本文關(guān)鍵詞：胃癌相關(guān)microRNAs的篩選及其對(duì)胃癌的早期診斷作用

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【摘要】：胃癌(Gastric cancer,GC)是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)病率占全球癌癥發(fā)病率的第5位,死亡率則位居2位。胃癌也是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,分別占男女性癌癥發(fā)病率的第2位和第3位,死亡率均位于第2位。胃癌的早期診斷與治療對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要作用,但我國(guó)早期胃癌的診斷率不足10%,半數(shù)以上的病例發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于Ⅲ、Ⅳ期,出現(xiàn)了局部大血管侵犯或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,即使給予姑息手術(shù)聯(lián)合放化療治療,其遠(yuǎn)期預(yù)后也較差,5年生存率不足30%�，F(xiàn)有的腫瘤標(biāo)記物在早期胃癌中變化不明顯,僅在部分進(jìn)展期胃癌中升高,因此迫切需要一種新的胃癌相關(guān)生物學(xué)標(biāo)記物,為胃癌的早期診斷和治療提供指導(dǎo)。micro RNAs(miRNAs)的發(fā)現(xiàn)為胃癌的早期診斷提供了新的方向。miRNAs是一類長(zhǎng)度在22 nt左右的內(nèi)源性非編碼小RNA,主要通過(guò)與Argonaute家族蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC),在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)m RNA的表達(dá)。大量研究顯示,miRNAs在調(diào)控癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化及凋亡中均發(fā)揮著重要作用,并與癌癥的侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程相關(guān)。此外,研究顯示,在血漿中可檢測(cè)到穩(wěn)定表達(dá)的miRNAs,這些都為miRNAs應(yīng)用于胃癌的早期診斷提供了理論基礎(chǔ)。目的:篩選胃癌血漿和組織中差異表達(dá)的miRNAs,評(píng)價(jià)其作為生物學(xué)標(biāo)記物對(duì)胃癌的診斷價(jià)值。方法:收集42例胃癌患者血漿標(biāo)本、42例年齡和性別匹配的正常對(duì)照者血漿標(biāo)本,23對(duì)福爾馬林固定、石蠟包埋的胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本。應(yīng)用solexa測(cè)序,在8對(duì)胃癌血漿和正常血漿,8對(duì)胃癌組織和癌旁組織中初步篩選胃癌差異表達(dá)的miRNAs。在復(fù)篩階段,應(yīng)用q RT-PCR逐步擴(kuò)大樣本進(jìn)一步驗(yàn)證差異表達(dá)的miRNA。然后,應(yīng)用ROC曲線分析篩選出的miRNAs對(duì)胃癌的診斷價(jià)值。最后,對(duì)胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中的miRNAs表達(dá)水平進(jìn)行研究,分析血漿中miRNAs的可能來(lái)源。結(jié)果:1應(yīng)用Solexa測(cè)序結(jié)果胃癌血漿中檢測(cè)到635種miRNAs的表達(dá),健康對(duì)照血漿中檢測(cè)到634種miRNAs,胃癌組織中檢測(cè)到1023種miRNAs,癌旁組織中檢測(cè)到772種miRNAs。其中,血漿中差異表達(dá)的miRNAs有146種,組織中差異表達(dá)的miRNAs有207種,在血漿和組織中表達(dá)一致的miRNAs共有31種。2應(yīng)用q RT-PCR進(jìn)一步篩選候選miRNA應(yīng)用q RT-PCR,在測(cè)序標(biāo)本(8對(duì)胃癌血漿和正常血漿,8對(duì)胃癌組織和癌旁組織)中對(duì)上一階段篩選出的31種miRNAs的表達(dá)水平進(jìn)行逐一驗(yàn)證,進(jìn)一步篩選差異表達(dá)的miRNAs。結(jié)果顯示,miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿及組織中的表達(dá)都是升高的,用于下一步驗(yàn)證。3擴(kuò)大樣本對(duì)5種差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)一步驗(yàn)證在42例胃癌血漿和42例正常血漿,23對(duì)胃癌組織及癌旁組織中,進(jìn)一步驗(yàn)證上階段差異表達(dá)的5種miRNAs。結(jié)果顯示,miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿中的相對(duì)表達(dá)量(與U6比較,中位數(shù))依次為0.0169、0.0231、0.0282、0.0363、0.0058;在健康對(duì)照血漿中的相對(duì)表達(dá)量依次為:0.0030、0.0101、0.0100、0.0157、0.0032;兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量(與U6比較,中位數(shù))依次為:14.77、0.63、0.92、0.64、0.16;在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量依次為:7.56、0.36、0.58、0.42、0.07;兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿及組織的表達(dá)中均明顯升高。4目的miRNA對(duì)胃癌的診斷價(jià)值為了檢測(cè)5種miRNA對(duì)胃癌的診斷作用,對(duì)42例胃癌血漿患者及42例健康對(duì)照進(jìn)行ROC曲線分析。結(jié)果顯示,單獨(dú)檢測(cè)miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p的曲線下面積分別為:0.785(95%CI:0.688~0.882)、0.766(95%CI:0.663~0.869)、0.743(95%CI:0.634~0.851)、0.729(95%CI:0.620,0.838)和0.724(95%CI:0.614~0.833)。聯(lián)合檢測(cè)miR-17-5p和miR-127-3p的曲線下面積可達(dá)0.810(95%CI:0.720~0.901)。以上結(jié)果表明檢測(cè)這5種miRNAs有助于胃癌的診斷。5目的miRNA對(duì)早期胃癌的診斷作用為了解目的miRNA的檢測(cè)是否有助于早期胃癌的診斷,本研究對(duì)健康對(duì)照、早期胃癌、進(jìn)展期胃癌血漿中5種miRNA表達(dá)水平進(jìn)行了對(duì)比研究。結(jié)果顯示,miR-433-3p、miR-654-3p在早期胃癌中未見(jiàn)明顯變化(P0.05),僅在進(jìn)展期胃癌中可見(jiàn)明顯升高(P0.05)。而miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p的表達(dá)水平在早期胃癌中即出現(xiàn)了明顯升高(P0.05),表明這3種miRNAs可能有助于早期胃癌的診斷。6胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中5種miRNA表達(dá)水平的比較在SGC7901胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中,miR-17-5p的表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高(P0.05),而miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)果提示血漿miR-17-5p水平升高,可能主要來(lái)源于胃癌細(xì)胞的分泌。結(jié)論:1 miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿和組織中表達(dá)升高。2血漿miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p在早期胃癌中即出現(xiàn)了明顯升高,并且可獲得較大的AUC值,有望成為胃癌早期檢測(cè)的生物學(xué)標(biāo)志物。3血漿中的miR-17-5p可能來(lái)源于胃癌細(xì)胞的直接分泌,miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p可能來(lái)源于胃癌細(xì)胞與其他細(xì)胞的相互作用。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 微小RNA 生物學(xué)標(biāo)記物 血漿 組織
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-32
• 附表32-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述 microRNAs在胃癌中的研究進(jìn)展43-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷56

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本文編號(hào)：1034636