本文關(guān)鍵詞：氯化鈷對Walker256細(xì)胞HSP90的表達(dá)及其抑制劑17-AAG對細(xì)胞凋亡和生長影響

  更多相關(guān)文章： 低氧 Walker256細(xì)胞 HSP90 HSP90抑制劑17-AAG

【摘要】：目的觀察氯化鉆(CoCl2)在體外模擬低氧對肝癌Walker256細(xì)胞形態(tài)的改變及增殖能力的影響,進(jìn)一步確立合適的肝癌Walker256細(xì)胞的體外缺氧模型。并在該缺氧模型基礎(chǔ)上觀察不同程度缺氧對肝癌Walker256細(xì)胞中HSP90蛋白的表達(dá)能力的影響,并探討可能的影響機(jī)制。方法1.倒置顯微鏡法觀察不同濃度的CoCl2 (0、50、100、200、300、500nmol/L)和不同濃度的17-AAG (0、0.1、0.25、0.5、1.2μmol/L)分別處理肝癌Walker256細(xì)胞48h后,觀察其細(xì)胞形態(tài)的改變。2.MTT法測定不同濃度COCl2 (0、50、100、200、300、500timol/L)和不同濃度的17-AAG抑制劑(0、0.1、0.25、0.5、1.2μmol/L)分別經(jīng)不同的時(shí)間段處理肝癌Walker256細(xì)胞,來檢測其增殖能力的影響。3.蛋白免疫印跡(Western Blot)法分別檢測不同濃度的CoCl2 (0、50、100、200、300、 500μmol/L)和0.5μmol/L 17-AAG作用于Walker256細(xì)胞后,對細(xì)胞中HSP90及Bcl-2表達(dá)的影響。4.Annexin- FITC/PI流式細(xì)胞雙染技術(shù)檢測17-AAG對肝癌Walker256細(xì)胞的凋亡的影響。5.用Walker256細(xì)胞的細(xì)胞懸液建立大鼠種植瘤模型,并將成瘤實(shí)驗(yàn)大鼠分為經(jīng)腹腔給予17-AAG和不給予17-AAG兩組(各組15只大鼠),觀測比較兩組大鼠種植瘤的平均體積。結(jié)果1.不同濃度的CoCl2對細(xì)胞具有一定程度的增殖抑制作用。300μmol/L和500μmol/L CoCl2作用于細(xì)胞,鏡下觀察可見大量細(xì)胞碎片,細(xì)胞膜出現(xiàn)明顯的皺縮。Western Blot結(jié)果顯示CoCl2處理細(xì)胞48h后,能夠上調(diào)HSP90的表達(dá),該作用具有濃度依賴性。2.不同濃度的HSP90抑制劑17-AAG對Walker256細(xì)胞的增殖抑制作用具有時(shí)間和劑量的依賴性。17-AAG對細(xì)胞形態(tài)也有影響,對照組Walker256細(xì)胞飽滿呈圓形,胞質(zhì)豐富,大小均一,包膜完整,而經(jīng)17-AAG作用48 h后的Walker256細(xì)胞則明顯減少,細(xì)胞邊緣模糊、形態(tài)差,部分細(xì)胞包膜破裂。Annexin-FITC/PI染色法檢測分析結(jié)果顯示：①與常氧組相比低氧組細(xì)胞凋亡比率無明顯差異(P0.05)；②與常氧組相比較17-AAG+常氧組細(xì)胞凋亡比率增加(P0.05)；③與低氧組相比17-AAG+低氧組細(xì)胞凋亡比率增加(P0.05)；④與17-AAG+低氧組相比17-AAG+常氧組細(xì)胞凋亡比率增加((P0.05)。同時(shí)通過Wester Blot檢測分析結(jié)果顯示：①與常氧組相比,低氧組的HSP90和Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)；②與常氧組相比,17-AAG+常氧組的HSP90和Bcl-2表達(dá)受到抑制(P0.05)；③與低氧組相比,17-AAG+低氧組的HSP90和Bcl-2表達(dá)也受到抑制(P0.05)；④17-AAG+低氧組與17-AAG+常氧組相比,HSP90和Bcl-2的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.17-AAG抑制劑能夠明顯抑制大鼠種植瘤的生長,隨著給藥時(shí)間的延長,發(fā)現(xiàn)給藥組大鼠種植瘤生長較對照組明顯緩慢,對照組大鼠種瘤平均體積始終呈增長的趨勢。結(jié)論1.不同濃度的CoCl2能誘導(dǎo)HSP90的表達(dá),當(dāng)CoCI2在200μmol/L的劑量時(shí)誘導(dǎo)作用最為明顯。2.HSP90抑制劑17-AAG能夠明顯抑制大鼠種植瘤的生長。3.HSP90抑制劑17-AAG能夠明顯的促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,因而推測其機(jī)制可能是17-AAG與HSP90結(jié)合后,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá),從而使腫瘤凋亡明顯增加。
