本文關(guān)鍵詞：基于DNA甲基化特異性位點(diǎn)區(qū)分癌癥種類以及同種癌癥分型并定量檢測(cè)血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞

  更多相關(guān)文章： 細(xì)胞區(qū)分 DNA甲基化 循環(huán)腫瘤細(xì)胞

【摘要】：本論文利用腫瘤特異性甲基化位點(diǎn)構(gòu)建了一種十分簡(jiǎn)單的方法用于區(qū)分前列腺癌(PC-3)、乳腺癌(MCF-7)、宮頸癌(Hela、Hela-S)四種細(xì)胞系以及正常人全血樣本。實(shí)驗(yàn)中,我們一共測(cè)試了12個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)中共50個(gè)Cp G位點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)在所測(cè)試位點(diǎn)中,無論是PC-3、MCF-7、Hela、Hela-S以及正常人全血樣本,每個(gè)樣本都具有各個(gè)細(xì)胞系特異性的DNA甲基化圖譜,無論在基因?qū)用孢�是單個(gè)基因不同位點(diǎn)的層面上都具有很強(qiáng)的特異性。測(cè)試得到結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅需測(cè)試三個(gè)甲基化位點(diǎn)(RA-3、SF-6、GS-5)就可以對(duì)實(shí)驗(yàn)中設(shè)定的5個(gè)樣本做出鑒定,檢出所測(cè)樣本是以上四種癌細(xì)胞系中某種細(xì)胞系和正常人全血樣本的混合物或單獨(dú)的正常人全血樣本。對(duì)未知樣本進(jìn)行該3個(gè)位點(diǎn)測(cè)試,若RA-3/SF-6/GS-5三個(gè)位點(diǎn)測(cè)試得到的信號(hào)為+/-/-,則該樣本為PC-3和正常人全血的混合物;若RA-3/SF-6/GS-5三個(gè)位點(diǎn)測(cè)試得到的信號(hào)為+/+/+,則所測(cè)的樣本為MCF-7和正常人全血的混合物;若RA-3/SF-6/GS-5三個(gè)位點(diǎn)測(cè)試得到的信號(hào)為-/+/-,則該樣本為Hela和正常人全血的混合物;若RA-3/SF-6/GS-5三個(gè)位點(diǎn)測(cè)到的信號(hào)為-/+/+,則該樣本為Hela-S和正常人全血的混合物;若RA-3/SF-6/GS-5三個(gè)位點(diǎn)的信號(hào)為-/-/-,則所測(cè)的樣本為正常人全血樣本。另外通過以上實(shí)驗(yàn)所測(cè)的這些甲基化位點(diǎn),我們構(gòu)建了一種全新的循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法。觀察本實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞和正常人全血樣本在所測(cè)試的甲基化位點(diǎn)中有大量在正常人全血中甲基化水平表達(dá)量極低或不表達(dá)但在各個(gè)癌細(xì)胞系中甲基化表達(dá)水平極高的位點(diǎn)。這些具有明顯差異的甲基化位點(diǎn)均可以作為各個(gè)癌細(xì)胞系的在正常人全血中作為循環(huán)腫瘤細(xì)胞時(shí)檢測(cè)用的標(biāo)志物。在所得到的位點(diǎn)中,可以作為MCF-7細(xì)胞系的標(biāo)志位點(diǎn)有CCN-3、GS-4、GS-5、RA-3、RA-4、RA-5、RA-6、RP-1、RP-4、RP-7、SF-6、TIG-5、TNF-1等13個(gè)位點(diǎn);可以作為PC-3的標(biāo)志位點(diǎn)有RA-3、RA-4、RA-5、RA-6、RP-1、RA-6、RP-7、TIG-5、TNF-1等9個(gè)位點(diǎn);可以作為Hela的標(biāo)志位點(diǎn)有RP-1、RP-2、RP-4、RP-6、RP-7、SF-6等六個(gè)位點(diǎn);在Hela-S中有CHF-2、CHF-3、GS-3、GS-4、GS-5、SF-6、TNF-1等7個(gè)位點(diǎn)。我們選取了RA-3和RA-5位點(diǎn)作為PC-3和MCF-7的標(biāo)志位點(diǎn),另外選取了CHF-3位點(diǎn)作為Hela-S的標(biāo)志位點(diǎn),均呈現(xiàn)出較好的結(jié)果,僅檢測(cè)當(dāng)體系中存在2個(gè)癌細(xì)胞時(shí),均可以和陰性對(duì)照組有明顯區(qū)分,在體系中有2-2000個(gè)癌細(xì)胞均呈現(xiàn)出很好的趨勢(shì)。另外相比目前主流的免疫磁珠捕獲的方法來說,該方法僅需200μL去血清血液樣本就可以得到相當(dāng)?shù)年栃月�。因該方法在檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞時(shí),所檢測(cè)到的循環(huán)腫瘤細(xì)胞不僅包含了具有細(xì)胞活性的循環(huán)腫瘤細(xì)胞,所得到的信號(hào)也有部分來自于在血液中已經(jīng)凋亡的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(由于腫瘤細(xì)胞脫離原先的組織到血液中后所處的微環(huán)境發(fā)生巨大變化,大部分血液中的癌細(xì)胞處于凋亡狀態(tài))。以及當(dāng)以DNA作為靶標(biāo)用于檢測(cè)時(shí),由于血液中數(shù)量最多的血紅細(xì)胞是沒有DNA的,因此也清除了在循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)時(shí)最大的障礙。相比以m RNA作為特異性靶標(biāo)對(duì)循環(huán)腫瘤進(jìn)行檢測(cè)的研究工作,DNA的穩(wěn)定性是m RNA所無法比擬的。此外,該檢測(cè)方法對(duì)樣本的新鮮程度要求也更低,并不要求血樣是否溶血。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞區(qū)分 DNA甲基化 循環(huán)腫瘤細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)院研究生院(上海應(yīng)用物理研究所)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.43
