本文關(guān)鍵詞：桔梗皂苷D抑制人多發(fā)性骨髓瘤（RPMI8226）增殖及其機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:研究桔梗皂苷D(PD)體外對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生長的影響,探討其抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制是否通過周期阻滯及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一種血液系統(tǒng)惡性腫瘤,發(fā)病率約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%,是第二大血液系統(tǒng)腫瘤。MM好發(fā)于中老年,但近年有發(fā)病率增高、發(fā)病年齡提前的趨勢(shì)。MM分子機(jī)制復(fù)雜、細(xì)胞遺傳學(xué)異質(zhì)性較高并具有復(fù)雜的克隆演變過程。隨著蛋白酶體抑制劑硼替佐米和免疫抑制劑沙利度胺、來那度胺等新藥的出現(xiàn),明顯提高了年輕MM患者的生存期,但仍然無法克服耐藥、復(fù)發(fā)的結(jié)局,且相當(dāng)一部分患者常因經(jīng)濟(jì)原因或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)無法耐受上述治療。MM仍被視為不可治愈的疾病,因此尋找高效、低毒、廉價(jià)的抗MM新藥尤為重要。我國豐富的藥用植物資源,幾千年在實(shí)踐中積累了豐富的經(jīng)驗(yàn),與化學(xué)合成藥物相比有結(jié)構(gòu)獨(dú)特、生物活性廣泛、不易耐藥且取材方便、價(jià)格低廉及毒副作用小等優(yōu)點(diǎn),中藥有效成分抗腫瘤的研究己成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn),將為人類抗腫瘤的治療開辟新的途徑。桔梗皂苷D(platycodin D,PD)是我國傳統(tǒng)中藥材桔梗的主要活性成分,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其除具有鎮(zhèn)咳祛痰、抗炎止痛、保肝、抗氧化、降糖降脂、免疫調(diào)節(jié)等多種作用外,還具有廣泛的抗腫瘤活性。體外試驗(yàn)證實(shí),PD能有效抑制肝癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、肺癌、白血病等多種惡性腫瘤細(xì)胞生長,且對(duì)正常組織細(xì)胞無明顯影響,其機(jī)制主要包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期,下調(diào)端粒酶,抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移及與化療藥產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)等,極有可能開發(fā)成為新的抗癌藥物。但是,PD對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞是否具有抑制作用,目前尚未見文獻(xiàn)資料報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察PD對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞RPMI8226生長的影響,并從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及周期阻滯等方面探討其抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制,為PD用于臨床治療多發(fā)性骨髓瘤提供理論實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)人多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞,利用MTT比色法檢測(cè)不同濃度PD作用細(xì)胞24h、48h、72h后,對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PD作用24h后細(xì)胞的凋亡率;碘化丙啶(PI)單染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PD作用24h后細(xì)胞周期分布情況;Western blot技術(shù)檢測(cè)PD對(duì)細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶1(CDK1)表達(dá)水平及磷酸化的影響。結(jié)果:1 MTT比色法檢測(cè)RPMI8226細(xì)胞存活率:PD能明顯抑制RPMI8226細(xì)胞的增殖,在10-60μM范圍內(nèi),其抑制作用呈時(shí)間、劑量依賴性,24h、48h和72h的半數(shù)抑制濃度(IC50值)分別為20.75μM、16.03μM和14.54μM。2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡(Annexin V-FITC/PI雙染):10、15、20μM PD處理RPMI8226細(xì)胞24 h后,與對(duì)照組比較,細(xì)胞凋亡率明顯增加,分別為12.50%±0.76%、16.40%±0.95%和22.73±0.21%(P0.05,對(duì)照組7.47%±0.95%),隨著藥物濃度的增加,存活細(xì)胞逐漸減少,凋亡細(xì)胞及死亡細(xì)胞逐漸增加。3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期(PI單染):10、15、20μM PD作用細(xì)胞24 h后,與對(duì)照組比較,G2/M期細(xì)胞比例顯著增加,分別為8.61%±0.90%、17.11%±3.65%和54.63%±9.25%(P0.01,對(duì)照組0.67%±0.53%),隨著藥物濃度的增加,G2/M期細(xì)胞比例逐漸增加。4 Western blot檢測(cè)蛋白質(zhì)CDK1和磷酸化CDK1(Thr 14):經(jīng)不同濃度PD干預(yù)后,RPMI8226細(xì)胞內(nèi)與G2/M期阻滯相關(guān)的CDK1蛋白表達(dá)水平無明顯變化,而CDK1的磷酸化水平逐漸升高。結(jié)論:1 PD具有抑制人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖的效應(yīng),在一定范圍內(nèi),呈時(shí)間-劑量依賴性。2 PD對(duì)多發(fā)性骨髓瘤增殖抑制作用與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及引起細(xì)胞G2/M期阻滯有關(guān)。3 PD通過抑制CDK1去磷酸化,從而抑制其活化,將細(xì)胞阻滯于G2/M期。
【關(guān)鍵詞】：桔梗皂苷D 多發(fā)性骨髓瘤 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期阻滯 磷酸化CDK1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-26
• 附表26-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述 桔梗皂苷D的抗腫瘤作用研究現(xiàn)狀34-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 夏金榮;趙東強(qiáng);;細(xì)胞凋亡及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡抵抗與惡性腫瘤[J];臨床薈萃;2005年24期

2 陳聰穎,陸陽,陳澤乃;天然產(chǎn)物在抗癌藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)中的作用[J];中草藥;1999年02期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳葆華;桔梗皂苷D抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1011344