【關(guān)鍵詞】：低氧 Walker256細(xì)胞 HSP90 HSP90抑制劑17-AAG
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 英文縮略詞表10-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-23
• 1. 材料試劑與主要的儀器設(shè)備15-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器15
• 1.2 主要的試劑與抗體15-16
• 1.3 主要的實(shí)驗(yàn)儀器16
• 1.4 試劑的配制16-17
• 2. 細(xì)胞的處理17-18
• 2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇17-18
• 2.2 細(xì)胞的換液與傳代18
• 2.3 細(xì)胞的凍存18
• 3. MTT法測定細(xì)胞增殖能力的影響18-19
• 3.1 實(shí)驗(yàn)分組18-19
• 3.2 實(shí)驗(yàn)步驟19
• 3.3 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)19
• 4. Western Blot檢測分析19-22
• 4.1 細(xì)胞總蛋白的提取19-20
• 4.2 細(xì)胞總蛋白含量的測定(BCA法)20
• 4.3 灌膠與上樣20-21
• 4.4 電泳21
• 4.5 轉(zhuǎn)膜21
• 4.6 免疫反應(yīng)21
• 4.7 顯影、定影21-22
• 4.8 凝膠圖像分析22
• 5. 細(xì)胞凋亡觀察與檢測22
• 6. 大鼠種植瘤模型的建立22
• 7. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 結(jié)果23-33
• 1. 氯化鈷對細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響23-24
• 2. 氯化鈷對細(xì)胞增殖能力的變化24-25
• 3. 低氧環(huán)境下CoCl_2誘導(dǎo)HSP90的表達(dá)25-26
• 4. HSP90抑制劑17-AAG對細(xì)胞的增殖抑制作用26-27
• 5. 17-AAG對Walker256細(xì)胞形態(tài)的影響27-28
• 6. 低氧環(huán)境下17-AAG對Walker256細(xì)胞凋亡的影響28-30
• 7. 17-AAG對Walker256細(xì)胞HSP90和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響30-31
• 8. 大鼠種植瘤模型的建立31
• 9. 給予17-AAG后對照組和給藥組大鼠腫瘤的生長情況31-33
• 討論33-38
• 1. HSP90基因結(jié)構(gòu)與功能33-34
• 2. HSP90在腫瘤中的作用34-35
• 3. 低氧可誘導(dǎo)HSP90的表達(dá)35
• 4. HSP90抑制劑17-AAG的作用及干預(yù)實(shí)驗(yàn)35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述：熱休克蛋白90與惡性腫瘤的研究進(jìn)展42-50
• 1、HSP90的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性42
• 2、HSP90的功能42-43
• 3、HSP90與腫瘤的關(guān)系43
• 4、HSP90與腫瘤耐藥性43-44
• 5、HSP90在腫瘤治療中的應(yīng)用44-46
• 6、展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50-51
• 致謝51-52

