本文關(guān)鍵詞：抑癌基因miR137在子宮內(nèi)膜癌中高度甲基化及其機制的研究

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【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜癌目前是全球女性常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率都在逐年升高。在西方的一些發(fā)達地區(qū),其發(fā)病率已位于婦科惡性腫瘤的首位。大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌患者可被早期發(fā)現(xiàn),但仍有15%的患者初次診斷時已為中晚期病情,并且中晚期患者的療效均較差。但就目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌研究來看,其具體發(fā)病機制(尤其是具體到基因?qū)用娴臋C制)仍不是十分的明確,因此,通過我們的努力尋找到一個新的治療靶點來治療子宮內(nèi)膜癌是我們需要解決的問題。微小RNA(mi RNA的命名)是一類在腫瘤發(fā)生過程中的新起重要作用的內(nèi)源性非編碼的小分子RNA(18-25個核苷酸),在動、植物中參與基因轉(zhuǎn)錄后的表達調(diào)控,導致m RNA降解或抑制蛋白質(zhì)的翻譯,能誘導發(fā)生轉(zhuǎn)錄后的基因沉默,出演著一個抑癌基因的角色。因此,我們的研究通過分析mi R-137對人子宮內(nèi)膜癌細胞株的影響,探討它作用的可能機制。方法:通過體外實驗培養(yǎng)子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞株HEC1A及AN3CA(EEC,grade 3),EN1078-D(grade 3),and ARK-2(Serous papillary carcinoma,grade 4b)等細胞株,利用焦磷酸測序發(fā)檢測mi R137甲基化水平;利用轉(zhuǎn)染技術(shù)將mi R137、PCMV-MIR導入癌細胞中,使mi R137過度表達。利用RT-q PCR技術(shù)檢測確保其穩(wěn)定表達,并通過MTS法驗證mi R137的表達MTT法觀察未經(jīng)處理的子宮內(nèi)膜癌細胞株、mi R137過表達及對照組在3h、48h、96h時間后,檢測其對細胞增殖、克隆有抑制作用;通過Western蛋白印跡實驗檢測上述子宮內(nèi)膜癌細胞在不同干預下下,信號通路相關(guān)蛋白及EZH2、H3K23me3、B-Caternin、EGFR、c-Myc等蛋白的表達,以明確在不同的代謝環(huán)境下(非生理狀態(tài))細胞代謝的信號轉(zhuǎn)導通路;根據(jù)細胞培養(yǎng)結(jié)果,將不同干預條件的穩(wěn)定性表達的細胞系種植于裸鼠體內(nèi),觀察各組小鼠腫瘤生長速度、大小等,進一步驗證了當mi R137過度表達對腫瘤的抑制作用。結(jié)果:在子宮內(nèi)膜樣腺癌(EEC,I型)和非子宮內(nèi)膜樣腺癌(non-EEC,II型)中,mir137相對于正常細胞來說是存在高度甲基化的,并且甲基化程度與惡性程度成正比;在未經(jīng)處理的子宮內(nèi)膜癌細胞株(HEC1A,Ishikawa)、mi R137過表達及對照組中,mi R137的表達對癌細胞株的增殖及克隆有明顯抑制作用;Western蛋白印跡實驗檢測上述子宮內(nèi)膜癌細胞在mi R137高表達情況下,信號通路相關(guān)蛋白及EZH2、H3K23me3、B-Caternin、EGFR、c-Myc等蛋白的表達明顯降低,證實了mi R137抑制Wnt/B-Caternin這一信號通路成立,具有誘導細胞凋亡的作用;體外小鼠實驗mi R137過度表達使小鼠的腫瘤大小及重量都比對照組小的多(P0.05),與細胞實驗結(jié)果一致,證明mi R137對人子宮內(nèi)膜癌細胞株的增殖有顯著的抑制作用。結(jié)論:抑癌基因mi R137的正常表達,能夠作用于它的下游靶基因,有抑制腫瘤生長的作用,而mi R137的甲基化導致它表達的缺失是腫瘤生長的原因之一。能夠選擇正確的藥物抑制DNA甲基化作用,使mi R137軸或者軸上的其他基因能正常表達,對臨床治療有一定的指導意義。這樣說來通過靶向針對mi R137來治療子宮內(nèi)膜癌的前景甚廣。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 微小RNA 差異甲基化區(qū)域 CpG島
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 主要符號表10-11
• 第一章 前言11-15
• 第二章 材料與方法15-29
• 2.1 細胞系15
• 2.2 主要試劑和藥品15-16
• 2.3 主要儀器設(shè)備16
• 2.4 主要溶液的配制方法及試劑16-18
• 2.5 方法與步驟18-29
• 第三章 結(jié)果29-37
• 3.1 miRNA高度甲基化在人類子宮內(nèi)膜癌細胞中的鑒定29
• 3.2 在人類子宮內(nèi)膜癌細胞中miR137高度甲基化并表現(xiàn)為表達沉默29-31
• 3.3 在子宮內(nèi)膜癌細胞系中miR137高度甲基化及脫甲基化藥物再激活31-32
• 3.4 miR137過表達抑制體外子宮內(nèi)膜癌細胞系的增殖與克隆形成32-34
• 3.5 miR137過表達抑制體內(nèi)子宮內(nèi)膜腫瘤的生長及相關(guān)蛋白變化34-37
• 第四章 討論37-43
• 第五章 結(jié)論43-45
• 參考文獻45-49
• 攻讀學位期間取得的研究成果49-50
• 致謝50

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1 張瑋;抑癌基因miR137在子宮內(nèi)膜癌中高度甲基化及其機制的研究[D];濟南大學;2016年

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本文編號：1035100