本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-21和PTEN在急性髓系白血病中的表達及臨床意義

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【摘要】：目的:檢測急性髓系白血病(AML)患者骨髓單個核細胞中Micro RNA-21(mi R-21)及抑癌基因PTEN m RNA的表達水平,分析其在AML患者不同病程中的表達特點,并研究mi R-21及PTEN m RNA在AML患者中表達水平的相關(guān)性及各自與AML的不同亞型及相關(guān)臨床特征間的關(guān)系,進而探討其在AML中的臨床意義。方法:1、共收集AML患者骨髓標(biāo)本80例,其中初治患者43例(按FAB分型,M1 5例,M2 16例,M3 7例,M4 5例,M5 7例,M6 3例),難治復(fù)發(fā)患者13例,完全緩解期患者24例。對照組為非惡性血液病患者骨髓20例。2、分離骨髓單個核細胞并提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成c DNA后,采用實時熒光定量PCR方法檢測mi R-21和PTEN m RNA及相關(guān)內(nèi)參的表達得其CT值,用公式2-△Ct計算目的基因mi R-21和PTEN m RNA的相對表達量。3、采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,計量資料呈非正態(tài)分布,用四分位數(shù)描述,在各組間的差異分析采用Mann-Whitney U檢驗,相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)法。檢驗水準(zhǔn)取ɑ=0.05,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意檢驗意義。結(jié)果:1、mi R-21在AML中的表達水平上調(diào),初治組為1.048(0.392~9.24),完全緩解組為0.77(0.12~2.19),難治復(fù)發(fā)組為1.996(0.69~6.902),均高于對照組的表達水平0.487(0.04~2.729),且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);完全緩解組mi R-21的表達量較初治組、難治復(fù)發(fā)組有所下降(P0.05);難治復(fù)發(fā)組mi R-21的表達量高于初治組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2、mi R-21在初治AML各亞型中的表達水平不同:M1為0.6(0.481~1.389),M2為0.635(0.392~3.863),M3為3.399(0.983~9.339),M4為1.087(0.603~4.032),M5為1.226(0.924~8.987);M3、M5型mi R-21表達水平高于M1、M2型(P0.05);其他各亞型間的差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、初治AML患者mi R-21表達水平與骨髓原始細胞比例呈低度正相關(guān),且有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.361,P0.05),未發(fā)現(xiàn)與患者年齡、性別、外周血白細胞數(shù)、血小板計數(shù)、血紅蛋白含量以及染色體預(yù)后分組存在相關(guān)性(P0.05)。4、PTEN m RNA在AML中的表達是下調(diào)的:初治組為0.561(0.003~0.9),完全緩解組為0.716(0.122~0.912),難治復(fù)發(fā)組為0.401(0.012~0.901),對照組為0.912(0.002~1.108);初治組、完全緩解組及難治復(fù)發(fā)組的表達水平均低于對照組,差異有統(tǒng)計意義(P0.05);初治組PTEN m RNA的表達量低于緩解組且有統(tǒng)計意義(P0.05);難治復(fù)發(fā)組PTEN m RNA的表達量低于緩解組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);其余各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5、PTEN m RNA在AML初治組各FAB亞型中的表達水平分別為:M1為0.539(0.120~0.801),M2為0.623(0.003~0.9),M3為0.421(0.120~0.780),M4為0.742(0.237~0.821),M5為0.429(0.002~0.760);各亞型間表達不同但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6、初治AML患者PTEN m RNA表達水平與患者年齡、性別、骨髓原始細胞比例、外周血白細胞數(shù)、血小板計數(shù)、血紅蛋白含量及染色體核型均未發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)性(P0.05)。7、相關(guān)性分析結(jié)果未發(fā)現(xiàn)AML患者骨髓單個核細胞中mi R-21及PTEN m RNA表達水平存在相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:1、mi R-21在AML患者骨髓中普遍過表達,其表達水平與疾病狀態(tài)、FAB分型有關(guān)。2、在AML中,mi R-21的表達水平與患者骨髓原始幼稚細胞比例呈低度正相關(guān)。3、PTEN m RNA在AML中普遍低表達,且表達水平與疾病狀態(tài)有關(guān),而與FAB分型、臨床特征指標(biāo)之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。4、mi R-21和PTEN m RNA的表達水平與AML的染色體預(yù)后之間均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。5、AML患者中mi R-21與PTEN m RNA的表達水平之間未發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：急性髓系白血病 miR-21 PTEN基因 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-23
• 2.1 臨床資料及治療方案13-14
• 2.2 主要儀器14
• 2.3 主要試劑14-15
• 2.4 主要試劑配制15-16
• 2.4.1 磷酸緩沖液（PBS）15
• 2.4.2 0.1%DEPC水15
• 2.4.3 75%乙醇的配制15
• 2.4.4 5×TAE緩沖液的配制15
• 2.4.5 10×紅細胞裂解液配制：15-16
• 2.5 實驗方法16-22
• 2.5.1 標(biāo)本收集16
• 2.5.2 骨髓單個核細胞分離16
• 2.5.3 總RNA的提取16-17
• 2.5.4 RNA質(zhì)量檢測17-18
• 2.5.5 總RNA逆轉(zhuǎn)錄18-20
• 2.5.6 熒光定量PCR引物20
• 2.5.7 實時熒光定量PCR反應(yīng)（qRT-PCR）20-22
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析22-23
• 第3章 結(jié)果23-31
• 3.1 總RNA質(zhì)量檢測23
• 3.2 熒光定量PCR產(chǎn)物分析23-24
• 3.3 miR-21在AML不同疾病狀態(tài)及對照組中的表達24-25
• 3.4 miR-21在初治AML不同F(xiàn)AB亞型中的表達25-26
• 3.5 PTEN mRNA在AML各組及各亞型間的表達26-27
• 3.6 初治患者miR-21、PTEN mRNA表達與特征性指標(biāo)的相關(guān)性27-29
• 3.7 初治AML患者miR-21、PTEN mRNA的表達與年齡、性別及染色體核型的相關(guān)性29-30
• 3.8 miR-21與PTEN mRNA表達水平的相關(guān)性30-31
• 第4章 討論31-39
• 4.1 microRNA簡介31-32
• 4.2 miRNA-21作為癌基因的研究32-33
• 4.3 miRNA-21在AML中的表達及與臨床特征指標(biāo)的相關(guān)性分析33-35
• 4.4 PTEN mRNA在AML中的表達及與臨床特征指標(biāo)的相關(guān)性分析35-37
• 4.5 miR-21與PTEN mRNA在AML中的表達的相關(guān)性分析37-39
• 第5章 結(jié)論與展望39-40
• 5.1 結(jié)論39
• 5.2 展望39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻41-46
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果46-47
• 綜述47-54
• 參考文獻52-54

【參考文獻】

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本文編號：1035167