本文關(guān)鍵詞：胃腸間質(zhì)瘤甲磺酸伊馬替尼耐藥細胞株誘導及其生物學特性

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【摘要】：目的:甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate,IM)是一種蛋白酪氨酸激酶受體抑制劑,是不可切除的原發(fā)胃腸道間質(zhì)瘤(Gastrointestinal Stromal Tumor,GIST)或轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)患者標準的一線靶向治療藥物,它顯著延長了患者的中位生存期。但臨床實踐表明,GIST患者對IM存在廣泛的耐藥現(xiàn)象。本研究擬構(gòu)建對IM繼發(fā)性耐藥的穩(wěn)定細胞株,探索與GIST繼發(fā)性IM耐藥相關(guān)的細胞生物學特征,為構(gòu)建IM耐藥GIST裸鼠模型及耐藥逆轉(zhuǎn)提供新線索。方法:1.體外培養(yǎng)胃腸間質(zhì)瘤細胞株GIST-T1并繪制生長曲線,在生長對數(shù)期加入特定濃度的IM,48小時后以無藥培養(yǎng)基培養(yǎng)至剩余細胞穩(wěn)定傳代并重復(fù)該濃度;細胞穩(wěn)定后以濃度遞增間歇給藥方法對GIST重復(fù)誘導,直到細胞在50μmol/L IM下穩(wěn)定生長并將此濃度下能穩(wěn)定生長的細胞株定義為耐藥的細胞株,命名為GIST-T1 IR。利用細胞半數(shù)抑制濃度(Half Inhibitory Concentration,IC50)以及耐藥指數(shù)(Resistance Index,RI)鑒定細胞的耐藥程度2.比較GIST-T1與GIST-T1 IR的細胞生物學行為包括細胞形態(tài)、細胞周期、倍增時間或增殖倍增速率、細胞遷移能力的差異。結(jié)果:1.成功建立了GIST-T1對IM具有4倍耐藥的細胞株GIST-T1IR。2.研究GIST-T1與GIST-T1 IR的生物學行為差異分析得出:GIST-T1和GIST-T1 IR其細胞倍增時間平均分別為26.59±1.34小時和33.63±2.82小時,倍增時間延長且P0.05,其差異有統(tǒng)計學意義。HE染色GIST-T1細胞狹長呈梭型且體積較大,細胞為單核或者雙核,細胞質(zhì)顆粒較少。GIST-T1 IR體積略小,細胞核深染,多為雙核、三核以上,且核較大,核分裂像明顯增多、核質(zhì)比增加,其細胞質(zhì)顆粒增多。劃痕實驗檢測其遷移能力表明GIST-T1 IR相較于GIST-T1有更強的遷移能力。CCK-8檢測細胞IC50分別為10.5±0.12μmol/L以及42.0±0.32μmol/L增加約為4.0倍,屬于低度耐藥。流式細胞儀檢測細胞周期顯示耐藥細胞相較于親本細胞其S期細胞比例16.46%和20.72%。G0/G1期分別為33.45%和39.88%。G2/M期分別為28.48%和19.01%。GIST-T1 IR的S期增加約4.26%以及G0/G1比例增加約6.43%,而G2/M期比例降低約9.47%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.GIST-T1細胞經(jīng)歷25、37.5、50μmol/L的濃度梯度遞增誘導,歷時六個月,構(gòu)建的GIST-T1 IR為IM低度耐藥細胞株。2.GIST-T1 IR細胞變小、細胞輪廓不規(guī)則欠光滑、邊界不清。細胞核增多且形態(tài)異常、核質(zhì)比核分裂像增加、細胞顆粒增多。3.IM對GIST-T1 IR細胞的抑制能力減弱,GIST-T1 IR在IM環(huán)境中仍具有較強的遷移能力。4.GIST-T1 IR可能因其能量重分配或自我調(diào)節(jié)導致其細胞倍增時間延長、細胞周期改變明顯。
【關(guān)鍵詞】：胃腸間質(zhì)瘤 耐藥細胞株 甲磺酸伊馬替尼 耐藥誘導
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-7
• 前言7-10
• 材料與方法10-18
• 2.1 細胞株10
• 2.2 主要試劑和儀器10-11
• 2.3 主要溶液和培養(yǎng)基的配置11-13
• 2.4 實驗方法13-18
• 2.5 統(tǒng)計學方法18
• 結(jié)果18-26
• 3.1 GIST-T1 IR耐藥細胞株的建立及鑒定18-21
• 3.2 GIST-T1和GIST-T1 IR生物學行為差異分析21-26
• 3.2.1 GIST-T1和GIST-T1 IR形態(tài)學變化21-23
• 3.2.2 細胞生長曲線及倍增時間測定結(jié)果23
• 3.2.3 GIST-T1和GIST-T1 IR細胞周期的測定結(jié)果23-24
• 3.2.4 細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力結(jié)果24-26
• 討論26-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-35
• 綜述35-41
• 參考文獻39-41
• 致謝41

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本文編號：1026040