發(fā)布時(shí)間：2017-10-14 01:15

  本文關(guān)鍵詞：FHL2參與調(diào)節(jié)KLF8促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： KLF8 FHL2 結(jié)直腸癌 EMT

【摘要】：目的和意義FHL2(Four and a halfLIM Protein 2)為確定的癌基因,在胃腸道腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。最近已有研究報(bào)道了FHL2下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,但其上游的相關(guān)調(diào)控報(bào)道甚微。結(jié)合文獻(xiàn),我們通過(guò)軟件篩選出轉(zhuǎn)錄因子KLF8 (Kruppel-like factor 8)為FHL2可能的調(diào)控因子。Kruppel-like factor 8(KLF8)是作為K ruppel樣Cys2/His2鋅指轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)家族的一個(gè)轉(zhuǎn)錄抑制蛋白而被識(shí)別的,通過(guò)與輔抑制子碳端結(jié)合蛋白(CtBP)相聯(lián)系抑制基因表達(dá)。最近有研究表明KLF8在卵巢癌、腎癌以及乳腺癌中表達(dá)是升高的,但是在腸癌組織細(xì)胞中的表達(dá)及其與腸癌發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。同時(shí)本課題旨在明確KLF8與FHL2上游啟動(dòng)子序列的轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系,從而尋找能靶向調(diào)控FHL2表達(dá)的元件,以期應(yīng)用于腫瘤的生物靶向治療。材料和方法主要材料Lovo、SW480、SW1116、Caco2、SW620.HT29和DLD1細(xì)胞,rTGF-β1、TGF-β1中和抗體、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒、CHIP試劑盒、突變?cè)噭┖小LF8抗兔多克隆抗體、FHL2抗鼠多克隆抗體、羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽。主要方法1.KLF8對(duì)腸癌EMT及侵襲轉(zhuǎn)移的影響1.1 KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株的構(gòu)建及KLF8對(duì)腸癌EMT的影響轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KLF8和對(duì)照pcDNA3.1質(zhì)粒到Lovo細(xì)胞,48小時(shí)后用含有600μg/mlG418的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2周,挑選單克隆細(xì)胞,并用800μg/ml G418培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),建立單克隆穩(wěn)定表達(dá)株,western blot驗(yàn)證穩(wěn)定克隆細(xì)胞中KLF8的表達(dá)情況。western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KLF8和對(duì)照pcDNA3.1質(zhì)粒細(xì)胞中的E-cadheri、Vimentin及N-cadhenrin的表達(dá)情況。1.2 KLF8對(duì)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響接種適當(dāng)密度轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KLF8和對(duì)照pcDNA3.1質(zhì)粒細(xì)胞至6孔板中,待融合度近100%時(shí),用移液器槍頭進(jìn)行劃痕,鏡下記錄劃痕區(qū)相對(duì)距離,繼續(xù)培養(yǎng),分別于12和24小時(shí)再次拍照記錄,評(píng)估腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力；種轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KLF8和對(duì)照pcDNA3.1質(zhì)粒的單細(xì)胞懸液(5×105/室)至Matrigel侵襲小室,室內(nèi)為無(wú)血清培養(yǎng)基,室外為10%胎牛血清培養(yǎng)基,常規(guī)培養(yǎng)24小時(shí),0.2%結(jié)晶紫染色,顯微鏡下計(jì)數(shù)發(fā)生侵襲的細(xì)胞數(shù)量,評(píng)價(jià)高表達(dá)KLF8對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響。1.3 rTGF-β1對(duì)KLF8及EMT的影響western blot檢測(cè)不同濃度(0、0.5、1.0、2.0ng/ml) rTGF-β1處理Lovo細(xì)胞后蛋白中KLF8、E-cadherin 和vimentin的表達(dá)。用含有2μg/ml TGF-β1的中和抗體及對(duì)照正常鼠IgG抗體(normal mouse IgG, mIgG)的培養(yǎng)基孵育SW480細(xì)胞過(guò)夜,第二天分別加或不加rTGF-β1 (2ng/ml)刺激,繼續(xù)孵育48小時(shí),western b lot方法檢測(cè)KLF8、E-cadherin和vimentin的表達(dá)。