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁志山，沃興德;細(xì)胞調(diào)亡與動(dòng)脈粥樣硬化[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;1998年01期

2 李妍;紀(jì)朋艷;張巍;彭順利;呂士杰;;柴胡皂苷d對SH-SY5Y細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)及凋亡的影響[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

3 嚴(yán)銀芳,陳曉,楊小清,閆遠(yuǎn)芳;流行性腮腺炎病毒減毒株S_(79)在幾株腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中增殖的比較研究[J];腫瘤;2003年06期

4 劉功讓;管培中;宋淑亮;逯素梅;馮玉新;辛華;;絞股藍(lán)多糖對四氯化碳損傷HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用[J];山東醫(yī)藥;2007年31期

5 肖東杰,汪運(yùn)山;B細(xì)胞被動(dòng)凋亡的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊);1998年05期

6 張運(yùn)濤,劉凡,姜茹,谷仲平,汪涌,張順,劉榮福,李玉梅;外源性p27與GRC-1細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞凋亡關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年09期

7 石和元;王平;胡永年;邱幸凡;田代志;;溫膽湯改良方對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)AD細(xì)胞模型bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響[J];世界科學(xué)技術(shù);2005年06期

8 孟威宏;王強(qiáng);王虹蛟;顏煒群;;牛胰蛋白酶抑制劑研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2008年04期

9 鐘民濤;王曉麗;李星云;劉磊;劉穎麗;張偉;黃敏;;香菇C91-3菌絲發(fā)酵蛋白對H22腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤機(jī)制的初探[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年09期

10 張晨,黃世林,馬東初,孫英慧,馬小鋒;硫化砷誘導(dǎo)NB_4細(xì)胞調(diào)亡[J];白血病;2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒萍;;血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞來源膜微粒的特征及生物學(xué)作用研究[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 蔣爭凡;卞婕;翟中和;;非細(xì)胞體系誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞核凋亡的超微觀察[A];第十次全國電子顯微學(xué)會議論文集（Ⅰ）[C];1998年

3 陳衛(wèi)銀;祝彼得;劉福友;馮雪梅;;參芎滴丸對急性腦梗死模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 謝晶日;李威;梁國英;楊豐源;;胃靈顆粒對胃癌前病變細(xì)胞調(diào)亡基因影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會第十八次學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2006年

5 綦淑芬;萬瑞香;姚如勇;;扇貝多肽對Hela細(xì)胞在紫外線損傷下的保護(hù)作用[A];第五屆全國自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2000年

6 吳李君;裴蓓;王順昌;王軍;湯明禮;;砷和鎘暴露誘導(dǎo)秀麗小桿線蟲生殖腺細(xì)胞調(diào)亡及其信號通路研究[A];中國毒理學(xué)會第二屆全國中青年學(xué)者科技論壇會議論文集[C];2007年

7 余珂;王敬賢;周炳升;;多溴聯(lián)苯醚誘導(dǎo)人神經(jīng)SK-N-SH細(xì)胞調(diào)亡的機(jī)理[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

8 冉新澤;鄭懷恩;王艾平;王鋒超;韓京;;他汀對內(nèi)皮細(xì)胞輻射損傷組織因子與細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中國毒理學(xué)會放射毒理專業(yè)委員會第七次、中國毒理學(xué)會免疫毒理專業(yè)委員會第五次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致突專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致畸專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致癌專業(yè)委員會第二次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

9 崔承彬;閆少羽;蔡兵;趙慶春;姚新生;曲戈霞;;黑果黃皮Clausena dunniana Levl中咔唑生物堿類新細(xì)胞周期抑制劑及細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)劑的核磁共振研究[A];第十一屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2000年

10 吳耀輝;鄒萍;;Sunrivin基因沉默對K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張?zhí)锟?細(xì)胞調(diào)亡的意義[N];中國人口報(bào);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃風(fēng)迎;細(xì)胞松馳素D聚乙二醇脂質(zhì)體抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究[D];海南大學(xué);2012年

2 楊超;雞NK細(xì)胞的分離鑒定及靶細(xì)胞篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

3 陳晶晶;TIP30感受細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)p53依賴的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 李詠;蘋果酸、γ-氨基丁酸對Hela細(xì)胞端粒酶活性影響的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 余志堅(jiān);P糖蛋白對MCF-7/ADR細(xì)胞輻射敏感性負(fù)調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

6 孫毅;亞硒酸鈉抑制K562細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 聶建增;家蠅蛹凝集素對HepG2細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)理研究[D];天津科技大學(xué);2012年

8 吳云霞;光動(dòng)力學(xué)療法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制的初步研究[D];華南師范大學(xué);2005年

9 彭坤;二甲基亞砜抑制培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2004年

10 殷楚云;急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系THP-1側(cè)群細(xì)胞的分選、鑒定與富集[D];鄭州大學(xué);2012年

，

本文編號：1013984