量濃度AgNPs對U25l細胞的輻射增敏比分別為1.44、1.23、1.64；(3)在輻射條件下,等摩爾/質(zhì)量濃度的AgNPs較AuNPs能夠顯著增加U251細胞的死亡率和自噬水平,具有統(tǒng)計學差異。3.體內(nèi)實驗結(jié)果顯示,與單純輻射組相比,等摩爾/質(zhì)量濃度的AgNPs和AuNPs聯(lián)合輻射均能有效延長荷瘤鼠的生存期,且前者效果更佳。結(jié)論：在臨床常用的兆伏級能量下,AuNPs和AgNPs對腦膠質(zhì)瘤具有輻射增敏作用；AgNPs聯(lián)合輻射能夠發(fā)揮更優(yōu)的抗瘤效果,可能與其誘導更多的細胞凋亡有關；AgNPs是一種高效的腦膠質(zhì)瘤輻射增敏劑,具有臨床應用潛能。
【關鍵詞】：納米金 納米銀 輻射增敏 腦膠質(zhì)瘤 凋亡 自噬
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 專業(yè)術語注釋表11-12
• 前言12-16
• 1. 研究背景12-14
• 2. 本論文的主要工作14-16
• 文獻綜述16-28
• 參考文獻22-28
• 第1章 納米材料制備及表征28-33
• 1.1 實驗材料與方法28-30
• 1.1.1 主要試劑與材料28
• 1.1.2 主要儀器設備28
• 1.1.3 材料制備及表征28-30
• 1.2 結(jié)果30-32
• 1.2.1 ICP-MS及TEM表征結(jié)果30-31
• 1.2.2 UV-Vis表征結(jié)果31
• 1.2.3 DLS及Zeta電位表征結(jié)果31-32
• 1.3 討論32-33
• 第2章 納米金和納米銀對腦膠質(zhì)瘤細胞輻射增敏效果的體外比較實驗研究33-53
• 2.1 實驗材料與方法33-40
• 2.1.1 主要試劑33
• 2.1.2 主要儀器設備33-34
• 2.1.3 主要試劑配制34
• 2.1.4 細胞及材料34
• 2.1.5 細胞培養(yǎng)34-35
• 2.1.6 細胞輻射條件35
• 2.1.7 細胞透射電子顯微鏡觀察35
• 2.1.8 CCK8比色實驗35-36
• 2.1.9 克隆形成實驗36-37
• 2.1.10 Annexin V-FITC流式檢測細胞的凋亡率37-38
• 2.1.11 Hoechst-PI染色檢測細胞的死亡率38
• 2.1.12 細胞自噬水平的檢測38-40
• 2.1.13 統(tǒng)計方法40
• 2.2 結(jié)果40-50
• 2.2.1 AuNPs和AgNPs胞內(nèi)分布40-41
• 2.2.2 AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對腦膠質(zhì)瘤細胞活性的影響41-42
• 2.2.3 AuNPs和AgNPs對腦膠質(zhì)瘤細胞輻射敏感性的影響42-43
• 2.2.4 AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對腦膠質(zhì)瘤細胞凋亡率的影響43-45
• 2.2.5 AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對腦膠質(zhì)瘤細胞死亡率的影響45-46
• 2.2.6 AuNPs和AgNPs聯(lián)合輻射對細胞自噬水平的影響46-50
• 2.3 討論50-53
• 第3章 納米金和納米銀對腦膠質(zhì)瘤輻射增敏效果的在體比較實驗研究53-59
• 3.1 實驗材料與方法53-54
• 3.1.1 實驗動物及飼養(yǎng)53
• 3.1.2 主要試劑53
• 3.1.3 主要儀器設備53
• 3.1.4 荷U251腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型構(gòu)建53-54
• 3.1.5 實驗分組54
• 3.1.6 H&E染色觀察腦膠質(zhì)瘤細胞組織學狀況54
• 3.1.7 荷瘤鼠生存期觀察54
• 3.1.8 荷瘤鼠體重測量54
• 3.1.9 統(tǒng)計方法54
• 3.2 結(jié)果54-57
• 3.2.0 腦膠質(zhì)瘤H&E染色結(jié)果54-55
• 3.2.1 荷瘤鼠生存末期及腦膠質(zhì)瘤大體觀察55
• 3.2.2 荷瘤鼠生存期統(tǒng)計結(jié)果55-56
• 3.2.3 荷瘤鼠體重觀察結(jié)果56-57
• 3.3 討論57-58
• 3.4 本研究存在不足以及有待進一步研究的問題58-59
• 參考文獻59-66
• 結(jié)論66-67
• 致謝67-68
• 作者簡介68

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