轉(zhuǎn)染KLF8-siRNA和對(duì)照Scr-siRNA入Lovo細(xì)胞,24小時(shí)后加或不加rTGF-β1,繼續(xù)孵育48小時(shí),western blot檢測(cè)KLF8、E-cadherin和vimentin的表達(dá)。2.KLF8和FHL2在原發(fā)性腸癌、轉(zhuǎn)移癌組織及細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況2.1 KLF8和FHL2在原發(fā)性腸癌及轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)收集15對(duì)以上來(lái)自同一腸癌病人的原發(fā)與轉(zhuǎn)移癌(淋巴結(jié)或肝轉(zhuǎn)移)手術(shù)標(biāo)本,在連續(xù)切片中分別應(yīng)用KLF8和FHL2抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。2.2 KLF8和FHL2在腸癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)提取Lovo, SW1116, SW620, HT-29, DLD1, CaCo2, SW480的細(xì)胞蛋白,用western blotti ng技術(shù)檢測(cè)不同腸癌細(xì)胞中KLF8和FHL2的表達(dá)水平,并間接免疫熒光染色方法檢測(cè)KLF8與FHL2兩蛋白的細(xì)胞內(nèi)亞分布。3.KLF8與FGL2的關(guān)系3.1 FHL2啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)KLF8的結(jié)合位點(diǎn)通過(guò)使用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)FHL2啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的KLF8結(jié)合位點(diǎn),為了獲得更多KLF8與FHL2啟動(dòng)子結(jié)合的證據(jù),我們利用染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)的方法,探索FHL2啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)KLF8的結(jié)合位點(diǎn)。3.2雙熒光素酶檢測(cè)FHL2啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)KLF8結(jié)合位點(diǎn)的活性根據(jù)FHL2啟動(dòng)子(500bp)內(nèi)KLFs的位置設(shè)計(jì)三對(duì)引物,擴(kuò)增FHL2基因5’端上游啟動(dòng)子序列,分別插入到pGL3-Basic載體,構(gòu)建質(zhì)粒pluc55、pluc201和pluc498,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入不同KLF8表達(dá)狀態(tài)的腸癌細(xì)胞,進(jìn)行雙熒光素檢測(cè)。3.3定點(diǎn)突變重組質(zhì)粒并檢測(cè)其活性變化按照突變?cè)噭┖性O(shè)計(jì)突變引物,以pluc-55為模板進(jìn)行擴(kuò)增得到KLF8結(jié)合位點(diǎn)突變的產(chǎn)物,產(chǎn)物用DpnI酶切可將未突變的模板質(zhì)粒清除,然后轉(zhuǎn)化入Epicurian coli XL 1-blue感受態(tài)細(xì)胞擴(kuò)增,再將突變質(zhì)粒測(cè)序鑒定后命名為plucMT。將突變質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞內(nèi)48小時(shí)后收集細(xì)胞進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。4.下調(diào)FHL2對(duì)KLF8誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌EMT的影響及其對(duì)KLF8誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響4.1 FHL2低表達(dá)對(duì)KLF8誘導(dǎo)的EMT的影響在KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株(Lovo-pcDNA3.1/Lovo-pcDNA3.1-KLF8)中,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Scr-RNA或FHL2-siRNA,48小時(shí)后,vestern blot檢測(cè)FHL2、E-cadherin、 Vimentin、N-cadherin表達(dá)；另外用免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)觀察E-cadherin和 Vimentin在Lovo-KLF8-src-siRNA和SW480-KLF8-FHL2-siRNA兩個(gè)細(xì)胞中分布的變化。4.2 FHL2低表達(dá)對(duì)KLF8誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響(1)WST-1實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FHL2對(duì)KLF8調(diào)節(jié)的結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響在過(guò)表達(dá)KLF8穩(wěn)定株(Lovo-pcDNA3.1-KLF8)中,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA或Scr-RNA,分別種植0、24、48、72小時(shí)后的單細(xì)胞懸液于96孔板中,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),向每孔中加入10μl WST-1溶液,4小時(shí)后測(cè)定450nm處的吸光度。