本文關(guān)鍵詞：食管鱗癌細(xì)胞中LSD1與mTOR通路相互調(diào)控作用研究

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.探討食管鱗癌中LSD1與m TOR通路相互調(diào)控關(guān)系。2.探討LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株增殖作用及其分子作用機(jī)制,為食管鱗癌的分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法1.不同食管鱗癌細(xì)胞株中LSD1與m TOR通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況。蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)不同食管鱗癌細(xì)胞株中LSD1及m TOR通路相關(guān)蛋白PTEN、p-AKT(ser473)、p-P70S6K、Rictor、Raptor的表達(dá)水平。2.LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株TE-1、ECa109細(xì)胞增殖的影響。CCK-8法檢測(cè)LSD1抑制劑處理TE-1、ECa109細(xì)胞48h后細(xì)胞的增殖變化情況。3.抑制LSD1對(duì)mTOR通路相關(guān)蛋白和組蛋白表達(dá)的影響。用LSD1抑制劑分別處理食管鱗癌細(xì)胞株TE-1、ECa109 48h后,Western blot法檢測(cè)LSD1、PTEN、p-P70S6K及組蛋白H3K4me2的表達(dá)水平;用sh RNA-LSD1干擾ECa109細(xì)胞中LSD1的表達(dá)水平,Western blot法檢測(cè)檢測(cè)LSD1、PTEN、Rictor、Raptor、p-p70S6K的表達(dá)水平。4.抑制m TOR通路對(duì)LSD1的影響。用m TORC1特異性抑制劑雷帕霉素以及ATP競(jìng)爭(zhēng)性m TORC1/m TORC2雙重抑制劑PP242分別處理ECa109細(xì)胞,Western blot法檢測(cè)不同濃度的PP242(0,1,5,10μM)、雷帕霉素(0,50,100,200n M)作用24h后對(duì)食管鱗癌細(xì)胞ECa109中LSD1、Rictor、Raptor及p-p70S6K等蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.所選五株食管鱗癌細(xì)胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706均檢測(cè)到LSD1表達(dá),且LSD1表達(dá)存在差異,在ECa109細(xì)胞中LSD1表達(dá)較高。2.LSD1抑制劑處理后,TE-1、ECa109細(xì)胞增殖活力明顯減低,并且m TORC1及m TORC2通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低;LSD1的表達(dá)沒有變化,而其底物H3K4的雙甲基化水平升高。運(yùn)用sh RNA-LSD1干擾ECa109細(xì)胞中LSD1的表達(dá)后m TORC1,m TORC2通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低。3.用雷帕霉素以及PP242分別處理ECa109細(xì)胞后均檢測(cè)到LSD1表達(dá)水平降低。結(jié)論1.LSD1在五株不同食管鱗癌細(xì)胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706中呈激活狀態(tài),但激活程度不同。2.LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株TE-1、ECa109有增殖抑制作用。3.食管鱗癌中LSD1與mTOR通路之間存在相互調(diào)控作用。LSD1的抑制可以抑制m TOR通路的活性,同時(shí)m TOR的抑制也可以抑制LSD1的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：LSD1 mTOR 食管鱗癌 Raptor Rictor
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文縮略詞表12-13
• 前言13-22
• 1 食管癌13-14
• 1.1 食管癌的預(yù)防、診斷及治療13-14
• 2 表觀遺傳學(xué)（epigenetics）14-17
• 2.1 DNA水平甲基化15
• 2.2 組蛋白修飾15-17
• 3 LSD1（組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶 1）17-20
• 3.1 LSD1的生物學(xué)功能17-18
• 3.2 LSD1與腫瘤的關(guān)系18-20
• 3.2.1 LSD1與乳腺癌18-19
• 3.2.2 LSD1與前列腺癌19
• 3.2.3 LSD1與神經(jīng)母細(xì)胞瘤19-20
• 3.2.4 LSD1與其他腫瘤20
• 4 PI3K-PTEN/Akt/mTOR信號(hào)通路20-21
• 5 本文研究?jī)?nèi)容21-22
• 第一章 食管鱗癌細(xì)胞中LSD1與mTOR通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況22-34
• 引言22
• 1 材料和方法22-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑22-24
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑配制24-26
• 1.1.4 食管鱗癌細(xì)胞株26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-31
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 1.2.2 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)27-31
• 2 結(jié)果31-32
• 2.1 不同食管鱗癌細(xì)胞中LSD1與mTOR通路蛋白表達(dá)情況31-32
• 3 討論32-34
• 第二章 抑制LSD1對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖及mTOR通路的影響34-47
• 引言34
• 1 材料與方法34-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料34-36
• 1.1.1 試劑34-35
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器35
• 1.1.3 試劑配制35-36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法36-41
• 1.2.1 血球計(jì)數(shù)板法計(jì)數(shù)細(xì)胞36
• 1.2.2 CCK-8 法測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率實(shí)驗(yàn)36-37
• 1.2.3 細(xì)胞總組蛋白提取37-38
• 1.2.4 細(xì)胞總蛋白提取38
• 1.2.5 細(xì)菌的轉(zhuǎn)化與擴(kuò)增38
• 1.2.6 質(zhì)粒提取38-39
• 1.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染39-40
• 1.2.8 Western blot實(shí)驗(yàn)40
• 1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 2.1 LSD1抑制劑對(duì)TE-1、ECa109細(xì)胞增殖的影響41
• 2.2 LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞mTOR通路蛋白表達(dá)的影響41-42
• 2.3 LSD1抑制劑食管鱗癌細(xì)胞中組蛋白的影響42-43
• 2.4 LSD1-shRNA轉(zhuǎn)染效率及其對(duì)mTOR通路蛋白表達(dá)的影響43-45
• 2.4.1 LSD1-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率43-44
• 2.4.2 ECa109細(xì)胞轉(zhuǎn)染LSD1-shRNA后對(duì)mTOR通路蛋白的影響44-45
• 3 討論45-47
• 第三章 抑制mTOR通路對(duì)LSD1的影響47-53
• 引言47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法47-50
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料47-49
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑47-48
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器48
• 1.1.3 試劑配制48-49
• 1.1.4 細(xì)胞株49
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 1.2.1 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)49
• 1.2.2 Western blot實(shí)驗(yàn)49
• 1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析49-50
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-52
• 2.1 雷帕霉素對(duì)LSD1的影響50
• 2.2 PP242對(duì)LSD1的影響50-52
• 3 討論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 綜述：LSD1與mTOR抑制劑的研究進(jìn)展58-66
• 1. mTOR抑制劑研究進(jìn)展58-60
• 2. LSD1抑制劑研究進(jìn)展60-63
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 全文總結(jié)與展望66-67
• 致謝67-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69

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9 劉U，

本文編號(hào)：1029340