本文關(guān)鍵詞：β-arrestin2通過調(diào)控多藥耐藥基因1（MDR1）的表達(dá)影響乳腺癌多藥耐藥的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： β-arrestin2 乳腺癌 化療 多藥耐藥 MDR1/p-gp

【摘要】：[研究背景]乳腺癌嚴(yán)重威脅著女性的身體健康,化療是其非常有效的治療手段。然而,在乳腺癌臨床化療過程中,逐漸出現(xiàn)的多藥耐藥嚴(yán)重阻礙了化療的成功。多藥耐藥,即腫瘤細(xì)胞對(duì)一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)抗藥性的同時(shí),對(duì)其他結(jié)構(gòu)、作用靶位不同的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生抗藥性。多藥耐藥的機(jī)制非常復(fù)雜,人類多藥耐藥基因1(MDR1)編碼的p-糖蛋白(MDR1/p-gp)的過表達(dá)是其最主要的機(jī)制之一。P-gp是一種鑲嵌于細(xì)胞膜上的泵蛋白,該蛋白過度表達(dá)可以導(dǎo)致化療藥物從腫瘤細(xì)胞中外排增強(qiáng),降低了細(xì)胞內(nèi)有效藥物濃度,從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療藥物表現(xiàn)出抵抗性�，F(xiàn)如今,盡管已開發(fā)了多種針對(duì)MDR1/P-gp的抑制劑及調(diào)節(jié)劑,但其毒性及副作用限制了其臨床應(yīng)用,并未取得非常滿意的治療效果。近年來(lái),基于調(diào)控P-糖蛋白轉(zhuǎn)錄的信號(hào)通路的分子靶向治療,或許可以為逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥帶來(lái)新的希望。β-抑制蛋白,包括β-arrestin2β-arrestin2,是一種廣泛分布在各種組織和細(xì)胞的多功能蛋白,其經(jīng)典的功能是介導(dǎo)G蛋白耦聯(lián)受體(GPCR)的脫敏和內(nèi)吞。此夕,β-arrestin2還可以結(jié)合其他信號(hào)分子,調(diào)節(jié)這些分子的磷酸化、泛素化或者細(xì)胞內(nèi)定位等,從而調(diào)控相應(yīng)的信號(hào)通路。最近很多的研究表明β-arrestin2在很多病理過程中發(fā)揮重要作用,尤其是廣泛參與很多惡性腫瘤的演進(jìn)過程。Mistre Alemayehu等研究發(fā)現(xiàn)β-arrestin2直接調(diào)節(jié)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中LPA誘導(dǎo)的侵襲和遷移過程。Buchanan等也發(fā)現(xiàn)β-arrestin2可以調(diào)節(jié)大鼠結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移過程。此外,在乳腺癌中,β-arrestin2也可以通過caspase-8通路發(fā)揮抗凋亡作用。我們最近的研究發(fā)現(xiàn),β-arrestin2還可能參與調(diào)節(jié)乳腺癌中MDR1/p-gp介導(dǎo)的多藥耐藥。我們發(fā)現(xiàn)在乳腺癌臨床標(biāo)本中β-arrestin2與MDR1/p-gP的表達(dá)密切相關(guān)。同時(shí),我們檢測(cè)了β-arrestin2在乳腺癌敏感細(xì)胞系A(chǔ)DM以及耐藥細(xì)胞系MCF-7和MDA-MB-231中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其在耐藥細(xì)胞中的蛋白和mRNA水平均高于敏感細(xì)胞。因此我們推測(cè)β-arrestin2可能參與乳腺癌的多藥耐藥過程,從而干擾β-arrestin2可以逆轉(zhuǎn)乳腺癌化療過程中出現(xiàn)的多藥耐藥。[研究方法]1.分別用Q-PCR及Western blot的方法檢測(cè)3種乳腺癌細(xì)胞系A(chǔ)DM,MCF-7以及MDA-MB-231中β-arrestin2與MDR1/p-g的表達(dá)情況。2.乳腺癌敏感細(xì)胞MCF-7及MDA-MB-231分別給予濃度為0,1μmol/L, 2.5μmol/L,和5μmol/L的阿霉素作用72h后提取細(xì)胞總蛋白進(jìn)行western blot檢測(cè)β-arrestin2及MDR1蛋白水平表達(dá)的改變。3.收集臨床乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行β-arrestin2與MDR1/p-gp的免疫組化染色,并分析兩者之間的關(guān)聯(lián)性。4.設(shè)計(jì)并合成針對(duì)β-arrestin2基因的雙鏈干擾RNA序列以及非靶向性干擾序列作為陰性對(duì)照,將其定向插入到質(zhì)粒載體pSUPER.neo+GFP中,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)載體pSUPER-sip-arrestin2和pSUPER-siNC;pCDNA3.1-β-arrestin2-GFP全長(zhǎng)表達(dá)載體由美國(guó)東田納西大學(xué)尹德領(lǐng)教授惠贈(zèng)。5.