發(fā)布時間：2017-10-17 16:00

  本文關(guān)鍵詞：IL-8促進人乳腺癌細胞EMT的作用及其機制研究

  更多相關(guān)文章： IL-8 乳腺癌 EMT PI3K/AKT Snail C14orf166

【摘要】：目的探討IL-8(interleukin-8)促進人乳腺癌細胞MCF-7,SK-BR-3上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的作用及其相關(guān)機制,初步闡明IL-8在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法1.采用蛋白質(zhì)印記法(western blotting, WB)和半定量PCR(semi-quantitative RT-PCR)檢測人乳腺癌細胞株MCF-7, SK-BR-3, MDA-MB-231內(nèi)IL-8受體CXCRA, CXCRB的表達；采用細胞因子IL-8處理乳腺癌細胞株MCF-7, SK-BR-3, MDA-MB-231,光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學的變化；Western blotting檢測IL-8處理后乳腺癌細胞內(nèi)EMT標志蛋白上皮鈣粘蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)和纖維連接蛋白(Fibronectin)表達的變化。2.IL-8處理人乳腺癌細胞株MCF-7, SK-BR-3后,采用半定量PCR(semi-quantitative RT-PCR),實時熒光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, QRT-PCR)和Western blotting檢測EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail mRNA及蛋白水平的變化。3.采用IL-8下游主要信號通路MAPK/ERK1/2, PI3K/AKT, JAK/STAT3的抑制劑及IL-8處理乳腺癌細胞株MCF-7, Western blotting檢測信號通路抑制劑對乳腺癌細胞EMT標志蛋白表達的影響；采用PI3K/AKT信號通路的抑制劑及IL-8處理乳腺癌細胞株MCF-7,SK-BR-3,劃痕實驗檢測乳腺癌細胞遷移能力的變化,Boyden小室侵襲實驗檢測乳腺癌細胞侵襲能力的變化,同時采用半定量PCR(semi-quantitative RT-PCR)及實時熒光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, QRT-PCR)檢測Snail的mRNA表達變化,采用Western blotting檢測EMT標志蛋白E-cadherin, Vimentin, Fibronectin及Snail蛋白表達水平變化。4.采用免疫共沉淀技術(shù)以富集乳腺癌細胞株SK-BR-3中Snail及與Snail結(jié)合的蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離免疫沉淀復(fù)合物,經(jīng)銀染后將膠按大小大致平均切成三份,送北京華大蛋白公司進行質(zhì)譜(LC-MSMS)檢測。分析質(zhì)譜結(jié)果以篩選與Snail相互作用的蛋白。NCBI數(shù)據(jù)庫查詢篩選出來的蛋白的功能特點并采用網(wǎng)頁軟件PEPSITE檢測其與Snai相互結(jié)合能力的大小。5.采用免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry, IHC)檢測良性乳腺增生、原位乳腺癌及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌臨床標本中IL-8,CXCRB, E-cadherin, Vimentin, Snail, C14orfl66以及TUBA1B表達水平的相關(guān)性。6.建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,瘤內(nèi)注射IL-8,以驗證IL-8對裸鼠乳腺癌生長、肝肺轉(zhuǎn)移的影響,并采用免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry, IHC)檢測IL-8對乳腺癌移植瘤內(nèi)EMT標志蛋白、Snail、C14orfl66以及TUBA1B表達的影響。結(jié)果1.Western blotting及半定量PCR結(jié)果均表明,1型IL-8受體CXCRA、2型IL-8受體CXCRB在乳腺癌細胞株MCF-7均有表達,而SK-BR-3及MDA-MB-231均只表達2型IL-8受體CXCRB;光學顯微鏡下觀察到IL-8可促進MCF-7, SK-BR-3細胞形態(tài)發(fā)生EMT,即細胞形態(tài)變得細長,出現(xiàn)偽足,細胞間粘附性下降而逐漸發(fā)生分離,而MDA-MB-231形態(tài)變化不大；Western blotting結(jié)果表明IL-8可下調(diào)MCF-7, SK-BR-3細胞上皮標志分子E-cadherin的表達,上調(diào)間質(zhì)標志分子Vimentin及Fibronectin的表達,即1L-8可促進乳腺癌細胞株MCF-7, SK-BR-3發(fā)生EMT,而對MDA-MB-231細胞作用不明顯,后續(xù)試驗選擇乳腺癌細胞株MCF-7, SK-BR-3作為研究對象。2.半定量PCR、實時熒光定量PCR和Western blotting結(jié)果均表明,IL-8能顯著上調(diào)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail的mRNA及蛋白水平。