發(fā)布時(shí)間：2017-10-16 08:28

  本文關(guān)鍵詞：ONECUT2基因沉默抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和血管新生

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【摘要】：目的:ONECUT2(One Cut Homeobox 2,OC-2)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤細(xì)胞增殖、血管新生和轉(zhuǎn)移相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,同時(shí),它也與癌細(xì)胞的EMT(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)過(guò)程密切相關(guān)。本文目的在于明確OC-2基因在卵巢癌中出現(xiàn)的異常表達(dá)情況,同時(shí),通過(guò)siRNA沉默OC-2基因,明確OC-2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制以及對(duì)癌細(xì)胞增殖、遷移和血管新生的影響。方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法,檢測(cè)了OC-2在不同卵巢癌細(xì)胞系中的相對(duì)表達(dá)情況。收集了10例患者卵巢癌組織及2例正常卵巢組織,用免疫組化的方法檢查OC-2蛋白的表達(dá)情況。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)siRNA沉默OC-2基因?qū)β殉舶┘?xì)胞增殖的影響。Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)siRNA沉默OC-2基因?qū)β殉舶┘?xì)胞遷移和侵襲的影響。構(gòu)建卵巢癌裸鼠模型,檢測(cè)si RNA沉默OC-2基因?qū)δ[瘤生長(zhǎng)和血管新生的影響。結(jié)果:1.OC-2在卵巢癌細(xì)胞系中存在差異表達(dá),COV-504和SKOV3細(xì)胞中OC-2基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平很蛋白翻譯水平都較高。檢測(cè)的10例患者卵巢癌組織,其中6例出現(xiàn)OC-2陽(yáng)性表達(dá),2例正常卵巢組織都呈現(xiàn)OC-2陰性。2.SiRNA對(duì)COV-504、SKOV3中OC-2蛋白表達(dá)平均抑制率為85%和86%;CCK-8實(shí)驗(yàn)表明siRNA對(duì)COV-504、SKOV3細(xì)胞的增殖的抑制率平均為11%和10%,抑制率隨時(shí)間增高,在48h達(dá)到最高;Transwell實(shí)驗(yàn)證明siRNA對(duì)COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為74%和76%;劃痕實(shí)驗(yàn)證明siRNA對(duì)COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為87%和88%;侵襲實(shí)驗(yàn)證明siRNA對(duì)COV-504、SKOV3侵襲的抑制率平均為71%和77%;成管實(shí)驗(yàn)證明siRNA對(duì)COV-504、SKOV3誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞成管的抑制率平均為61%和60%;SiRNA對(duì)COV-504細(xì)胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均為81%和47%,對(duì)SKOV3細(xì)胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均為91%和95%;用siRNA沉默COV-504細(xì)胞中的OC-2基因?qū)-cadherin的抑制率平均為63%,上調(diào)E-cadherin 209%;對(duì)SKOV3N-cadherin的抑制率為14%,上調(diào)E-cadherin 268%。3.構(gòu)建的SKOV3細(xì)胞裸鼠模型,siRNA沉默OC-2基因?qū)δ[瘤質(zhì)量和腫瘤組織微血管密度的抑制率分別為93%和78%,腫瘤體積顯著小于同時(shí)期陰性對(duì)照組。結(jié)論:OC-2基因在不同卵巢癌細(xì)胞株和患者卵巢癌組織中出現(xiàn)差異表達(dá)。CCK-8實(shí)驗(yàn)證明siRNA沉默OC-2基因可以抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖;Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)證明,siRNA沉默OC-2基因抑制卵巢癌細(xì)胞遷移;侵襲實(shí)驗(yàn)和成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,OC-2被抑制后,卵巢癌細(xì)胞侵襲和誘導(dǎo)血管新生被顯著抑制;Western Blot實(shí)驗(yàn)證明OC-2可以通過(guò)調(diào)節(jié)Akt/Erk信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)調(diào)控作用。SiRNA沉默OC-2基因后,卵巢癌細(xì)胞均出現(xiàn)N-cadherin的下調(diào)和E-cadherin的上調(diào)則提示OC-2是一個(gè)EMT相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子。SKOV3裸鼠腫瘤模型證明,siRNA處理后的卵巢癌細(xì)胞成瘤的體積和腫瘤重量均顯著被抑制,腫瘤組織微血密度也更低�？傊�,siRNA沉默OC-2抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和血管新生。
【關(guān)鍵詞】：ONECUT2 EMT angiogenesis metastersis
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一部分 前言9-18
• 1. ONECUT2 生物學(xué)特性及研究背景9-11
• 2. RNA 干擾11-14
• 3.上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 (Epithelial mesenchymal Transition，EMT)14-16
• 4. 研究目的及意義16-17
• 5. 技術(shù)路線(xiàn)17-18
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-35
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法22-35
• 第三部分 結(jié)果與分析35-54
• 1. OC-2 基因在不同卵巢癌細(xì)胞株中的表達(dá)35
• 2. OC-2 基因在不同卵巢癌細(xì)胞株中蛋白表達(dá)的差異35-36
• 3. 患者卵巢癌組織中OC-2 基因的表達(dá)36-38
• 4. Si RNA沉默卵巢癌細(xì)胞中OC-2 基因的表達(dá)38-40
• 5. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖40-41
• 6. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移(Transwell)41-42
• 7. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細(xì)胞的侵襲42-44
• 8. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌細(xì)胞遷移(劃痕實(shí)驗(yàn))44-46
• 9. 沉默OC-2 基因后卵巢癌培養(yǎng)上清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的成管的影響46-48
• 10. Si RNA沉默OC-2 基因?qū)β殉舶┘?xì)胞信號(hào)通路的影響48-50
• 11. 沉默OC-2 基因?qū)KOV3裸鼠模型腫瘤的生長(zhǎng)和血管新生的影響50-53
• 12. OC-2 基因在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮具體作用的機(jī)制圖53-54
• 第四部分 討論54-56
• 第五部分 小結(jié)與展望56-57
• 1. 小結(jié)56
• 2. 展望56-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 中英文縮略詞61-62
• 附錄62-63
• 碩士期間發(fā)表論文情況62
• 碩士期間參加學(xué)術(shù)活動(dòng)62-63
• 致謝63

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本文編號(hào)：1041685