上述質(zhì)粒載體分別轉(zhuǎn)染3種乳腺癌細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)48-72小時(shí)后,分別用Q-PCR和Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中β-arrestin2與MDR1/p-gp在mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況。應(yīng)用MTS法檢測(cè)各組細(xì)胞對(duì)阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、順鉑的半數(shù)細(xì)胞致死量的改變。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]1.對(duì)3種乳腺癌細(xì)胞系檢測(cè)發(fā)現(xiàn)β-arrestin2在耐藥細(xì)胞ADM中無(wú)論mRNA水平還是蛋白水平均較2種敏感細(xì)胞明顯升高,而4DR1/P-gp僅在ADM細(xì)胞中高表達(dá),敏感株中幾乎不表達(dá)。2.MCF-7及MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)阿霉素誘導(dǎo)后通過、檢測(cè)發(fā)現(xiàn),vestem blot的蛋白水平呈濃度依賴性升高。β-arrestin2及MDR13.對(duì)臨床收集的106例乳腺癌樣本,用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)和β-arrestin2的表達(dá),經(jīng)過分析二者M(jìn)DR1/P-gp相關(guān)系數(shù)為0.227,呈低度相關(guān)性且有Pearson顯著意義P=0.016。4.轉(zhuǎn)染48h后,應(yīng)用Q-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中β-arrestin2和MDR1 mRNA水平的表達(dá)情況,結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比,β-arrestin2干擾組的β-arrestin2及MDR1 mRNA水平均明顯降低。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明β-arrestin2干擾組細(xì)胞2種蛋白的表達(dá)水平也明顯降低。5.MTS法檢測(cè)各組乳腺癌細(xì)胞對(duì)4種化療藥物的耐受性,發(fā)現(xiàn)β-arrestin2干擾組細(xì)胞對(duì)阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶和順鉑的半數(shù)細(xì)胞致死量(IC50值)明顯降低,耐藥性被不同程度逆轉(zhuǎn)。[結(jié)論]β-arrestin2與MDR1在乳腺癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)具有一定的相關(guān)性,提示β-arrestin2可能通過調(diào)控MDR1的表達(dá)間接影響乳腺癌的多藥耐藥。干擾或過表達(dá)β-arrestin2可以抑制或促進(jìn)MDR1的表達(dá),從而影響細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性。提示β-arrestin2有可能成為逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：β-arrestin2 乳腺癌 化療 多藥耐藥 MDR1/p-gp
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 第一部分 β-arrestin2和MDR1基因在人體乳腺癌細(xì)胞系及人體乳腺癌組織中的表達(dá)情況13-40
• 前言13-16
• 主要材料16-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-27
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-30
• 討論30-33
• 參考文獻(xiàn)33-40
• 第二部分 乳腺癌耐藥細(xì)胞株轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pSUPER-siβ-arrestin 2通過抑制MDR1的表達(dá)來(lái)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥40-58
• 前言40-41
• 主要材料41-43
• 實(shí)驗(yàn)方法43-47
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-52
• 討論52-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 結(jié)論58-59
• 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)及局限性59-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄61-62
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表62-63
• 附件63-82

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本文編號(hào)：1046136