(2)壓低FHL2表達(dá)對(duì)KLF8誘導(dǎo)的腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響取適當(dāng)密度KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株(Lovo-pcDNA3.1/Lovo-pcDN A3.1-KLF8)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Scr-RNA或FHL 2-siRNA后的單細(xì)胞懸液鋪板于六孔板中,待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后,用移液器槍頭劃痕,分別于劃痕后0h、12h、24h顯微鏡下拍照,記錄劃痕情況；種KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株(Lovo-pcDNA3.1/Lovo-pcDNA3.1-KLF8)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Scr-RNA或FHL2-siRNA后的單細(xì)胞懸液(5×105/室)至Matrigel侵襲小室,室內(nèi)為無(wú)血清培養(yǎng)基,室外為10%胎牛血清培養(yǎng)基,常規(guī)培養(yǎng)24小時(shí),0.2%結(jié)晶紫染色,顯微鏡下計(jì)數(shù)發(fā)生侵襲的細(xì)胞數(shù)量,評(píng)價(jià)壓低FHL2對(duì)KLF8誘導(dǎo)的侵襲能力的影響。(3)FHL2siRNA對(duì)過(guò)表達(dá)KLF8引起的腸癌細(xì)胞形態(tài)的影響顯微鏡白光下觀察過(guò)表達(dá)KLF8穩(wěn)定株瞬時(shí)轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA或Scr-RNA48小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)；蓋玻片上培養(yǎng)過(guò)表達(dá)KLF8穩(wěn)定株瞬時(shí)轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA或Scr-RNA后的細(xì)胞,48小時(shí)后取出,并進(jìn)行羅丹明鬼筆環(huán)肽染色,經(jīng)過(guò)PBS洗滌后,于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。5.壓低FHL2表達(dá)對(duì)KLF8誘導(dǎo)的體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移作用的影響5.1皮下腫瘤模型的建立給5-6周齡大小的BALB/c雌性裸鼠皮下分別注射轉(zhuǎn)染pcDNA3.1、 pcDNA3.1-KLF8-FHL2 siRNA的細(xì)胞,35天后處死,對(duì)比三組皮下腫瘤大小；腫瘤連續(xù)切片免疫組化驗(yàn)證Ki-67和CD105的表達(dá)情況。5.2脾被膜下肝轉(zhuǎn)移模型的建立給5-6周齡大小的BALB/c雌性裸鼠脾被膜下分別注射轉(zhuǎn)染pcDNA3.1. pcDNA3.1-KLF8.pcDNA3.1-KLF8-FHL2siRNA的細(xì)胞,3周后處死,觀察體內(nèi)肝臟轉(zhuǎn)移瘤大��；并用qRT-PCR驗(yàn)證三組肝腫瘤內(nèi)E-cadherin的表達(dá)。6.數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理IHC每張切片隨機(jī)選取3-5個(gè)不同視野,計(jì)算目的蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率,并進(jìn)行兩個(gè)樣本的配對(duì)t檢驗(yàn)；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、PCR、細(xì)胞粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移和westrnm blotting灰度值分析結(jié)果用三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊(P0.05)則進(jìn)行兩個(gè)處理組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或多個(gè)處理組間one way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析,整體比較有顯著性差異后多重比較采用LSD法；方差不齊(P0.05)則應(yīng)用S atterthwaite近似t檢驗(yàn)或Welch檢驗(yàn)分析,整體比較有顯著性差異后多重比較采用Duunett's T3檢驗(yàn)。應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)+-標(biāo)準(zhǔn)差表示,p0.05具有顯著性差異。結(jié)果1.KLF8促進(jìn)腸癌EMT及侵襲轉(zhuǎn)移1.1過(guò)表達(dá)KLF8對(duì)腸癌細(xì)胞EMT的作用通過(guò)western blot證實(shí)KLF8與E-cadherin血呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,與V imentin、 N.cadherin呈正相關(guān)關(guān)系。