本文關(guān)鍵詞：ClC-3上調(diào)P-gp促進(jìn)腫瘤耐藥的研究

  更多相關(guān)文章： ClC-3 P-gp 多藥耐藥 轉(zhuǎn)基因小鼠 腫瘤

【摘要】：目的:研究Cl C-3(voltage-gated chloride channel 3)氯通道蛋白在腫瘤耐藥中的作用,確定其是通過(guò)調(diào)控P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)來(lái)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥,為Cl C-3蛋白功能的研究開(kāi)辟新的方向以及基于逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的腫瘤治療提供理論依據(jù)。方法:①Western blot檢測(cè)人肺腺癌細(xì)胞株A549及其紫杉醇耐藥株A549/T和人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7及其阿霉素耐藥株MCF-7/ADR中Cl C-3蛋白和P-gp的表達(dá)。②A(yíng)549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染Cl C-3小干擾RNA(Si-Cl C-3)抑制Cl C-3的表達(dá),A549和MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染Cl C-3表達(dá)質(zhì)粒(pc DNA3.1/Cl C-3)增強(qiáng)Cl C-3的表達(dá),MTT法檢測(cè)抗癌藥物紫杉醇對(duì)Cl C-3表達(dá)干預(yù)后細(xì)胞增殖的影響。③A549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染Si-Cl C-3,A549和MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染pc DNA3.1/Cl C-3,細(xì)胞免疫熒光結(jié)合激光共聚焦技術(shù)和Western blot檢測(cè)Cl C-3蛋白和P-gp的表達(dá)水平。④A549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染多藥耐藥基因(multi-drug resistance gene 1,MDR1)小干擾RNA(Si-MDR1)抑制P-gp的表達(dá),A549和MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染MDR1表達(dá)質(zhì)粒(pc DNA3.1/MDR1)增強(qiáng)P-gp的表達(dá),細(xì)胞免疫熒光和Western blot檢測(cè)P-gp和Cl C-3蛋白的表達(dá)水平。⑤繁育MMTV-Py MT單轉(zhuǎn)基因小鼠,建立和繁育Cl C-3過(guò)表達(dá)的自發(fā)乳腺腫瘤MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠,給予紫杉醇和阿霉素化療干預(yù);紫杉醇化療方案分為M-N1(單轉(zhuǎn)基因小鼠給予生理鹽水)、M-PTX(單轉(zhuǎn)基因小鼠給予紫杉醇)、MC-N1(雙轉(zhuǎn)基因小鼠給予生理鹽水)和MC-PTX(雙轉(zhuǎn)基因小鼠給予紫杉醇)共4組;阿霉素化療方案分為M-N2(單轉(zhuǎn)基因小鼠給予生理鹽水)、M-ADM(單轉(zhuǎn)基因小鼠給予阿霉素)、MC-N2(雙轉(zhuǎn)基因小鼠給予生理鹽水)和MC-ADM(雙轉(zhuǎn)基因小鼠給予阿霉素)共4組;測(cè)量小鼠體重、腫瘤重量、腫瘤體積和小鼠生存期。⑥實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)腫瘤組織中MDR1和Cl C-3 m RNA的表達(dá);Western blot和免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中P-gp及Cl C-3蛋白的表達(dá)。結(jié)果:①M(fèi)CF-7/ADR與MCF-7相比,A549/T與A549相比,耐藥細(xì)胞株Cl C-3和Pgp的表達(dá)量明顯高于非耐藥細(xì)胞株。②下調(diào)A549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞Cl C-3的表達(dá),紫杉醇對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用明顯增強(qiáng);增強(qiáng)A549和MCF-7細(xì)胞Cl C-3的表達(dá),紫杉醇對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱。③抑制A549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞Cl C-3的表達(dá)引起P-gp的表達(dá)下調(diào);增強(qiáng)A549和MCF-7細(xì)胞Cl C-3的表達(dá)則上調(diào)P-gp的表達(dá)。④抑制A549/T和MCF-7/ADR細(xì)胞MDR1的表達(dá)或增強(qiáng)A549和MCF-7細(xì)胞MDR1的表達(dá)都對(duì)P-gp的表達(dá)水平無(wú)明顯影響。⑤MC-N1和MC-N2組腫瘤體積和重量分別顯著高于M-N1組和M-N2組;MC-PTX組與M-PTX組相比,紫杉醇對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制率降低;MC-ADM組與M-ADM組相比,阿霉素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制率降低;紫杉醇治療可以提高M(jìn)MTV-Py MT單轉(zhuǎn)基因小鼠小鼠生存率,而對(duì)MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠小鼠生存率無(wú)影響。⑥與MMTVPy MT單轉(zhuǎn)基因小鼠相比,MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠MDR1 m RNA和Pgp表達(dá)增加。結(jié)論:腫瘤細(xì)胞中Cl C-3與P-gp的表達(dá)水平呈正相關(guān),Cl C-3在腫瘤細(xì)胞耐藥中起著重要的作用,其介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥與上調(diào)P-gp的表達(dá)有關(guān)