3. Western blotting結(jié)果表明,IL-8通過PI3K/AKT信號通路促進乳腺癌細胞EMT的發(fā)生,即對乳腺癌細胞株MCF-7間質(zhì)標志分子Vimentin表達上調(diào)的作用,可被PI3K/AKT信號通路抑制劑阻斷；劃痕實驗及Boyden小室侵襲實驗結(jié)果也表明,IL-8提高乳腺癌細胞遷移及侵襲的能力,可被PI3K/AKT信號通路抑制劑阻斷；IL-8上調(diào)Snail, Vimentin, Fibronectin并下調(diào)E-cadherin的作用也可被PI3K/AKT信號通路抑制劑阻斷。以上結(jié)果均表明IL-8可能是通過激活PI3K/AKT信號通路,從而上調(diào)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達、促進乳腺癌細胞EMT的發(fā)生。4.免疫共沉淀蛋白復(fù)合物經(jīng)SDS-PAGE分離、質(zhì)譜定性檢測膠內(nèi)蛋白質(zhì),結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)C14orfl66和TUBA1B是與Snail相互作用的蛋白,且NCBI數(shù)據(jù)庫查詢到這兩個蛋白與癌癥侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。網(wǎng)頁軟件PEPSITE檢測到C14orfl66和TUBA1B與Snail相互結(jié)合能力較強。采用半定量PCR (semi-quantitative RT-PCR). Western blotting檢測,結(jié)果表明IL-8可上調(diào)C14orfl66和TUBAIB mRNA及蛋白的表達,而PI3K/AKT信號通路抑制劑可阻斷此作用。5.免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry, IHC)檢測結(jié)果表明良性乳腺增生、原位乳腺癌及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌臨床組織標本中IL-8, CXCRB, Vimentin, Snail, C14orfl66以及TUBA1B表達水平依次增高,相反地,上皮標志物E-cadherin表達依次降低。6.裸鼠乳腺癌移植瘤實驗結(jié)果表明,注射細胞因子IL-8處理移植瘤后,與對照組相比,腫瘤體積及質(zhì)量明顯增大；小鼠肝、肺組織轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)增多,且經(jīng)HE染色后發(fā)現(xiàn),IL-8處理組肝肺轉(zhuǎn)移明顯；移植瘤經(jīng)免疫組織化學技術(shù)檢測表明,IL-8處理組Vimentin, Snail, C14orfl66以及TUBA1B表達明顯增高,而E-cadherin表達明顯下降。結(jié)論1.IL-8促進乳腺癌細胞株MCF-7、SK-BR-3 EMT的發(fā)生且上調(diào)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達。2.免疫共沉淀實驗初步表明C14orfl66、TUBA1B與Snail相互作用,IL-8可通過激活PI3K/AKT信號通路促進乳腺癌細胞EMT的發(fā)生、上調(diào)Snail及C14orfl66及TUBAIB的表達。3.發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌臨床組織標本中IL-8、CXCRB、Vimentin、 Snail、C14orfl66以及TUBA1B的表達水平明顯高于原位乳腺癌及良性乳腺增生疾病。IL-8促進裸鼠乳腺癌移植瘤生長,及腫瘤肝肺轉(zhuǎn)移,并上調(diào)瘤內(nèi)Vimentin, Snail、C14orfl66及TUBA1B的表達,下調(diào)E-cadherin的表達。
【關(guān)鍵詞】：IL-8 乳腺癌 EMT PI3K/AKT Snail C14orf166
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-12
• ABSTRACT12-18
• 前言18-20
• 第一部分 IL-8對人乳腺癌細胞EMT及Snail表達的影響20-30
• 1 材料與方法20-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 討論28-30
• 第二部分 IL-8促人乳腺癌細胞EMT及上調(diào)Snail的機制探討30-41
• 1 材料與方法30-32
• 2 結(jié)果32-39
• 3 討論39-41
• 第三部分 IL-8對裸鼠乳腺癌移植瘤侵襲轉(zhuǎn)移的影響41-48
• 1 材料與方法41-43
• 2 結(jié)果43-47
• 3 討論47-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻49-52
• 文獻綜述52-60
• 參考文獻56-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術(shù)論文61

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復(fù)旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙酰化酶抑制劑對乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：1049725