1.2 KLF8對(duì)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用劃痕和侵襲實(shí)驗(yàn)表明KLF8表達(dá)水平與腸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。1.3 rTGF-β1對(duì)KLF8及EMT的影響腸癌細(xì)胞內(nèi)KLF8的表達(dá)對(duì)rTGF-β1存在劑量依賴(lài)性,濃度越高的rTGF-β1導(dǎo)致KLF8的表達(dá)增高,并且降低E-cadherin而增加Vimentin的表達(dá)水平；內(nèi)外源性rTGF-β1引起的KLF8表達(dá)均可以受到TGF-β1中和抗體的抑制；KLF8siRNA阻斷了rTGF-β1引起的Vmehtin的表達(dá),而增加E-cadherin表達(dá)。2.KLF8與FHL2在腸癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)關(guān)系2.1 KLF8與FHL2在原發(fā)性腸癌及轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí)KLF8與FHL2在腸癌組織中表達(dá)水平均顯著高于鄰近正常腸組織,且同位點(diǎn)胞漿和胞核內(nèi)均有表達(dá),通過(guò)Spearman分析得出二者表達(dá)呈正相關(guān)；二者在轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)均呈陽(yáng)性表達(dá)。2.2 KLF8與FHL2在腸癌細(xì)胞內(nèi)同向表達(dá)并具有相關(guān)性Western blot證實(shí),KLF8在腸癌細(xì)胞SW480、SW1116、Caco2和SW620均呈高表達(dá),而在HT29、DLD1和Lovo細(xì)胞內(nèi)呈較低表達(dá)。FHL2在上述腸癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)趨勢(shì)與KLF8一致,除SW480外。并且間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示KLF8與FHL2的表達(dá)位于Lovo的胞核和胞漿內(nèi)。3.FHL2是KLF8轉(zhuǎn)錄活性的直接目標(biāo)3.1 FHL2啟動(dòng)子區(qū)域存在KLF8結(jié)合位點(diǎn)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：在FHL2啟動(dòng)子500bp內(nèi)存在3個(gè)GT盒子：分別位于-50-55bp(GT盒子1),-192--201bp(GT盒子2)和-493--498bp(GT盒子3)。CHIP結(jié)果發(fā)現(xiàn)：加了KLF8抗體組內(nèi)GT盒子1處有條帶出現(xiàn),加了對(duì)照抗體IgG和未加KLF8抗體處均未見(jiàn)條帶出現(xiàn)。3.2雙熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明KLF8與GT盒子1結(jié)合將FHL2啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的三個(gè)GT盒子接入pGL3-Basic載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入Lovo-pcDNA3.1、Lovo-pcDNA3.1-KLF8中進(jìn)行雙熒光素酶檢測(cè),結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染含有GT盒子1質(zhì)粒的高表達(dá)KLF8細(xì)胞組活性明顯高于對(duì)照組,轉(zhuǎn)染含GT盒子2和GT盒子3質(zhì)粒的高表達(dá)KLF8細(xì)胞組與對(duì)照組細(xì)胞無(wú)明細(xì)差異。3.3定點(diǎn)突變重組質(zhì)粒對(duì)FHL2啟動(dòng)子活性的影響按照定點(diǎn)突變?cè)噭┖型蛔冊(cè)O(shè)計(jì)突變引物,以重組質(zhì)粒pLuc-55為模板,構(gòu)建突變質(zhì)粒pluc-MT,將野生型和突變型質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入不同KLF8表達(dá)狀態(tài)的腸癌細(xì)胞進(jìn)行雙熒光素酶檢測(cè),顯示：轉(zhuǎn)染野生型質(zhì)粒的高表達(dá)KLF8細(xì)胞組活性明顯高于對(duì)照組,而轉(zhuǎn)染突變型質(zhì)粒的高表達(dá)KLF8細(xì)胞組與對(duì)照組無(wú)明細(xì)差異。4. FHL2siRNA抑制KLF8誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞的EMT和腸癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力,并影響KLF8誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞形態(tài)的變化4.1 FHL2siRNA抑制KLF8誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞的EMTWestern blot證實(shí)：在KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株中轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA可促進(jìn)E-cadherin的表達(dá),并且抑制Vimentin和N-cadherin的表達(dá)。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣證實(shí)：在KLF8穩(wěn)定表達(dá)株中壓低FHL2可促進(jìn)E-cadherin的表達(dá),抑制Vimentin的表達(dá)。