【關(guān)鍵詞】：ClC-3 P-gp 多藥耐藥 轉(zhuǎn)基因小鼠 腫瘤
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-16
• 第一部分ClC-3 參與腫瘤耐藥16-38
• 1 材料16-18
• 1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒及主要試劑16-17
• 1.2 Si-ClC-3 序列17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17-18
• 1.4 主要設(shè)備18
• 2 方法18-25
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 2.2 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中ClC-3 蛋白及P-gp的表達(dá)19-21
• 2.3 體外轉(zhuǎn)染Si-ClC-321
• 2.4 體外轉(zhuǎn)染pc DNA3.1/ClC-3 表達(dá)質(zhì)粒21
• 2.5 MTT法檢測(cè)抗癌藥物紫杉醇對(duì)細(xì)胞增殖的影響21-23
• 2.6 雙轉(zhuǎn)基因乳腺癌小鼠模型的建立23-24
• 2.7 轉(zhuǎn)基因小鼠分組和給藥方案24-25
• 2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-34
• 3.1 ClC-3 蛋白和P-gp在耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)高于非耐藥細(xì)胞25-26
• 3.2 耐藥細(xì)胞ClC-3 表達(dá)抑制可增加細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性、非耐藥細(xì)胞ClC-3表達(dá)增加可降低細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性26-27
• 3.3 各組小鼠及瘤體的生長(zhǎng)情況27-33
• 3.3.1 各組小鼠體重、腫瘤生長(zhǎng)情況及不同時(shí)間點(diǎn)的抑瘤率28-31
• 3.3.2 各組小鼠瘤重、瘤體積、抑瘤率差異31-33
• 3.4 各組小鼠生存期差異33-34
• 4 討論34-38
• 5 小結(jié)38
• 第二部分ClC-3 通過(guò)調(diào)控P-gp介導(dǎo)腫瘤耐藥38-62
• 1 材料39-40
• 1.1 熒光定量PCR引物序列及主要試劑39
• 1.2 Si-ClC-3、Si-MDR1序列39-40
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 2 方法40-46
• 2.1 體外轉(zhuǎn)染Si-ClC-3、Si-MDR140
• 2.2 體外轉(zhuǎn)染pc DNA3.1/ClC-3 表達(dá)質(zhì)粒、pc DNA3.1/MDR1表達(dá)質(zhì)粒40
• 2.3 免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞中ClC-3 蛋白及P-gp的表達(dá)40-41
• 2.4 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中ClC-3 蛋白及P-gp的表達(dá)41-42
• 2.5 Real-Time PCR檢測(cè)腫瘤組織中ClC-3 及MDR1 m RNA的表達(dá)42-44
• 2.6 Western blot檢測(cè)腫瘤組織中ClC-3 及P-gp蛋白的表達(dá)44
• 2.7 瘤體病理組織學(xué)觀(guān)察44
• 2.8 免疫組化檢測(cè)腫瘤組織ClC-3 蛋白及P-gp的表達(dá)44-45
• 2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理45-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-58
• 3.1 耐藥細(xì)胞中ClC-3 表達(dá)抑制可降低P-gp的表達(dá)，，MDR1表達(dá)抑制對(duì)ClC-3 蛋白的表達(dá)無(wú)影響46-48
• 3.2 非耐藥細(xì)胞中ClC-3 表達(dá)增加可提高P-gp的表達(dá)，MDR1表達(dá)增加對(duì)ClC-3蛋白的表達(dá)無(wú)影響48-51
• 3.3 耐藥細(xì)胞ClC-3 表達(dá)抑制可降低P-gp的表達(dá)，非耐藥細(xì)胞ClC-3 表達(dá)增加可提高P-gp的表達(dá)51-52
• 3.4 耐藥細(xì)胞P-gp表達(dá)抑制及非耐藥細(xì)胞P-gp表達(dá)增加對(duì)ClC-3 蛋白的表達(dá)無(wú)影響52-53
• 3.5 MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤組織中MDR1及ClC-3 m RNA的表達(dá)都明顯高于MMTV-Py MT單轉(zhuǎn)基因小鼠53-55
• 3.6 MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤組織中多藥耐藥蛋白P-gp及ClC-3 蛋白的表達(dá)都明顯高于MMTV-Py MT單轉(zhuǎn)基因小鼠55-56
• 3.7 瘤組織病理學(xué)觀(guān)察56-57
• 3.8 MMTV-Py MT/CLCN3雙轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤組織中P-gp及ClC-3 蛋白的表達(dá)都明顯高于MMTV-Py MT單轉(zhuǎn)基因小鼠57-58
• 4 討論58-61
• 5 小結(jié)61-62
• 全文結(jié)論62
• 展望62-63
• References63-71
• 附錄一 碩士期間發(fā)表的論文71-72
• 附錄二 中英文縮寫(xiě)詞對(duì)照表72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1036681