本文關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)敏感非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對EGFR-TKIs耐藥及機制的研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞生長因子 EGFR-TKIs c-Met 耐藥 肺腫瘤 裸鼠

【摘要】：目的:本實驗組前期研究表明,肝細(xì)胞生長因子(hepatocytegrowth factor,HGF)在體外能夠誘導(dǎo)敏感非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancaer,NSCLC)細(xì)胞對表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐藥,HGF 刺激 c-Met 磷酸化可能是敏感肺癌細(xì)胞對EGFR-TKIs耐藥的重要機制。本研究旨在進(jìn)一步探討HGF在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)敏感型NSCLC對EGFR-TKIs耐藥及耐藥機制。方法:選擇NSCLC細(xì)胞株P(guān)C9(EGFR突變型,敏感株)、H292(EGFR野生型,敏感株)及人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5),通過ELISA法檢測MRC-5培養(yǎng)上清液中HGF濃度,MTT法檢測細(xì)胞增殖情況,應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測細(xì)胞中c-Met及其下游通道的變化。建立PC-9、H292細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型,設(shè)空白組(C組)、對照組(H組)、吉非替尼組(G組)、吉非替尼+HGF組(HG組),觀察腫瘤生長情況,繪制腫瘤生長曲線,稱取腫瘤質(zhì)量,計算抑瘤率。免疫組織化學(xué)法檢測裸鼠移植瘤組織中c-Met及其下游通道的變化。結(jié)果:MRC-5細(xì)胞在體外培養(yǎng)時能夠分泌HGF,其分泌的HGF能夠影響PC9、H292細(xì)胞的存活率,并且能夠激活PC9、H292細(xì)胞中c-Met并影響下游通道蛋白表達(dá)。動物實驗表明MRC-5細(xì)胞和PC9、H292細(xì)胞混合接種時,其分泌的HGF能夠降低吉非替尼對腫瘤生長的抑制作用,并且在裸鼠體內(nèi)的腫瘤組織中,激活c-Met及其下游通道蛋白。結(jié)論:MRC-5分泌的HGF能夠在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)敏感肺癌細(xì)胞PC-9和H292對吉非替尼產(chǎn)生耐藥,HGF可能通過刺激c-Met磷酸化誘導(dǎo)敏感NSCLC細(xì)胞對吉非替尼耐藥。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞生長因子 EGFR-TKIs c-Met 耐藥 肺腫瘤 裸鼠
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第一章 引言10-12
• 第二章 實驗材料和方法12-18
• 2.1 實驗材料12-13
• 2.1.1 細(xì)胞株12
• 2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑12
• 2.1.3 實驗藥物12
• 2.1.4 Western Blot相關(guān)試劑12
• 2.1.5 抗體12
• 2.1.6 實驗動物12-13
• 2.2 試劑配制13
• 2.2.1 吉非替尼原料(分子量446.9)13
• 2.2.2 吉非替尼灌胃用藥13
• 2.2.3 配制含雙抗及10%含胎牛血清DMEM培養(yǎng)液13
• 2.3 實驗方法13-17
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇和傳代培養(yǎng)13
• 2.3.2 ELISA法檢測MRC-5細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HGF濃度13-14
• 2.3.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖14
• 2.3.4 提取細(xì)胞總蛋白14-15
• 2.3.5 BCA蛋白定量15
• 2.3.6 Western Blot檢測NSCLC細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)15-16
• 2.3.7 裸鼠移植瘤模型的建立及藥物抑瘤的分析16
• 2.3.8 免疫組織化學(xué)檢測16-17
• 2.4 統(tǒng)計方法17-18
• 第三章 實驗結(jié)果18-27
• 第四章 討論27-30
• 第五章 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-36
• 綜述:非小細(xì)胞肺癌對EGFR-TKIs耐藥機制的研究進(jìn)展36-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44

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本文編號：1029212