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 緒論12-32
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞13-17
• 1.2.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)13-14
• 1.2.2 CTCs富集方法14
• 1.2.3 CTC物理檢測(cè)方法14-15
• 1.2.4 CTC生物學(xué)檢測(cè)方法15
• 1.2.5 CTC微流檢測(cè)設(shè)備15-16
• 1.2.6 磁性細(xì)胞分選技術(shù)16-17
• 1.3 CTCs檢測(cè)標(biāo)志物的選擇17-19
• 1.3.1 癌細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化17-18
• 1.3.2 核酸標(biāo)志物檢測(cè)18-19
• 1.4 癌細(xì)胞內(nèi)基因水平變化19-22
• 1.4.1 DNA甲基化與癌癥19
• 1.4.2 DNA甲基化修飾19-20
• 1.4.3 與癌癥相關(guān)DNA甲基化標(biāo)志物20-21
• 1.4.4 DNA甲基化標(biāo)志物的癌癥檢測(cè)21-22
• 1.5 本課題的提出22-24
• 參考文獻(xiàn)24-32
• 第二章 基于DNA甲基化特異性位點(diǎn)區(qū)分癌癥種類、以及同種癌癥分型32-48
• 2.1 引言32-33
• 2.1.1 研究背景32
• 2.1.2 DNA甲基化檢測(cè)方法32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料33-37
• 2.2.1 材料及試劑33-37
• 2.2.2 細(xì)胞37
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法37-40
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)37
• 2.3.2 各個(gè)癌細(xì)胞系、正常人全血樣本全基因組DNA提取37-38
• 2.3.3 亞硫酸氫鈉處理全基因組DNA38-39
• 2.3.4 純化DNA39
• 2.3.5 DNA脫磺化39
• 2.3.6 甲基化特異性PCR(MSP)39
• 2.3.7 瓊脂糖凝膠電泳39-40
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論40-44
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)中所檢測(cè)標(biāo)靶基因簡(jiǎn)介40-41
• 2.4.2 不同種類癌細(xì)胞鑒定、分型41-44
• 2.5 本章小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 第三章 基于DNA甲基化特異性位點(diǎn)定量檢測(cè)血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞48-59
• 3.1 研究背景48-49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料49
• 3.2.1 材料49
• 3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑49
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 3.3.1 模擬樣本制作49
• 3.3.2 PCR產(chǎn)物純化49-50
• 3.3.3 微陣列芯片檢測(cè)PCR產(chǎn)物50
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 3.4.1 三種癌細(xì)胞模擬樣本的檢測(cè)50-51
• 3.4.2 MCF-7 細(xì)胞系模擬樣本檢測(cè)51-52
• 3.4.3 PC-3 細(xì)胞系模擬樣本檢測(cè)52-53
• 3.4.4 Hela-S細(xì)胞系模擬樣本檢測(cè)53-54
• 3.4.5 DNA提取效率考證54
• 3.5 本章小結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 第四章 總結(jié)與展望59-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄61-62
• 致謝62-63

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李帥;劉曉強(qiáng);;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年06期

2 曹璐;徐文;殷正豐;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離與檢測(cè)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年03期

3 董印軍;宋平平;張百江;張為迪;;肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2009年05期