4.2 FHL2siRNA抑制KLF8誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增殖試驗(yàn)提示轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA的KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株的OD450s明顯低于轉(zhuǎn)染Scr-RNA的KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定表達(dá)株。對(duì)比0h、12h、24h的劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果,敲低KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株中FHL2的表達(dá)引起腸癌細(xì)胞遷移速度的降低；Transwell試驗(yàn)顯示KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA后的細(xì)胞侵襲率明顯低于KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株。4.3 FHL2低表達(dá)對(duì)KLF8引起的腸癌細(xì)胞形態(tài)變化的影響KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株細(xì)胞呈現(xiàn)出一種細(xì)長(zhǎng)如成纖維細(xì)胞的形態(tài),而對(duì)照細(xì)胞及轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA的KLF8穩(wěn)定表達(dá)株均呈現(xiàn)出圓的和平坦的細(xì)胞形態(tài)。羅丹明結(jié)果顯示：過(guò)表達(dá)KLF8穩(wěn)定細(xì)胞邊緣地帶突出,而且絲狀偽足和板狀偽足是細(xì)胞膜表面的動(dòng)態(tài)特征,與癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān),而轉(zhuǎn)染FHL2-siRNA的KLF8穩(wěn)定表達(dá)株細(xì)胞邊緣未伸出偽足。5.FHL2低表達(dá)對(duì)體內(nèi)KLF8誘導(dǎo)的侵襲轉(zhuǎn)移作用的阻斷5.1 FHL2低表達(dá)減小KLF8誘導(dǎo)的裸鼠皮下腫瘤大小裸鼠皮下成瘤,對(duì)比三組皮下腫瘤大小,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KLF8細(xì)胞組的腫瘤明顯大于轉(zhuǎn)染p cDNA3.1及在KLF8高表達(dá)FHL2低表達(dá)穩(wěn)定株的細(xì)胞組腫瘤；另外腫瘤切片免疫組化結(jié)果證實(shí)：在注射KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株組中,Ki-67和CD105的表達(dá)明顯高于另外兩組。5.2 FHL2低表達(dá)抑制KLF8誘導(dǎo)的體內(nèi)轉(zhuǎn)移脾被膜下注射三組細(xì)胞23天后處死,觀察結(jié)果提示：注射KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株組的肝臟轉(zhuǎn)移瘤比另外兩組較大；qRT-PCR證實(shí)：KLF8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株內(nèi)E.cadherin的mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組及KLF8過(guò)表達(dá)而FHL2低表達(dá)穩(wěn)定株低。結(jié)論1.KLF8促進(jìn)腸癌的EMT及侵襲轉(zhuǎn)移活性；2.FHL2和KLF8在腸癌及轉(zhuǎn)移瘤組織細(xì)胞中的表達(dá)呈正相關(guān)；3.CHIP實(shí)驗(yàn)、雙熒光素酶、基因突變實(shí)驗(yàn)相互印證在FHL2啟動(dòng)子區(qū)域55bp處存在KLF8結(jié)合位點(diǎn)；4.FHL2siRNA抑制KLF8誘導(dǎo)腸癌EMT和腸癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力,并改變其誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)變化；5.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)再次印證FHL2參與調(diào)節(jié)KLF8誘導(dǎo)的EMT和侵襲轉(zhuǎn)移。FHL2為癌基因,KLF8是正向調(diào)節(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)錄因子,FHL2和KLF8的相互作用,在大腸癌EMT及侵襲轉(zhuǎn)移中具有重要作用。KLF8 promotes tumorigenesis, invasion and metastasis of colorectal cancer cells by transcriptional activation of FHL2
【關(guān)鍵詞】：KLF8 FHL2 結(jié)直腸癌 EMT
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-23
• 前言23-26
• 一、實(shí)驗(yàn)材料26-32
• 二、實(shí)驗(yàn)方法32-50
• 三、結(jié)果50-67
• 四、討論67-74
• 五、全文小結(jié)74-75
• 六、參考文獻(xiàn)75-82
• 中英文縮略詞對(duì)照表82-84
• 在讀期間撰寫(xiě)論文情況84-85
• 致謝85-86

