本文關鍵詞：ONECUT2基因沉默抑制卵巢癌細胞增殖、轉移和血管新生

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【摘要】：目的:ONECUT2(One Cut Homeobox 2,OC-2)是一個新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤細胞增殖、血管新生和轉移相關的轉錄因子,同時,它也與癌細胞的EMT(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)過程密切相關。本文目的在于明確OC-2基因在卵巢癌中出現(xiàn)的異常表達情況,同時,通過siRNA沉默OC-2基因,明確OC-2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制以及對癌細胞增殖、遷移和血管新生的影響。方法:采用實時熒光定量PCR的方法,檢測了OC-2在不同卵巢癌細胞系中的相對表達情況。收集了10例患者卵巢癌組織及2例正常卵巢組織,用免疫組化的方法檢查OC-2蛋白的表達情況。CCK-8實驗檢驗siRNA沉默OC-2基因對卵巢癌細胞增殖的影響。Transwell遷移/侵襲實驗和劃痕實驗檢測siRNA沉默OC-2基因對卵巢癌細胞遷移和侵襲的影響。構建卵巢癌裸鼠模型,檢測si RNA沉默OC-2基因對腫瘤生長和血管新生的影響。結果:1.OC-2在卵巢癌細胞系中存在差異表達,COV-504和SKOV3細胞中OC-2基因m RNA轉錄水平很蛋白翻譯水平都較高。檢測的10例患者卵巢癌組織,其中6例出現(xiàn)OC-2陽性表達,2例正常卵巢組織都呈現(xiàn)OC-2陰性。2.SiRNA對COV-504、SKOV3中OC-2蛋白表達平均抑制率為85%和86%;CCK-8實驗表明siRNA對COV-504、SKOV3細胞的增殖的抑制率平均為11%和10%,抑制率隨時間增高,在48h達到最高;Transwell實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為74%和76%;劃痕實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為87%和88%;侵襲實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3侵襲的抑制率平均為71%和77%;成管實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3誘導內皮細胞成管的抑制率平均為61%和60%;SiRNA對COV-504細胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均為81%和47%,對SKOV3細胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均為91%和95%;用siRNA沉默COV-504細胞中的OC-2基因對N-cadherin的抑制率平均為63%,上調E-cadherin 209%;對SKOV3N-cadherin的抑制率為14%,上調E-cadherin 268%。3.構建的SKOV3細胞裸鼠模型,siRNA沉默OC-2基因對腫瘤質量和腫瘤組織微血管密度的抑制率分別為93%和78%,腫瘤體積顯著小于同時期陰性對照組。結論:OC-2基因在不同卵巢癌細胞株和患者卵巢癌組織中出現(xiàn)差異表達。CCK-8實驗證明siRNA沉默OC-2基因可以抑制卵巢癌細胞的增殖;Transwell實驗和劃痕實驗證明,siRNA沉默OC-2基因抑制卵巢癌細胞遷移;侵襲實驗和成管實驗結果表明,OC-2被抑制后,卵巢癌細胞侵襲和誘導血管新生被顯著抑制;Western Blot實驗證明OC-2可以通過調節(jié)Akt/Erk信號通路而實現(xiàn)調控作用。SiRNA沉默OC-2基因后,卵巢癌細胞均出現(xiàn)N-cadherin的下調和E-cadherin的上調則提示OC-2是一個EMT相關的轉錄因子。SKOV3裸鼠腫瘤模型證明,siRNA處理后的卵巢癌細胞成瘤的體積和腫瘤重量均顯著被抑制,腫瘤組織微血密度也更低�？傊�,siRNA沉默OC-2抑制卵巢癌細胞增殖、遷移和血管新生。
【關鍵詞】：ONECUT2 EMT angiogenesis metastersis
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一部分 前言9-18
• 1. ONECUT2 生物學特性及研究背景9-11
• 2. RNA 干擾11-14
• 3.上皮間充質轉化 (Epithelial mesenchymal Transition，EMT)14-16
• 4. 研究目的及意義16-17
• 5. 技術路線17-18
• 第二部分 實驗材料與方法18-35
• 1. 實驗材料18-22
• 2. 實驗方法22-35
• 第三部分 結果與分析35-54
• 1. OC-2 基因在不同卵巢癌細胞株中的表達35
• 2. OC-2 基因在不同卵巢癌細胞株中蛋白表達的差異35-36
• 3. 患者卵巢癌組織中OC-2 基因的表達36-38
• 4. Si RNA沉默卵巢癌細胞中OC-2 基因的表達38-40
• 5. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細胞的增殖40-41
• 6. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細胞的遷移(Transwell)41-42
• 7. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細胞的侵襲42-44
• 8. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細胞遷移(劃痕實驗)44-46
• 9. 沉默OC-2 基因后卵巢癌培養(yǎng)上清對內皮細胞的成管的影響46-48
• 10. Si RNA沉默OC-2 基因對卵巢癌細胞信號通路的影響48-50
• 11. 沉默OC-2 基因對SKOV3裸鼠模型腫瘤的生長和血管新生的影響50-53
• 12. OC-2 基因在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮具體作用的機制圖53-54
• 第四部分 討論54-56
• 第五部分 小結與展望56-57
• 1. 小結56
• 2. 展望56-57
• 參考文獻57-61
• 中英文縮略詞61-62
• 附錄62-63
• 碩士期間發(fā)表論文情況62
• 碩士期間參加學術活動62-63
• 致謝63

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本文編號：1041685