4 周晴接;楊建民;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2010年11期

5 平偉;付向?qū)?;肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2011年06期

6 馬瓊;周勇;裘秀春;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞自激注入的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年06期

7 周長(zhǎng)春;范傳波;宋現(xiàn)讓;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)和應(yīng)用[J];分子診斷與治療雜志;2012年01期

8 宋英健;王正;楊林;;肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2012年10期

9 李慧;崔洪霞;程穎;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2012年11期

10 ;從400多億個(gè)血細(xì)胞中揪出1個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳倩;崔巍;戈烽;林平;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞和肺癌TNM分期的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 宋彥齡;安源;張薇婷;朱志;俞春東;楊朝勇;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲檢測(cè)新方法[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第3分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

3 馬麗;文仲光;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及其在肺癌患者中的臨床應(yīng)用[A];中國(guó)腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國(guó)腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 張品南;許楊揚(yáng);楊小敏;;血循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展[A];2008年浙江省病理學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 彭佳茜;白林靈;趙瓊;楊延蓮;王琛;;基于多肽的循環(huán)腫瘤細(xì)胞富集與檢測(cè)研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第35分會(huì)：納米生物醫(yī)學(xué)中的化學(xué)問題[C];2014年

6 梅林航;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在乳腺癌中的應(yīng)用[A];2013年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

7 黃士昂;胡艷潔;范靈靈;劉偉;李欣;鄭金娥;賀艷麗;;運(yùn)用多參數(shù)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)監(jiān)測(cè)乳腺癌Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期病人外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞及對(duì)其預(yù)后的評(píng)估[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

8 任傳利;韓崇旭;薛小平;朱小平;呂煒;周林;;胰腺癌外周血凋亡循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)和輔助治療敏感性的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

9 陳曉霞;任勝祥;李雪飛;張玲;李瑋;周菲;高廣輝;李帥;周彩存;;循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌診斷中的作用[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

10 楊卓;付靜軒;王斐;崔巍;;外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特性及其檢測(cè)分析的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 江蘇省人民醫(yī)院腫瘤科主任醫(yī)生 殷詠梅;循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)防癌癥復(fù)發(fā)[N];健康報(bào);2012年

2 劉海英;循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有“自激注入”能力[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

3 記者 王雪飛;從400多億個(gè)血細(xì)胞中揪出1個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞[N];健康報(bào);2012年

4 劉海英;“捕蠅紙”型循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)裝置問世[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

5 劉海英;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化基因可用于檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

6 張中橋;EGFR mRNA可用于乳癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

7 聞?wù)x;美評(píng)出年度十大醫(yī)療技術(shù)創(chuàng)新[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方主亭;肝癌動(dòng)脈栓塞對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的影響及機(jī)制實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 孫文潔;循環(huán)腫瘤細(xì)胞及功能影像在預(yù)測(cè)和評(píng)估直腸癌放化療療效方面的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 黃文濤;膽道腫瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及基因組擴(kuò)增[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 馬燕春;過濾裝置與腺病毒相結(jié)合捕獲活的循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

5 秦英剛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞與中、西醫(yī)治療肺癌患者療效及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

6 劉道永;肝細(xì)胞癌病人外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)和臨床意義[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

7 張玉娟;循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的方法學(xué)建立和改良及在實(shí)體瘤中的監(jiān)測(cè)應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 于躍;葉酸受體陽性的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可作為新的肺癌輔助診斷標(biāo)志物[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

9 左國(guó)華;肝癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及其生物學(xué)特性[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 李世超;循環(huán)腫瘤細(xì)胞評(píng)估乳腺癌手術(shù)致微轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)及輔助治療療效的臨床初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳志清;結(jié)直腸癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的臨床診療價(jià)值研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 宋云飛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞對(duì)晚期乳腺癌預(yù)后影響的初步探究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 陰麗媛;循環(huán)腫瘤細(xì)胞新型檢測(cè)方法的建立及其在臨床樣本中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 真德智;非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后輔助治療期間外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞EpCAM表達(dá)水平監(jiān)測(cè)的臨床意義[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2015年

5 朱玲;免疫磁珠法富集肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及臨床意義研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張亮;乳腺癌不同表型循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 董超群;羧酸甜菜堿兩性聚合物功能化尼龍導(dǎo)管及其捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究[D];南京大學(xué);2015年

8 羅小輝;循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速自動(dòng)識(shí)別研究[D];西安電子科技大學(xué);2014年

9 劉敏;吖啶橙熒光染色法檢測(cè)腎癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其臨床意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李浩;食管鱗癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)及臨床意義的研究[D];濟(jì)南大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1030687