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉光明，，姜若蘭;人類(lèi)結(jié)（直）腸癌細(xì)胞膜上表皮生長(zhǎng)因子受體的研究[J];中華腫瘤雜志;1995年02期

2 王志華;康熙雄;張智清;申寶忠;李瑩;;腸癌細(xì)胞BAI1基因表達(dá)的檢測(cè)及其抗腫瘤作用[J];世界華人消化雜志;2003年06期

3 曾慶華 ,湯輝煥;羥基喜樹(shù)堿對(duì)腸癌細(xì)胞體外作用的研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年06期

4 王志華,張智清,申寶忠,李瑩;BAI1基因在腸癌細(xì)胞的表達(dá)及抗血管生成作用[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2003年01期

5 錢(qián)麗娟;許沈華;張宗顯;;鱉甲浸出液對(duì)直腸癌細(xì)胞HR—8348抑制作用的超微結(jié)構(gòu)觀察[J];浙江腫瘤;1993年01期

6 錢(qián)麗娟;許沈華;張宗顯;;鱉甲浸出液對(duì)直腸癌細(xì)胞HR—8348抑制作用的超微結(jié)構(gòu)觀察[J];浙江腫瘤;1993年03期

7 薛英威,耿敬姝,劉曉民,劉立人,高小敏,陳國(guó)林,趙家宏;直腸癌細(xì)胞的流式細(xì)胞儀分析及臨床意義[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年07期

8 滕理送,鄭樹(shù),曹江,蔡心涵,吳金民;野生型p53基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其對(duì)人腸癌細(xì)胞的抑瘤效應(yīng)[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;1995年01期

9 戴德林;人類(lèi)腸癌細(xì)胞內(nèi)染色體早熟濃集[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));1981年06期

10 肖慧杰;李博;申震;謝忠士;劉銅軍;;2-脫氧葡萄糖對(duì)直腸癌細(xì)胞葡萄糖代謝的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 薛英威;耿敬姝;劉曉民;劉立人;高小敏;陳國(guó)林;趙家宏;;直腸癌細(xì)胞的流式分析及臨床意義[A];第六次全國(guó)大腸癌會(huì)議暨中日韓大腸癌會(huì)議論文匯編[C];1998年

2 王繼德;白楊;姜泊;張亞歷;王振宇;;全反式維甲酸通過(guò)啟動(dòng)子區(qū)域的干擾素調(diào)控因子1元件誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞中的XAF1表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

3 葉景佳;陳月蘭;曹江;;HAI-1過(guò)表達(dá)對(duì)腸癌細(xì)胞SW620在體內(nèi)生長(zhǎng)能力的影響[A];第九屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

4 章斌;;用~(18)F-FDG細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)早期評(píng)價(jià)熱化療對(duì)腸癌細(xì)胞HCT-116的殺傷效應(yīng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 衣曉峰　孫理;研究顯示 端粒酶可作為胃腸腫瘤診斷標(biāo)志物[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 湯瑋瑋;Carfilzomib抑制腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)及增加CPT-11化療敏感性的機(jī)制探討[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 方興保;中期因子誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)化療耐藥機(jī)制及其臨床意義的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

2 黃建棟;自然殺傷細(xì)胞聯(lián)合西妥昔單抗對(duì)腸癌細(xì)胞體外作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

3 陳麗妹;Grb2抑制對(duì)腸癌細(xì)胞HT29腫瘤相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

4 王輝;B7-H4分子在腸癌細(xì)胞和間質(zhì)浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞表達(dá)的臨床意義和作用研究[D];蘇州大學(xué);2012年

5 嚴(yán)清青;FHL2參與調(diào)節(jié)KLF8促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 葉景佳;HAI-1過(guò)表達(dá)對(duì)腸癌細(xì)胞SW620生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)能力的影響[D];浙江大學(xué);2005年

7 韓娜;抑制PAR4表達(dá)對(duì)腸癌細(xì)胞SW620惡性表型的影響[D];浙江大學(xué);2011年

8 朱成英;重組腺相關(guān)病毒攜帶CEA感染DC誘導(dǎo)CTL抗lovo直腸癌細(xì)胞活性的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

9 魏家臣;人Fas/FasL基因克隆及轉(zhuǎn)染聯(lián)合順鉑對(duì)直腸癌細(xì)胞殺傷作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

本文編號(hào)：1028158