本文關鍵詞：缺氧誘導因子2（HIF-2α）在胰腺癌中調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的機制研究

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【摘要】：第一部分缺氧誘導因子2(HIF-2α)在胰腺癌中的表達及臨床意義目的研究缺氧誘導因子2(HIF-2α)在胰腺癌和癌旁非癌胰腺組織中的表達,并進一步探究HIF-2α在胰腺癌中的臨床意義。方法(1)用免疫組織化學法(immuno histo chemistry,IHC)檢測70例胰腺癌患者癌組織和癌旁非癌胰腺組織標本中HIF-2α蛋白的表達。(2)分析70例胰腺癌組織中HIF-2α表達與臨床病理因素之間的相關性。(3)用IHC檢測70例胰腺癌中上皮鈣依賴粘附蛋白(E-cadherin)表達情況,并分析E-cadherin與HIF-2α表達的相關性。結果(1)HIF-2α主要表達于細胞胞質(zhì)及胞核,在胰腺癌組織中陽性率為67.1%(47/70),在相應非癌胰腺組織中陽性率為11.4%(8/70)。HIF-2α在胰腺癌組織中的陽性率明顯高于非癌胰腺組織,兩者的差異有統(tǒng)計學意義(χ2=45.549,P0.05),而且HIF-2α的表達與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)胰腺癌患者中胰腺癌組織的E-cadherin表達水平(21/70)明顯低于相應癌旁正常胰腺組織(43/70),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.931,P0.05)。(3)胰腺癌組織中HIF-2α的表達與E-cadherin的表達呈負相關關系(Spearman,r=-0.394,P0.05)。結論HIF-2α蛋白在胰腺癌中高表達,并且胰腺癌組織中HIF-2α蛋白的高表達與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關。E-cadherin在胰腺癌組織中低表達,且胰腺癌組織中HIF-2α的表達與E-cadherin的表達呈負相關性,提示在胰腺癌中HIF-2α可能通過調(diào)控E-cadherin的表達促進EMT的發(fā)生,參與胰腺癌的侵襲及轉(zhuǎn)移。第二部分在胰腺癌細胞中HIF-2α調(diào)控EMT的作用及其調(diào)控機制研究目的觀察在胰腺癌細胞中HIF-2α對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,emt)的作用,并進一步探討可能的調(diào)控機制。方法(1)構建針對HIF-2α基因的小干擾rna載體和過表達載體,通過慢病毒轉(zhuǎn)染人胰腺癌細胞,采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(western blot)檢測靶向調(diào)控HIF-2α的效果。(2)在胰腺癌細胞中調(diào)控HIF-2α的表達后,通過侵襲實驗(cell invasion assay)和劃痕實驗(wound healing assay)觀察HIF-2α對胰腺癌細胞侵襲及遷移能力的影響,并通過western blot檢測HIF-2α對emt相關蛋白的作用。(3)在胰腺癌細胞中調(diào)控HIF-2α后通過westernblot檢測emt相關轉(zhuǎn)錄因子twist1/2表達的變化。(4)通過染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,chip)方法研究twist1/2與emt特異性蛋白e-cadherin的作用與位點。(5)在胰腺癌組織中通過ihc檢測twist1/2和e-cadherin的表達,分析其相關性。結果(1)上調(diào)HIF-2α表達后,胰腺癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力增強,下調(diào)HIF-2α表達后胰腺癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力下降。(2)在胰腺癌細胞中HIF-2α調(diào)控emt相關蛋白的表達,即上調(diào)HIF-2α后,e-caherin表達下降(p0.01),mmp2和mmp9的表達上升(p0.01);下調(diào)HIF-2α后,e-caherin表達上升(p0.01),而mmp2和mmp9的表達下降(p0.01)。(3)在胰腺癌細胞中HIF-2α調(diào)控twist1/2的表達,twist2可與e-cadherin的啟動子區(qū)結合。結論在胰腺癌細胞中HIF-2α參與emt的發(fā)生發(fā)展,促進胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。emt轉(zhuǎn)錄因子twist2可與e-cadherin的啟動子區(qū)結合,HIF-2α可能是通過調(diào)控twist2結合e-cadherin,參與胰腺癌emt的發(fā)生。
【關鍵詞】：
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-15
• 參考文獻12-15
• 第一部分HIF-2α在胰腺癌中的表達及臨床意義15-26
• 材料15-16
• 方法16-18
• 結果18-22
• 討論22-24
• 結論24
• 參考文獻24-26
• 第二部分 在胰腺癌細胞中HIF-2α調(diào)控EMT的作用及其調(diào)控機制研究26-45
• 材料26-28
• 方法28-35
• 結果35-41
• 討論41-43
• 結論43
• 參考文獻43-45
• 全文結論45-46
• 綜述46-56
• 參考文獻53-56
• 全文縮略詞56-57
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文57-58
• 致謝58-59

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本文編號：1030698