肝癌患者血清DSA結(jié)合型糖蛋白的定量蛋白質(zhì)組學(xué)和差異糖蛋白L-Selectin的功能研究

發(fā)布時間：2017-10-12 17:04

本文關(guān)鍵詞：肝癌患者血清DSA結(jié)合型糖蛋白的定量蛋白質(zhì)組學(xué)和差異糖蛋白L-Selectin的功能研究

【摘要】：蛋白質(zhì)糖基化是最重要的翻譯后修飾之一,主要涉及信號傳導(dǎo)、蛋白翻譯調(diào)控、蛋白降解、免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡、機(jī)體發(fā)育以及許多疾病的病理進(jìn)程等過程。絕大部分腫瘤標(biāo)志物都屬于糖蛋白,基于糖基化異常的肝癌糖蛋白質(zhì)組學(xué)和糖蛋白標(biāo)志物的研究越來越引起廣泛的關(guān)注和重視。本研究應(yīng)用可以識別多天線和偏二天線糖鏈結(jié)構(gòu)的DSA通過固相親和層析富集糖蛋白,通過iTRAQ-2DLC-MS/MS定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)建立肝癌血清DSA結(jié)合型糖蛋白譜,并從中篩選出差異表達(dá)的糖蛋白。研究并探討L-Selectin糖基化在肝癌細(xì)胞黏附中的作用,為肝癌的轉(zhuǎn)移預(yù)測和預(yù)后評估提供新的思路和線索。第一部分肝癌患者血清DSA結(jié)合型糖蛋白的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究本部分研究對肝癌患者血清DSA結(jié)合型糖蛋白表達(dá)譜進(jìn)行定量分析。收集肝癌患者及正常人血清,每組各10例血清混合,使用ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit去除血清中的白蛋白和IgG。選用特異性結(jié)合多天線和偏二天線糖鏈結(jié)構(gòu)的DSA通過固相親和層析富集糖蛋白,層析得率為5%。酶解所得肽段經(jīng)iTRAQ試劑標(biāo)記,進(jìn)行2DLC-MS/MS定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析。所得數(shù)據(jù)通過搜索SWISS PROT數(shù)據(jù)庫,一共鑒定到76個糖蛋白(95%可信度)。并以鄰近時間點蛋白比值(肝癌組/對照組)1.2或0.8為差異蛋白篩選標(biāo)準(zhǔn),共鑒定出24個差異蛋白, 其中上調(diào)蛋白11個,下調(diào)蛋白13個。GO分類發(fā)現(xiàn)這些差異糖蛋白主要分布于細(xì)胞外基質(zhì),參與調(diào)控外界刺激、防御反應(yīng)、損傷反應(yīng)等生物學(xué)過程。IPA通路分析結(jié)果顯示,這些差異糖蛋白主要涉及受體激活、凝固系統(tǒng)、急性時相反應(yīng)等信號通路。對部分差異糖蛋白(L-Selectin、Gal-3BP、HRG)采用Western blot、Lectin blot、ELISA進(jìn)行驗證,結(jié)果證明質(zhì)譜結(jié)果可靠。第二部分糖基化L-Selectin增加肝癌細(xì)胞黏附能力選擇L-Selectin作后續(xù)研究。本部分研究探討L-Selectin對肝癌細(xì)胞黏附能力的影響。體外添加真核細(xì)胞表達(dá)或原核細(xì)胞表達(dá)的L-Selectin,發(fā)現(xiàn)真核重組的L-Selectin能增加肝癌細(xì)胞黏附能力,而原核重組的L-Selectin對肝癌細(xì)胞黏附能力無影響,說明L-Selectin增加肝癌細(xì)胞黏附能力需要糖鏈的存在。結(jié)論1.利用DSA固相親和層析結(jié)合iTRAQ技術(shù),建立肝癌患者血清DSA結(jié)合型糖蛋白表達(dá)譜,并鑒定得到24個潛在的與肝癌相關(guān)的糖蛋白標(biāo)志物。2.體外添加真核重組或原核重組的L-Selectin,發(fā)現(xiàn)真核重組的L-Selectin能顯著增加肝癌細(xì)胞黏附能力。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 iTRAQ 糖蛋白質(zhì)組學(xué) 糖基化修飾 L-選擇蛋白
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R730.43
【目錄】：